1 前言

腫瘤標(biāo)志物作為肺癌兩種主要亞型[非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)和小細(xì)胞肺癌(small cell lung cancer, SCLC)]的鑒別手段,已經(jīng)在肺癌患者中得到廣泛研究,進(jìn)而改善了診斷和治療選擇[1-5].NSCLC占所有新發(fā)肺癌病例的80%左右,SCLC占20%左右.SCLC不同于NSCLC,其具有神經(jīng)內(nèi)分泌分化、較高腫瘤生長速度和較早轉(zhuǎn)移[6,7],因此需要采取不同的治療方法.在這兩種亞型中,NSCLC更有可能在早期被診斷,此時手術(shù)可以提供最好的治愈機(jī)會[8].SCLC的早期診斷非常少見,意味著手術(shù)并非常見治療手段,但其對放射治療和化療高度敏感[7].SCLC患者常復(fù)發(fā),然而近年來,其5年生存率保持不變[9].初診時,肺癌亞型的鑒別診斷對于確保采取適當(dāng)治療干預(yù)至關(guān)重要.

腫瘤活檢是肺癌組織學(xué)鑒別診斷的重要組成部分.然而,由于許多SCLC存在于粘膜下層,組織精確取樣可能存在困難,所以活檢無法幫助疾病早期發(fā)現(xiàn)[10].當(dāng)被診斷為處于疾病局限期時,約20%的SCLC患者可以通過接受積極化學(xué)治療和放射治療實現(xiàn)長期生存率,而確診為晚期時,僅為5%[10].血漿或血清樣本中腫瘤標(biāo)志物的分析較組織學(xué)鑒別診斷明顯更具優(yōu)勢,包括發(fā)現(xiàn)早期SCLC的能力,以及提高生存率的機(jī)會.

神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)和胃泌素釋放肽前體(ProGRP)已被證明是SCLC最有價值的腫瘤標(biāo)志物[11,12].雖然長久以來,NSE作為被推薦的SCLC腫瘤標(biāo)志物[13],在組織檢查中NSE也可以染色高達(dá)80% NSCLC組織,但僅20%-30% NSCLC患者的血清中NSE升高[14].此外,NSE敏感性較低,特別是對于病變局限于一側(cè)胸腔或同側(cè)縱隔的患者[15].由于NSE存在于血小板和紅細(xì)胞中,因此必須排除溶血樣本,并且樣本的快速儲存至關(guān)重要[14].ProGRP可準(zhǔn)確鑒別NSCLC和SCLC[16,17],ProGRP濃度在其他惡性疾病或良性病癥中很少升高,而在腎功能不全、肺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(NET)和甲狀腺髓樣癌(MCT)患者中表現(xiàn)高濃度[16-22].

在2 0 0 9年,報道了首個全自動化P r o G R P ARCHITECT檢測(Abbott Laboratories, Wiesbaden,Germany)的評估[23].由于在ARCHITECT檢測中,ProGRP在血清中穩(wěn)定性差,研究認(rèn)為原因是凝血酶誘導(dǎo)的蛋白水解,因此將血漿樣本作為推薦的源材料[24,25].Elecsys? ProGRP檢測(Roche Diagnostics GmbH, Penzberg,Germany)是一種新的免疫檢測法,旨在定量測定人血清和血漿中ProGRP的水平.由于Elecsys? ProGRP檢測中的兩種單克隆抗體與相對耐內(nèi)切蛋白酶酶切的ProGRP肽表位結(jié)合[16,17,26](補(bǔ)充圖S1),因此可以使用血清樣本以及血漿樣本.在本文中,我們報告了歐洲和中國多個中心的Elecsys? ProGRP檢測的技術(shù)和臨床性能.

2 材料和方法

2012年8月-2013年9月期間,在3個歐洲研究中心(Amsterdam、Barcelona和Bonn)和北京的2個中國研究中心[北京協(xié)和醫(yī)院(PUMCH)和北京宣武醫(yī)院]對Elecsys?ProGRP檢測進(jìn)行了評估.在臨床研究工作開始之前,從各機(jī)構(gòu)獲得了倫理批準(zhǔn)/豁免.所有研究中心均遵照赫爾辛基宣言(修訂版Tokyo、Venice、Hong Kong和Fortaleza 2013)和國際協(xié)調(diào)會議關(guān)于臨床試驗管理規(guī)范進(jìn)行研究.該研究的目的是評估Elecsys? ProGRP檢測在不精密度、穩(wěn)定性、方法學(xué)比較和SCLC鑒別診斷能力方面的性能.

