孫曉磊

哈藥集團(tuán)制藥總廠 150000

測(cè)定阿莫西林膠囊中的有效成分

孫曉磊

哈藥集團(tuán)制藥總廠 150000

目的：探討測(cè)定阿莫西林膠囊有效成分的最佳測(cè)定方法，為更好的改進(jìn)阿莫西林膠囊工藝提供參考。方法：采用AgilentC18柱（250mm×4.6mm，5μm），以十八烷基鍵合硅膠為固定相，0.05mol·L-1磷酸二氫鉀溶液（用2mol·L-1氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH值至5.0）（A）-乙氰（B）（97.5∶2.5，V/V）為流動(dòng)相。流速為1.0mL·m in-1，柱溫為25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，進(jìn)樣量為10μL。結(jié)果：回歸方程為y= 5.27x+ 2.83，r= 0.9995（n= 6），線性范圍20—500μg·mL-1，RSD為3.97%，樣品中阿莫西林含量為821.3mg /g。結(jié)論：利用高效液相色譜法測(cè)定阿莫西林膠囊的有效成分具有更簡(jiǎn)單靈敏的測(cè)定特點(diǎn)，且準(zhǔn)確率高，重現(xiàn)性好，因此非常適合在制備和生產(chǎn)阿莫西林膠囊時(shí)使用，以此來(lái)更好的控制產(chǎn)品質(zhì)量。

高效液相色譜法；阿莫西林；膠囊；有效成分；測(cè)定

作為西藥抗生素中最常見(jiàn)的一種，阿莫西林已經(jīng)被人們廣泛接受，其在消炎抗菌方面有著廣譜性特點(diǎn)，藥效快，價(jià)格低。從西藥學(xué)上將，阿莫西林屬于半合成的青霉素，其主要的藥理作用是利用干擾細(xì)胞壁的合成來(lái)達(dá)到控制細(xì)菌繁衍傳播的效果。膠囊是阿莫西林最常見(jiàn)的藥品制劑，為了更好的掌握阿莫西林膠囊的功效，必須要更好的掌握膠囊的有效成分及含量，只有這樣，才能保證產(chǎn)品的品質(zhì)，維護(hù)廣大患者的切身利益。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)阿莫西林含量測(cè)定方法主要有紫外光分光光度法、原子吸收光譜法、漫反射紅外光譜法等。本文選擇高效液相色譜法（HPLC）對(duì)市售的阿莫西林膠囊中有效成分進(jìn)行測(cè)定。此方法適用于阿莫西林原料藥及其各種制劑的含量分析，具有操作方便簡(jiǎn)單、靈敏度高、快速、準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。

1、試劑與儀器

阿莫西林對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，純度 85.8%）；乙腈（色譜純，上海國(guó)藥集團(tuán)有限公司）；磷酸二氫鉀（分析純，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司）；氫氧化鉀（分析純，上?；瘜W(xué)試劑有限公司）。實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

Agilent 1200型高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司），包括G1322A真空脫氣機(jī)、G1311A四元泵、G1329A自動(dòng)進(jìn)樣器、G1330B柱溫箱、G1315B VWD檢測(cè)器、Agilent 1200 Chemstation化學(xué)工作站。

2、色譜分析條件

AgilentC18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：0.05mol·L-1磷酸二氫鉀溶液（用2mol·L-1氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH值至5.0）（A）-乙氰（B）（97.5∶2.5，V/V）；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；流速：1.0mL·m in-1；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μL；保留時(shí)間：3.9m in。此色譜條件下，阿莫西林對(duì)照品和供試品的高效液相色譜圖分別見(jiàn)圖1和圖2。

圖1 阿莫西林對(duì)照品的色譜圖

圖2 阿莫西林膠囊的色譜圖

3、溶液的配制

23.1 對(duì)照品溶液的配制

準(zhǔn)確稱(chēng)取阿莫西林對(duì)照品29.2mg，用流動(dòng)相超聲溶解，置于50m l容量瓶中，再用流動(dòng)相定容至刻度，配制成濃度為0.5mg·mL-1的對(duì)照品溶液，混合均勻后備用。

3.2 供試品溶液的配制

準(zhǔn)確稱(chēng)取市售阿莫西林膠囊內(nèi)容物 29.2mg，用流動(dòng)相溶解并定容到50m l容量瓶中。充分混勻后，先用超聲脫氣，再用0.45μm針頭濾膜過(guò)濾后備用。

