戚紅霞，潘曉燕

上海市靜安區(qū)市北醫(yī)院 1.消化內(nèi)科；2.病理科，上海 200435

CD133、β-catenin和hTERT在胃癌及癌前病變中的表達(dá)及相關(guān)性研究

戚紅霞1，潘曉燕2

上海市靜安區(qū)市北醫(yī)院 1.消化內(nèi)科；2.病理科，上海 200435

目的探究CD133、β-catenin和人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse transcriptase, hTERT)在胃癌及癌前病變中表達(dá)的臨床意義及其相關(guān)性。方法收集上海市靜安區(qū)市北醫(yī)院收治的60例胃癌標(biāo)本、60例癌前病變標(biāo)本和40例胃炎標(biāo)本，采用免疫組化法檢測(cè)CD133、β-catenin和hTERT蛋白的表達(dá)情況，探究CD133、β-catenin和hTERT表達(dá)水平與臨床病理因素的關(guān)系，分析三者之間的相關(guān)性。結(jié)果在胃癌組織和癌前病變組織中，CD133、β-catenin和hTERT表達(dá)水平明顯增加，與胃炎組織相比，CD133、β-catenin和hTERT在胃癌和癌前病變組織中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與癌前病變組織相比，以上三種蛋白在胃癌組織中表達(dá)顯著上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。在癌前病變組織中，CD133、β-catenin和hTERT的表達(dá)與患者的臨床病理因素均無(wú)相關(guān)性，而在胃癌患者中，三者的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度和浸潤(rùn)深度有關(guān)(P< 0.05)。另外，在胃癌中CD133、β-catenin和hTERT兩兩之間均呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論CD133、β-catenin和hTERT的協(xié)同高表達(dá)與胃癌的發(fā)生及癌前病變向胃癌的發(fā)展密切相關(guān)，其可能成為抑制癌前病變向胃癌轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵因子。

胃癌；癌前病變；CD133；β-catenin；人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶

胃癌是世界范圍內(nèi)排名第二的惡性腫瘤，它的發(fā)生是一個(gè)涉及多基因改變的多步驟、多因素逐漸進(jìn)展的過(guò)程。其死亡率高與胃癌細(xì)胞的侵襲能力強(qiáng)、轉(zhuǎn)移范圍廣等密切相關(guān)，研究[1-3]發(fā)現(xiàn)，胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移與多種因素有關(guān)，如肥胖、抑癌基因的表達(dá)異常等。早期胃癌多無(wú)癥狀，或僅有一些非特異性的消化道癥狀，僅憑臨床表現(xiàn)診斷早期胃癌十分困難[4]。癌前病變是腸型胃癌發(fā)生、發(fā)展的重要危險(xiǎn)因素，在發(fā)生惡性腫瘤之前常持續(xù)多年的演變，可為胃癌的早期檢測(cè)和治療提供依據(jù)[5-6]。因此，本研究采用免疫組化法檢測(cè)60例胃癌患者、60例胃癌前病變患者和40例胃炎患者中CD133、β-catenin和hTERT的表達(dá)情況，分析CD133、β-catenin和hTERT在胃癌癌前病變向胃癌方向發(fā)展過(guò)程中的作用，以期為胃癌的早期診斷提供新的指標(biāo)，為胃癌早期治療提供新的思路。

1 資料與方法

1.1一般資料收集2014年7月-2016年5月上海市靜安區(qū)市北醫(yī)院手術(shù)切除并經(jīng)病理診斷確診的胃癌標(biāo)本60例，男39例，女21例，年齡(59.8±5.1)歲(45～79歲)；發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移26例，未發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移34例；浸潤(rùn)深度為T(mén)1+T2的32例，T3+T4的28例；腺癌高-中分化39例、低分化21例。另取同期內(nèi)鏡室活檢病理明確的60例癌前病變標(biāo)本(慢性萎縮性胃炎伴有不完全大腸型化生或輕、重度不典型增生)，男37例，女23例，年齡(57.2±5.1)歲(30～82)歲。同時(shí)再取40例慢性非萎縮性胃炎標(biāo)本，男24例，女16例，年齡(55.7±5.1)歲(35～76)歲，三組標(biāo)本年齡、性別等基本資料相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2研究方法采用免疫組織化學(xué)法分別檢測(cè)三組CD133、β-catenin及hTERT蛋白表達(dá)情況，具體方法如下：所有標(biāo)本均進(jìn)行石蠟切片脫蠟，并使用PBS代替Ⅰ抗作為陰性對(duì)照，其中兔抗CD133和兔抗hTERT試劑均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司，兔抗β-catenin購(gòu)自Abcam。且按照1∶100比例稀釋后進(jìn)行。具體操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。采用DAB顯色，蘇木精復(fù)染，待其脫水至透明后，應(yīng)用顯微鏡進(jìn)行觀察。