2.1 檢測說明 Elecsys? ProGRP檢測是一種電化學(xué)發(fā)光免疫檢測,其使用生物素化的ProGRP特異性小鼠單克隆抗體和釕標(biāo)記的ProGRP特異性小鼠單克隆抗體捕獲和檢測人血清和血漿中的ProGRP.該檢測采用ProGRP CalSet(Roche Diagnostics)進(jìn)行定標(biāo),并可溯源至ARCHITECT ProGRP檢測.使用兩個水平的PreciControl ProGRP(Roche Diagnostics)進(jìn)行質(zhì)量控制.定標(biāo)液和質(zhì)控液均包含重組ProGRP.

2.2 樣本來源、制備和處理 樣本均來自先前未經(jīng)治療的活動性病變患者,其具有足夠的樣本用于分析.未進(jìn)一步使用人口學(xué)或組織學(xué)選擇標(biāo)準(zhǔn).肺癌組織學(xué)分類根據(jù)1999年世界衛(wèi)生組織指南[27].SCLC和NSCLC的鑒別診斷基于形態(tài)學(xué)特征以及腫瘤CD56陽性和/或突觸素免疫組化.根據(jù)國際指南確定肺癌分期(TNM)[28].

所有研究中心均采集樣本并進(jìn)行檢測.另外一個德國中心(Institut für Klinische Pharmakologie GmbH, Kiel)提供了來自表觀正常人群的樣本,作為參考隊列.由于SCLC在患者群體中的患病率低,鑒別診斷主要基于來自歐洲樣本庫的患者血清樣本,而在中國樣本為前瞻性采集(2013年1月-9月).

所有3個歐洲中心和PUMCH均使用血清進(jìn)行臨床評價.宣武醫(yī)院使用EDTA-K2原始管進(jìn)行血漿采集.在Bonn和Amsterdam使用EDTA-K2和血清分離管(SST)進(jìn)行穩(wěn)定性實驗.此外,Amsterdam在本實驗中使用快速血清管(RST)進(jìn)行血清采樣.RST的內(nèi)壁涂有凝血酶,以促進(jìn)快速凝血.所有研究均在cobas? e411和e601分析儀上進(jìn)行.

2.3 統(tǒng)計分析 使用WinCAEv(基于Windows的計算機(jī)輔助評價)軟件程序采集所有分析數(shù)據(jù).使用MACRO軟件程序收集人口統(tǒng)計學(xué)和臨床資料.在Roche Diagnostics Penzberg的生物統(tǒng)計學(xué)部門采用SAS(統(tǒng)計分析軟件9.2版)和R(版本2.13.2)進(jìn)行所有使用臨床信息的統(tǒng)計分析.對于目視檢查主數(shù)據(jù)集確定的異常值,進(jìn)行重新測定.

2.4 技術(shù)評估

2.4.1 實驗室間調(diào)查 通過 Roche R&D(-30 pg/mL、-200 pg/mL和-1,500 pg/mL)制備3個EDTA血漿樣本池,并分發(fā)到所有5個研究中心,以評估這3個濃度范圍內(nèi)實驗室間回收率和日間變異性差異.同時,PreciControl ProGRP的兩個水平也被用作樣本材料.在各實驗室中,10天內(nèi)單次測定每個樣本.每個樣本的回收率百分比計算為測定濃度/所有實驗室中位數(shù)X100.

2.4.2 根據(jù)臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會EP5-A2的不精密度 通過臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(CLSI)EP5-A2指南[29]評估不精密度.由歐洲中心制備的三個樣本池的目標(biāo)濃度范圍分別為7 pg/mL-60 pg/mL、61 pg/mL-1000 pg/mL和1,001 pg/mL-5,000 pg/mL.取約27 mL的血清或血漿,制備84X300 μL等分試樣.將樣本在-20oC下儲存,并在相應(yīng)的測定日使用.通過根據(jù)CLSI EP5-A2方差分量模型對數(shù)據(jù)進(jìn)行建模,獲得了重復(fù)性和中間精密度估值.以日間、批間和重復(fù)性方差分量進(jìn)行建模.基于總方差估計,給出了中間精密度估值,作為變異系數(shù)(CV).