4、結(jié)果

4.1 線性相關(guān)性

從 0.5mg·mL-1的對(duì)照品溶液中分別取 2、5、10、25、50mL用流動(dòng)相定容至50mL容量瓶中，配制成20、50、100、250、500μ g·mL-1濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，搖勻。分別取上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液 10μL進(jìn)樣，按照上述色譜條件測(cè)定阿莫西林標(biāo)準(zhǔn)品溶液的峰面積（mAU）。以溶液進(jìn)樣量濃度 x（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，其峰面積 y（mAU）為縱坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線圖。結(jié)果表明，阿莫西林在20—500μg·mL-1范圍內(nèi)與其峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，回歸方程為：y= 5.27x+ 2.83，r= 0.9995（n= 6）。

4.2 精密度實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確稱(chēng)取阿莫西林對(duì)照品，配制成20、40、60、100μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述色譜條件測(cè)定，每次進(jìn)樣10μL，每種濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣 6次，測(cè)得阿莫西林標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積的 RSD為1.85%，表明此色譜系統(tǒng)精密度良好。

4.3 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確稱(chēng)取同一批號(hào)阿莫西林膠囊內(nèi)容物6份各29.3mg，按照“供試品溶液的制備”規(guī)定步驟進(jìn)行操作，在上述色譜條件下對(duì)阿莫西林溶液進(jìn)行HPLC分析，測(cè)得阿莫西林溶液峰面積的RSD為1.3%。說(shuō)明該方法重現(xiàn)性良好。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 方法的重復(fù)性實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

4.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確量取阿莫西林對(duì)照品溶液10μL，分別在1、2、3、4、6、10、12、24h在上述色譜條件下進(jìn)樣，記錄保留時(shí)間和峰面積，其保留時(shí)間RSD為0.25%，峰面積RSD為3.87%，結(jié)果表明，阿莫西林對(duì)照品溶液在配制后12h內(nèi)比較穩(wěn)定。

4.5 加標(biāo)回收性實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確移取已知含量的阿莫西林樣品溶液 1mL，然后加 50μ g·mL-1的阿莫西林對(duì)照品溶液 4mL，混合均勻后，在上述色譜條件下進(jìn)樣10μL，測(cè)定并記錄其峰面積，計(jì)算回收率，其平均回收率為101.98%，RSD為3.97%。

4.6 樣品的測(cè)定

準(zhǔn)確稱(chēng)取阿莫西林膠囊樣品3份，每份29.0mg，按“供試品溶液的制備”項(xiàng)下步驟操作，每次進(jìn)樣10μL，測(cè)定其峰面積，代入回歸方程計(jì)算阿莫西林膠囊有效成分的含量，符合相關(guān)規(guī)定[11]。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品中阿莫西林有效成分的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)表明，測(cè)定阿莫西林樣品中有效成分的含量為 821.3mg/g，RSD為0.95%。

5、討論

5.1 色譜分析條件選擇5.1.1 流動(dòng)相的選擇

分別選用不同體積比的磷酸二氫鉀溶液：乙氰體系為流動(dòng)相，分析試樣的分離效果。發(fā)現(xiàn)0.05mol·L-1磷酸二氫鉀溶液（用2mol/L氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH值至5.0）∶乙氰為97.5∶2.5時(shí)，阿莫西林的出峰時(shí)間較短，并且色譜峰的半峰寬較小。

5.1.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

將一定濃度的阿莫西林對(duì)照品溶液在波長(zhǎng)210—380nm范圍內(nèi)使用紫外光譜掃描，結(jié)果顯示阿莫西林在254nm和272nm處均有最大吸收，但考慮到其他波長(zhǎng)下阿莫西林膠囊中所添加的輔料對(duì)其半峰寬的影響，故本方法選擇254nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

5.1.3 柱溫的選擇

對(duì)柱溫的選擇方面，分別測(cè)定了在 15、20、25、30、35℃柱溫時(shí)的色譜圖，通過(guò)比較各種柱溫下的色譜圖，發(fā)現(xiàn)在 25℃的柱溫下峰形和半峰寬相對(duì)都比較好，因此選擇 25℃作為檢測(cè)阿莫西林有效成分的分析柱溫。

5.2 可行性

本文建立檢測(cè)阿莫西林膠囊有效成分的高效液相分離的最佳條件是：AgilentC18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），0.05mol·L-1磷酸二氫鉀溶液（用2mol·L-1氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH值至5.0）∶乙氰為97.5∶2.5為流動(dòng)相，流速為1.0mL·m in-1，柱溫為25℃，進(jìn)樣量為10μL，波長(zhǎng)為254nm。該方法具有方便簡(jiǎn)單、靈敏度高、快速、準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，具備很大的可行性。

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[3]王雷，梁穎.HPLC法測(cè)定阿莫西林膠囊中阿莫西林的含量[J].天津藥學(xué)，2000（3）：69-70.

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1672-5018（2017）02-015-2