1.3免疫組化定量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)CD133結(jié)果判定：隨機(jī)選取4個(gè)不同高倍視野下200個(gè)細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞百分率≥10%為CD133陽(yáng)性；<10%為CD133陰性。β-catenin結(jié)果判定：免疫組化陽(yáng)性表達(dá)信號(hào)為棕黃色細(xì)小顆粒狀，分別從細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核三方面判斷β-catenin在細(xì)胞內(nèi)的分布特征：若<70%癌細(xì)胞細(xì)胞膜陽(yáng)性表達(dá)或>10%癌細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核陽(yáng)性表達(dá)則取結(jié)果為陽(yáng)性。而≥70%的細(xì)胞膜陽(yáng)性表達(dá)且≤10%的細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)為陰性。hTERT結(jié)果判定：隨機(jī)選取4個(gè)不同高倍視野下200個(gè)細(xì)胞，按照陽(yáng)性染色細(xì)胞百分率分為0分：百分率<10%；1分：百分率10%～25%；2分：百分率25%～50%；3分：百分率>50%。此外，根據(jù)染色強(qiáng)度分為0分：無(wú)色；1分：淺黃色；2分：棕黃色；3分：棕褐色。得分=染色范圍×染色強(qiáng)度。0～2分為陰性，得分>2分為陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料用例數(shù)(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)；CD133、β-catenin和hTERT的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1CD133、β-catenin和hTERT在胃癌組織、癌前病變組織和胃炎組織中的表達(dá)相比胃炎組織，在胃癌組織和癌前病變組織中CD133、β-catenin和hTERT蛋白表達(dá)量明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。其中CD133主要位于癌細(xì)胞的胞膜上；β-catenin主要位于癌細(xì)胞的胞質(zhì)中；hTERT則主要位于細(xì)胞核和細(xì)胞漿中。與癌前病變組織相比，以上三個(gè)蛋白在胃癌組織中表達(dá)也顯著上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，見(jiàn)圖1、表1)。

表1CD133、β-catenin和hTERT在胃癌、癌前病變和胃炎組織中的表達(dá)分析[例數(shù)(%)]

Tab1ExpressionsofCD133,β-cateninandhTERTingastriccancer,precancerouslesionsandgastritistissue[n(%)]

分組例數(shù)陽(yáng)性率CD133β-cateninhTERT胃炎組織407(17.50)6(15.00)4(10.00)癌前病變組織6036(60.00)*37(61.67)*19(31.67)*胃癌組織6049(81.67)*#44(73.33)*#37(61.67)*#

注：與胃炎組織比較，*P<0.01；與癌前病變組織比較，#P<0.01。

2.2胃癌癌前病變和胃癌中CD133、β-catenin和hTERT的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系在癌前病變患者中CD133、β-catenin和hTERT的表達(dá)與患者的年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理類(lèi)型均無(wú)顯著的相關(guān)性(P>0.05，見(jiàn)表2)。在胃癌患者中CD133、β-catenin和hTERT的表達(dá)與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度和浸潤(rùn)深度有關(guān)(P<0.05，見(jiàn)表3)。

2.3CD133、β-catenin和hTERT在胃癌中的表達(dá)及相關(guān)性分析Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，在胃癌組織中，CD133與β-catenin蛋白表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)(r=0.562，P=0.000)，β-catenin與hTERT蛋白表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)(r=0.412，P=0.023)，CD133與hTERT蛋白表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)(r=0.476，P=0.014)。

圖1CD133、β-catenin和hTERT在胃癌、癌前病變和胃炎組織中的表達(dá)(400×) A:胃炎組織； B：癌前病變組織； C：胃癌組織

Fig1ExpressionsofCD133,β-cateninandhTERTingastriccancer,precancerouslesionsandgastritis(400×) A: gastritis tissue; B: precancerous lesions tissue; C: gastric cancer tissue

表2CD133、β-catenin和hTERT在胃癌癌前病變組織中的表達(dá)及其與臨床病理因素的關(guān)系

Tab2TherelationshipoftheclinicopathologicalfactorswithexpressionsofCD133,β-cateninandhTERTinprecancerouslesionsofgastriccancer