2.4.3 樣本材料的穩(wěn)定性 經(jīng)機(jī)構(gòu)審查委員會批準(zhǔn),從提供知情同意書的患者處獲得相應(yīng)的血清和血漿樣本.理想狀態(tài)下,樣本中ProGRP的濃度超過100 pg/mL;然而,由于獲得知情同意書和樣本存在困難,本研究納入了一些低于此濃度的樣本.至少從每位患者體內(nèi)獲取3 mL血清和3 mL血漿,以制備9份300 μL等分試樣.在取樣1 h內(nèi)進(jìn)行測定,作為基線測定值,并室溫下1 h、2 h、3 h和4 h后,以及在2oC-8oC下3 h、6 h、24 h和48 h分別進(jìn)行測定.首先在ARCHITECT儀器上進(jìn)行測定,然后在30 min內(nèi),在cobas?儀器上進(jìn)行測定.在同一批次中檢測血清和血漿.回收率百分比計算為實際濃度/基線濃度X100.

2.4.4 方法學(xué)比較 使用ARCHITECT ProGRP檢測和Fujirebio微量滴定板酶聯(lián)免疫吸附劑ProGRP檢測(Fujirebio Diagnostics, Japan)獲得比較結(jié)果.理想情況下,血漿樣本應(yīng)用于ARCHITECT儀器,以及血清樣本用于Fujirebio檢測.誤差率為1的Deming回歸用于估計回歸線[30].通過Bootstrap方法獲得截距和斜率的置信區(qū)間(CI)[31].

2.4.5 矩陣比較 從2012年第三季度-2013年第一季度的常規(guī)取樣收集了匹配的血清和血漿標(biāo)本,并在2013年第一季度冷凍至分批測定.數(shù)周采集樣本以涵蓋整個測量范圍(3 pg/mL-5,000 pg/mL).

3 臨床評估

3.1 參考范圍確定 對于ProGRP參考范圍計算,根據(jù)基于對健康檢查問卷的回答以及葡萄糖、膽堿酯酶、肌酐、C-反應(yīng)蛋白和血紅蛋白水平等基礎(chǔ)臨床化學(xué)參數(shù)的結(jié)果,在來自5個歐洲中心和2個中國中心的健康人群隊列,以及從Kiel中心招募的表觀正常人群隊列中進(jìn)行比較.在Kiel中心采集了三種樣本類型:血清、EDTA-K2血漿和肝素鋰血漿.來自Kiel的樣本在-80oC下儲存于Roche Penzberg樣本庫中,并在Bonn進(jìn)行測定.Amsterdam、Barcelona和Bonn僅采集血清樣本.中國PUMCH采集血清和EDTA-K3血漿樣本,而宣武醫(yī)院僅采集EDTA-K2血漿樣本.在R軟件中使用類型=3方法計算分位數(shù).關(guān)于Hahn和Meeker的方法,CI是非參數(shù)[32].

3.2 鑒別診斷 NSCLC和SCLC惡性病變隊列是主要焦點(diǎn),表觀正常人群、肺部良性病變患者(如慢性阻塞性肺病、結(jié)核、肺炎和哮喘)、其他良性疾病患者(即急性和慢性炎性、肝、腎、自身免疫和代謝疾病)和其他惡性疾病患者作為對照隊列.對于惡性病變隊列,必須進(jìn)行臨床分期(cTNM)或病理分期(pTNM)以及國際抗癌聯(lián)盟(UICC)分期,并記錄轉(zhuǎn)移數(shù)量和轉(zhuǎn)移部位.還應(yīng)記錄取樣日期、初診日期、組織學(xué)結(jié)果、人口數(shù)據(jù)和吸煙習(xí)慣(目前吸煙者、過去吸煙者或從不吸煙者).

