劉東凱，祖麗紅

(1.鄭州市兒童醫(yī)院藥學(xué)部, 河南 鄭州 450000； 2.鄭州市中醫(yī)院藥劑科，河南 鄭州 450000)

·藥學(xué)研究·

高效液相色譜法測(cè)定黃梔膠囊中黃芩苷的含量

劉東凱1，祖麗紅2

(1.鄭州市兒童醫(yī)院藥學(xué)部, 河南 鄭州 450000； 2.鄭州市中醫(yī)院藥劑科，河南 鄭州 450000)

目的：建立黃梔膠囊中黃芩苷的含量測(cè)定法。方法：采用高效液相色譜HPLC法對(duì)方中黃芩進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果：本品中黃芩苷含量測(cè)定的線(xiàn)性范圍為0.10～1.25 μg，r=0.999 98，平均回收率為96.21 %，RSD為1.3%。結(jié)論：鑒別和含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便可靠、重復(fù)性好，可有效控制黃梔膠囊的質(zhì)量。

黃梔膠囊;TLC;HPLC;黃芩苷；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

黃梔膠囊是由黃芩、梔子、桔梗、石膏組成的醫(yī)院制劑，具有清熱解毒、瀉火等功效，主治氣血均熱、發(fā)熱等癥。為了控制該制劑質(zhì)量，筆者對(duì)該制劑質(zhì)量控制方法進(jìn)行研究，對(duì)處方的主藥黃芩中黃芩苷的含量采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果滿(mǎn)意。

1 藥品、試劑與儀器

黃梔膠囊，由鄭州市中醫(yī)院制劑室提供，批號(hào)20151101，20151102，20151103。黃芩苷，含量測(cè)定用，由中國(guó)藥品生物制品鑒定所提供，批號(hào)111595-200604；甲醇，色譜純，迪馬公司產(chǎn)品，批號(hào)70150，其他所用試劑為分析純。LC-10Avp高效液相色譜儀、 LC-10Avp泵、SPD-M10Avp二極管陣列檢測(cè)器、class-vp色譜工作站，均為日本島津公司產(chǎn)品；ODS柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，大連依力特公司產(chǎn)品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相為甲醇-水-磷酸(48∶52∶0.2)，流速1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于 5 000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取黃芩苷對(duì)照品6.25 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得含黃芩苷50 mg/L的對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物約0.1g，精密稱(chēng)定，置100 mL量瓶中，加甲醇40 mL，超聲提取30 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

吸取黃芩苷對(duì)照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，并進(jìn)行光譜掃描。結(jié)果:供試品黃芩苷對(duì)照品在280 nm左右有強(qiáng)吸收。參照《中國(guó)藥典》2015版一部黃芩項(xiàng)下的含量測(cè)定波長(zhǎng)，選定本品的測(cè)定波長(zhǎng)為280 nm。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

精密吸取對(duì)照品溶液 2,5,10,15,20,25 μL，注入液相色譜儀中，測(cè)定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),得到：y=3.14×106x-8.16×103，r=0.999 9。結(jié)果表明：黃芩苷進(jìn)樣量在0.10～1.25 μg之間線(xiàn)性關(guān)系良好，且為近乎過(guò)原點(diǎn)的直線(xiàn)。因此，可以采用外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行測(cè)定。

2.6 陰性對(duì)照試驗(yàn)

按處方比例稱(chēng)取除黃芩以外的各味藥材，按其制備工藝制得黃芩陰性對(duì)照樣品，按2.3項(xiàng)下方法制得黃芩陰性對(duì)照溶液。取供試品溶液、黃芩苷對(duì)照品溶液和缺黃芩陰性對(duì)照溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果：供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間出現(xiàn)色譜峰，而黃芩陰性對(duì)照溶液在相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間無(wú)色譜峰出現(xiàn)。見(jiàn)圖1。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

對(duì)同一供試液間隔一定時(shí)間進(jìn)樣10 μL，測(cè)定黃芩苷峰面積，考察8 h內(nèi)供試液的穩(wěn)定性。結(jié)果：黃芩苷峰面積的平均值為2 027 952.8，RSD為1.92%(n=6)。結(jié)果表明：供試液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 精密度試驗(yàn)

取同一對(duì)照品溶液，按含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，每次進(jìn)樣量均為10 μl，共測(cè)定6次，以考察其精密度。結(jié)果：黃芩苷峰面積的平均值為1 566 274.2，RSD=0.28%(n=6)。結(jié)果表明：進(jìn)樣精密度良好。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)的樣品，按含量測(cè)定方法平行制備5份供試液，分別進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果：黃芩苷的平均含量為10.69 mg/粒， RSD為1.1%(n=5)。結(jié)果表明：本方法的重復(fù)性良好。

A.黃芩苷對(duì)照品；B.供試品；C.黃芩陰性對(duì)照；1.黃芩苷

圖1 HPLC色譜圖

2.10 回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品(含量為10.69 mg/粒，即35.64 mg/g)研細(xì)，取適量，精密稱(chēng)定，精密加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.300 6 g/ mL的黃芩苷對(duì)照品溶液5 mL，按本品含量測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液的制備方法操作，制備加樣回收試驗(yàn)供試品溶液，并測(cè)定其中黃芩苷的含量。結(jié)果：平均加樣回收率為96.21%,RSD=1.83%(n=6)。表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.11 含量測(cè)定

取3批黃梔膠囊樣品，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定項(xiàng)下方法操作，測(cè)定其中的黃芩苷含量，結(jié)果見(jiàn)表2。暫定本品每粒中含黃芩以黃芩苷計(jì)，不得少于7.5 mg。

表2 3批樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 小 結(jié)

本品為中藥復(fù)方制劑，黃芩為方中主要藥味,黃芩中主要含有黃芩苷等成分。《中國(guó)藥典》黃芩藥材項(xiàng)下采用高效液相色譜法測(cè)定黃芩苷[1],有關(guān)黃芩苷含量測(cè)定方法的研究報(bào)道亦較多[2-5]。筆者參照《中國(guó)藥典》及文獻(xiàn)方法，通過(guò)試驗(yàn)建立了該制劑中黃芩苷的含量測(cè)定方法。結(jié)果表明：黃芩苷與相鄰成分的分離度達(dá)到分析要求，且陰性對(duì)照中在黃芩苷峰相應(yīng)的位置無(wú)干擾成分。因此確定以黃芩苷的含量作為控制本品內(nèi)在質(zhì)量的定量指標(biāo)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:一部[M]. 北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：301.

[2]郭琪，閆艷，王海波，等.HPLC 波長(zhǎng)切換法同時(shí)測(cè)定清熱解毒顆粒中 8 個(gè)成分的含量[J].藥物分析雜志，2015，35(9)：1601-1605.

[3]趙亮，王新霞，呂磊. HPLC 法測(cè)定清肝散結(jié)顆粒中黃芩苷、漢黃芩苷、野黃芪苷、黃芩素及漢黃芩素[J].中成藥，2014，36(2):313.

[4]張勝娜，吳素香，薛海娜，等.HPLC 法同時(shí)測(cè)定小兒雙解止瀉顆粒中葛根素和黃芩苷的含量[J].中國(guó)藥師，2015，18(5)：863-805.

[5]王惠娟, 王力, 劉艷新.牛黃解毒片中黃芩苷的HPLC 法測(cè)定結(jié)果的不確定度評(píng)定研究[J].中草藥,2011, 42(7): 1326-1329.

(編輯 陶 珠)

1001-6910(2017)08-0070-03

R284.1

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2017.08.30

2017-02-26；

2017-07-18