平行測量肌酐與ProGRP,慢性腎臟病流行病學(xué)協(xié)作組(CKD-EPI)公式被[33,34]用于估算腎小球濾過率(eGFR),以闡明腎功能不全對ProGRP濃度的影響.選擇≥0 mL/min/1.73 m2(CKD 3期)作為截斷值,因為在CKD3期以上患者中ProGRP水平顯著升高(補(bǔ)充圖S2).統(tǒng)計分析基于受試者工作特征(ROC)曲線和曲線下面積(AUC)計算,其中CI基于DeLong方法[35].還計算了特異性為95%時的敏感性,以及敏感性為95%時的特異性.

4 結(jié)果

4.1 技術(shù)評估 實驗室間研究合并樣本的CV范圍為1.2%-4.9%.約-30 pg/mL和-200 pg/mL合并樣本的回收率范圍為94%-106%.實驗室間的-1,500 pg/mL樣本的回收率變化較大,Bonn中心(104%)和Amsterdam中心(85%)之間的回收率差異大約為20%.

3個歐洲中心人血清池樣本和2個對照樣本的中間不精密度范圍為2.2%(95%CI: 1.8%-2.7%)至6.0%(95%CI:4.7%-8.4%)CV(補(bǔ)充表S1),與報道的ARCHITECT ProGRP檢測(血清和血漿CV為2.2%-5.7%)數(shù)據(jù)相當(dāng)[23].批內(nèi)不精密度范圍為1.1%(95%CI: 0.9%-1.4%)至3.0%(95%CI:2.5%-3.8%)CV.

在來自Amsterdam的9個樣本和來自Bonn的10個樣本中評價樣本穩(wěn)定性,ProGRP濃度范圍為18 pg/mL-4,259 pg/mL.使用血漿和血清樣本在cobas?檢測上獲得了同樣的回收率 ,當(dāng)存儲在室溫下超過4 h（在4 h時的回收率中位數(shù)：血漿為98%,SST為102%,RST樣本為99%)或在2oC-8oC下超過48 h(在48 h時的回收率中位數(shù):血漿為97%,SST為101%,RST樣本為101%)(圖1).在-20oC下保存12周的血漿和血清樣本中也證明了ProGRP良好的穩(wěn)定性(補(bǔ)充圖S3).相反,使用ARCHITECT檢測,血清中ProGRP隨時間推移回收率降低(在4 h時的回收率中位數(shù):SST為90%,RST樣本為69%),正如之前所報道,血漿和血清樣本的結(jié)果不相當(dāng)[24].

Fig 1 Median ProGRP recovery frompatient samples taken in Amsterdam (n=9) and Bonn (n=10),incubated at room temperature over 4 hours (A, C, E) or at 2 °C-8 °C over 48 hours (B, D, F) and measured on the cobas? or ARCHITECT instruments.Note: Reprinted with permission from the copyright holder ?2015 Elsevier B.V.圖 1 在Amsterdam(n=9)和Bonn(n=10)獲得的患者樣本的ProGRP回收率中位率,在室溫下孵育超過4 h(A、C、E)或2 °C-8 ℃下孵育超過48 h(B、D、F),并在cobas?或ARCHITECT儀器上測定.注:本圖得到版權(quán)所有者?2 0 15 Elsevier B.V.復(fù)制許可

Fig 2 A: Method comparison: ARCHITECT versus cobas? using plasma samples up to a ProGRP concentration of 500 pg/mL; B: Matrix comparison: serum versus plasma samples on cobas?; C: Method comparison: Fujirebio versus cobas? using serum samples.Note: Reprinted with permission from the copyright holder ?2015 Elsevier B.V.圖 2 A:方法比較:使用血漿樣本的ARCHITECT與cobas?比較,直到ProGRP濃度為500 pg/mL;B:矩陣比較:在cobas?上的血清與血漿樣本比較;C:方法比較:使用血清樣本的Fujirebio與cobas?比較.注:本圖得到版權(quán)所有者?2015 Elsevier B.V.復(fù)制許可

Fig 3 Reference range distribution of ProGRP in serum and plasma samples from healthy individuals for all sites. The yellow crosses represent the mean.Note: Reprinted with permission from the copyright holder ?2015 Elsevier B.V.圖 3 在所有中心健康人群的血清和血漿樣本中ProGRP的參考范圍分布.黃色十字架代表平均值.注:本圖得到版權(quán)所有者?2015 Elsevier B.V.復(fù)制許可

使用血漿樣本的ProGRP濃度高達(dá)500 pg/mL,ARCHITECT和cobas?檢測的相關(guān)性如圖2A所示.所有中95心合并的斜率和截距分別為1.02(953%91CI: 0.96-1.08)和-2.72 pg/mL(95%CI: -5.22-0.66),相關(guān)系數(shù)分別為0.96(補(bǔ)充表S2).在3 pg/mL-5,000 pg/mL的整個測定范圍內(nèi),所有中心報告了類似的發(fā)現(xiàn)(數(shù)據(jù)未顯示).在所有中心,在cobas?檢測中,ProGRP濃度高達(dá)500 pg/mL時,血清和血漿樣本間的相關(guān)性為:斜率為0.93(95%CI: 0.89-0.98),截距為2.35 pg/mL(95%CI: -0.21-4.60),相關(guān)系數(shù)為0.97(圖2B).在Barcelona中心,矩陣比較的斜率顯著高于其他中心.其原因未知,但認(rèn)為與臨床無關(guān),并突出了現(xiàn)場檢測的變異性.通過使用ProGRP濃度為500 pg/mL的血清樣本,可以獲得Fujirebio和cobas?檢測之間相關(guān)性的可比結(jié)果(圖2c).在所有中心,斜率為1.33(95%CI: 1.15-1.47),截距為-4.18 pg/mL(95%CI: -10.50-2.95),相關(guān)系數(shù)為0.84.

4.2 臨床評估 來自每個患者隊列和每個中心的樣本數(shù)顯示在表1中.

參考范圍隊列由平均年齡為48歲[標(biāo)準(zhǔn)差(SD)16歲]的1,085例表觀正常人群組成.NSCLC隊列包括852例平均年齡64歲(SD 12歲)的患者,SCLC隊列由207例平均年齡62歲(SD 11歲)的患者組成.

在參考范圍隊列中,肝素鋰血漿中第95百分位數(shù)ProGRP濃度為68 pg/mL(95%CI: 63.7-74.5),EDTA血漿中為60 pg/mL(95%CI: 55.8-65.3),血清樣本中為66 pg/mL(95%CI: 62.4-72.6)(圖3).這些數(shù)據(jù)與ARCHITECT檢測(血清為63 pg/mL;EDTA血漿為65 pg/mL)的參考范圍值相當(dāng)[36],但高于之前報道的Fujirebio檢測(血清中43 pg/mL)[37].在歐洲和中國中心之間沒有觀察到ProGRP濃度中位數(shù)的顯著差異.

ProGRP在SCLC和NSCLC之間表現(xiàn)出良好的鑒別診斷能力,在NSCLC隊列中AUC為0.90(95%CI: 0.87-0.93),敏感性為78.3%,特異性為95%.ProGRP的分布如圖4所示.雖然SCLC隊列中的ProGRP濃度在中國中心中趨于更高(數(shù)據(jù)未顯示),但是歐洲和中國中心的NSCLC和SCLC隊列中沒有觀察到臨床相關(guān)的中心效應(yīng).未注意到年齡、性別或吸煙習(xí)慣對ProGRP濃度的臨床相關(guān)影響(數(shù)據(jù)未顯示).基于NSCLC隊列的95%特異性,將SCLC(n=207)與NSCLC(n=852)區(qū)分的臨床鑒別診斷截斷值計算為84 pg/mL(95%CI: 76.9-98.8).

ProGRP值在局限期與廣泛期SCLC患者的樣本中具有差異(中位數(shù)分別為351 pg/mL和757 pg/mL;P=0.002,3)(補(bǔ)充圖S4).在NSCLC隊列中95%的固定特異性下,鑒別局限期SCLC與NSCLC的敏感性為71.7%(AUC為85.6;95%CI: 80.3-90.9),鑒別廣泛期SCLC的敏感性為83.5%(AUC為93.0;95%CI: 89.8-96.3).在SCLC患者中,雖然I期和II期SCLC患者的樣本量較少(數(shù)據(jù)未顯示),但UICC疾病分期與ProGRP水平之間的相關(guān)性顯著.在所有中心,ProGRP在除外腎臟疾病的良性疾變患者(中位數(shù)為38 pg/mL),以及除外腎臟疾病,肺MCT或NET的其他惡性腫瘤患者(中位數(shù)為40 pg/mL)中濃度較低.與3個歐洲中心[AUC 0.89(95%CI: 0.85-0.92);NSCLC隊列中特異性為95%時敏感性為76.9%)]相比,在兩個中國中心[AUC 0.94(95%CI: 0.89-0.99);特異性為95%時敏感性為83.8%]中,ProGRP顯示出更高的SCLC和NSCLC鑒別診斷能力,雖然不具有統(tǒng)計學(xué)意義,可能是由于中國隊列的樣本量較少(圖5).

Fig 4 ProGRP concentrations in different clinical cohorts in China and Europe. The yellow crosses represent the mean.Note: Reprinted with permission from the copyright holder ?2015 Elsevier B.V.圖 4 中國和歐洲中心不同臨床隊列的ProGRP濃度.黃色十字架代表平均值.注:本圖得到版權(quán)所有者?2015 Elsevier B.V.復(fù)制許可

表 1 每個中心的每個隊列的樣本數(shù)C.MTab 1 Sample numbers for each cohort from each site

Fig 5 ROC curves of ProGRP (eGFR≥30 mL/min/1.73 m2) for SCLC versus NSCLC for European and Chinese sites. Europe SCLC (n=170),NSCLC (n=757); China SCLC (n=37), NSCLC (n=95).Note: Reprinted with permission from the copyright holder ?2015 Elsevier B.V.圖 5 歐洲和中國中心ProGRP(eGFR≥30mL/min/1.73 m2)用于SCLC與NSCLC相比的ROC曲線.歐洲SCLC(n=170),NSCLC(n=757);中國SCLC(n=37),NSCLC(n=95).注:本圖得到版權(quán)所有者?2015 Elsevier B.V.復(fù)制許可

5 討論

在多個歐洲和中國中心進(jìn)行的Elecsys? ProGRP檢測的多中心評估顯示出良好的不精密度、穩(wěn)定性和特異性.中間不精密度值范圍為CV:2.2%-6.0%,與ARCHITECT ProGRP檢測報道的數(shù)據(jù)相當(dāng)[23].批內(nèi)不精密度范圍為CV:1.1%-3.0%.值得注意的是,Elecsys? ProGRP檢測在EDTA血漿和血清樣本中等同進(jìn)行,在一定范圍的儲存條件下回收率保持不變.存儲樣本并不總是被認(rèn)為與新鮮樣本一樣可靠,但我們的數(shù)據(jù)表明ProGRP在存儲和新鮮組織中均保持穩(wěn)定.相比之下,血清中ProGRP的回收率隨ARCHITECT檢測時間下降,正如之前所報道的,在血漿和血清樣本中獲得不同的結(jié)果[24].

研究報告的ARCHITECT檢測分析的血清樣本相關(guān)的穩(wěn)定性問題,研究認(rèn)為部分歸因于血清樣本中的凝血酶,因此血漿被鑒定為首選源材料[24].相對于ARCHITECT檢測,Elecsys? ProGRP檢測在血清中具有較好的穩(wěn)定性,最有可能與ProGRP肽上的抗體結(jié)合位點(diǎn)有關(guān).Elecsys? ProGRP檢測中的兩個單克隆抗體與耐內(nèi)切蛋白酶酶切的表位結(jié)合[16,17,26],而ARCHITECT檢測中的兩個單克隆捕獲抗體直接結(jié)合凝血酶酶切位點(diǎn)(補(bǔ)充圖S1).

在ProGRP濃度高達(dá)500 pg/mL(斜率1.02,截距-2.72 pg/mL)所有中心中,并在整個測定范圍內(nèi),ARCHITECT和cobas?檢測在血漿中均顯示出良好的相關(guān)性.同時證實在cobas?檢測中,ProGRP濃度高達(dá)500 pg/mL(斜率為0.93,截距為2.35 pg/mL)時,并在整個測定范圍內(nèi),血清和血漿之間表現(xiàn)出良好的相關(guān)性.在所有中心,ProGRP濃度高達(dá)500 pg/mL(斜率為1.33,截距為-4.18 pg/mL)的血清樣本中,Fujirebio和cobas?檢測之間也存在良好的相關(guān)性.值得注意的是,Bonn和Barcelona實驗室的樣本沒有均勻地涵蓋測量范圍,該范圍內(nèi)大多數(shù)樣本的ProGRP濃度均低于500 pg/mL.ARCHITECT和cobas?檢測在整個測定范圍方面的差異小于ARCHITECT和Fujirebio ProGRP檢測(斜率為0.93,Passing-Bablok回歸;相關(guān)系數(shù)為0.99)之間相關(guān)性的差異[36].

在Elecsys? ProGRP檢測中,所測定的表觀正常人群的ProGRP參考范圍與ARCHITECT檢測的參考范圍的結(jié)果相當(dāng)[36].來自Barcelona和Bonn的樣本中的ProGRP濃度比其他中心的略低.

ProGRP在血清中顯示出明確的SCLC和NSCLC鑒別診斷能力,在NSCLC隊列中,特異性為95%時,敏感性為78%,如先前所述ARCHITECT ProGRP檢測的結(jié)果[16,17,21,36].在NSCLC和SCLC隊列中,各中心間無臨床相關(guān)差異.此外,未見年齡、性別或吸煙習(xí)慣的臨床相關(guān)影響.本研究為專門針對中國患者的ProGRP檢測的首次評價,并且證明了不同種族之間的結(jié)果的重復(fù)性.

盡管早期SCLC患者的數(shù)量很少,如先前研究所報道的,與局限期SCLC患者相比,廣泛期SCLC患者的ProGRP濃度較高[25,38].此外,研究還發(fā)現(xiàn)腫瘤大小(根據(jù)UICC分期)與ProGRP濃度之間存在相關(guān)性.正如研究所預(yù)期,NSCLC、良性肺病、其他良性疾病或其他惡性腫瘤(不包括腎臟疾病、肺的MCT和NET)患者的ProGRP濃度較低.因為僅發(fā)現(xiàn)來自肺或原發(fā)灶未知的NET患者的ProGRP水平升高[22],ProGRP可能是定位原發(fā)部位未知NET的有效診斷工具.在所有歐洲和中國中心,eGFR≥30 mL/min/1.73 m2(CKD 3期)患者血清中,ProGRP對于SCLC和NSCLC均表現(xiàn)出良好的鑒別診斷能力,但在eGFR<30 mL/min/1.73 m2患者中應(yīng)注意解讀ProGRP結(jié)果.

許多研究中已經(jīng)確立了ProGRP作為生物標(biāo)志物鑒別SCLC與其他類型肺癌的臨床應(yīng)用[12,16,20,21,39-42].在對11項臨床試驗中納入的5146例患者進(jìn)行的薈萃分析中,ProGRP在SCLC診斷中的敏感性和特異性分別為0.716(95%CI:0.688-0.743)和0.921(95%CI: 0.909-0.932)[40].Elecsys? ProGRP檢測的臨床表現(xiàn)與這些結(jié)果完全一致.該Elecsys?ProGRP檢測多中心評估的數(shù)據(jù)表明,ProGRP是SCLC的特異性腫瘤標(biāo)志物,可用于肺癌的鑒別診斷.Elecsys?ProGRP檢測在血清中的穩(wěn)定性增加,在臨床實驗室常規(guī)使用中具有明顯的優(yōu)勢,因為血清是腫瘤標(biāo)志物檢測的首選樣本.目前正在進(jìn)行一項對ProGRP在治療監(jiān)測中的應(yīng)用研究,以及在相同采集樣本中測定和分析其他腫瘤標(biāo)志物(CEA、NSE、CYFRA 21-1)的研究.

本文的補(bǔ)充數(shù)據(jù)可以在網(wǎng)上找到(http://dx. doi.org/10.1016/j.cca.2014.09.015.)

利益沖突

Catharina M. KORSE、Xiuyi ZHI、Xiaotong ZHANG、Ling QIU、Daan van den BROEK、José M. ESCUDERO、Jens STANDOP、Mu HU和Rafael MOLINA沒有聲明利益沖突.Stefan HOLDENRIEDER已經(jīng)收到了Roche講座的酬金.Andrea GEISTANGER、Birgit WEHNL和Marcus-Rene LISY是Roche DIAGNOSTICS雇員.

致謝

我們感謝Christine ENGEL的生物統(tǒng)計支持.感謝Roche DIAGNOSTICS提供了對該手稿的第三方書面協(xié)助的支持.