臨床病理因素例數(shù)CD133陰性陽(yáng)性χ2值P值β-catenin陰性陽(yáng)性χ2值P值hTERT陰性陽(yáng)性χ2值P值年齡(歲)0.2350.6280.7760.379?0.4230.235 <603313201122?2211 ≥602711161215?198性別0.4230.5152.3660.144?2.7610.101 男3716211720?2512 女23815617?167淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移0.0240.8770.0460.783?1.5310.209 是83535?44 否5221312032?3715病理類(lèi)型0.3850.5350.4170.419?0.1900.663 不完全大腸型化生5220321933?3517 輕、重度不典型增生84444?62

表3CD133、β-catenin和hTERT在胃癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理因素的關(guān)系

Tab3TherelationshipoftheclinicopathologicalfactorswithexpressionsofCD133,β-cateninandhTERTingastriccancertissues

臨床病理因素例數(shù)CD133陰性陽(yáng)性χ2值P值β-catenin陰性陽(yáng)性χ2值P值hTERT陰性陽(yáng)性χ2值P值年齡(歲)0.6900.4060.0020.969?0.2680.604 <6026620719?917 ≥6034529925?1420

續(xù)表3

臨床病理因素例數(shù)CD133陰性陽(yáng)性χ2值P值β-catenin陰性陽(yáng)性χ2值P值hTERT陰性陽(yáng)性χ2值P值性別2.6970.0890.0150.897?1.4310.220 男3910291029?1326 女21120615?1011TNM分期1.0310.5971.7650.414?1.7900.671 Ⅰ26521818?917 Ⅱ23320419?914 Ⅲ113847?56淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移3.4700.0494.4340.035?7.0830.008 是26224422?521 否349251222?1816分化程度3.9740.0461.7850.004?5.0830.024 高-中399301425?1920 低21219219?417浸潤(rùn)深度4.3910.0364.1150.042?6.3470.012 T1+T2329231220?1715 T3+T428226424?622病理類(lèi)型4.0420.1752.0910.871?4.7920.489 腺癌498411237?1831 黏液腺癌113847?56

3 討論

晚期胃癌的預(yù)后極差，5年生存率僅為10%～15%[7-8]，而早期胃癌5年生存率在90%以上[9]。但是，目前臨床上首次就診的胃癌患者中，胃癌早期診斷率低于10%，85%左右為中晚期[10]。造成這種狀況的原因很多，但缺乏特異、敏感的高危人群預(yù)警和早期診斷的生物學(xué)指標(biāo)、方法是導(dǎo)致早癌發(fā)現(xiàn)困難的關(guān)鍵。不完全大腸型腸上皮化生和異型增生是胃癌發(fā)生、發(fā)展的重要階段，被統(tǒng)稱(chēng)為癌前病變，也是進(jìn)行干預(yù)并防止胃癌發(fā)生的最有效的階段[11]。因此，尋找一種能在癌前病變階段或胃癌早期進(jìn)行準(zhǔn)確診斷的指標(biāo)是提高胃癌患者臨床預(yù)后和生存率的關(guān)鍵。CD133早被認(rèn)為是一種位于造血干細(xì)胞表面的早期抗原[12]。研究[13]發(fā)現(xiàn)，CD133可能是腫瘤干細(xì)胞表面特異性表達(dá)的分子，提示CD133極有可能成為治療腫瘤的一個(gè)有效的靶點(diǎn)。β-catenin屬連環(huán)素家族，其上調(diào)可以誘導(dǎo)Wnt靶基因激活，從而誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生[14]。hTERT是端粒酶的亞單位，為端粒酶活性的限制性組分，研究[15]發(fā)現(xiàn)，hTERT的異常表達(dá)與多種腫瘤密切相關(guān)。目前國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)CD133、β-catenin和hTERT三種因子聯(lián)合在胃癌和癌前病變組織的研究報(bào)道。

本研究發(fā)現(xiàn)，在胃癌組織和癌前病變組織中CD133、β-catenin和hTERT蛋白表達(dá)量明顯增加，與胃炎組織相比，CD133、β-catenin和hTERT在胃癌與癌前病變組織中的表達(dá)具有顯著性差異。與癌前病變組織相比，以上三種蛋白在胃癌組織中表達(dá)也顯著上調(diào)，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示CD133、β-catenin和hTERT的異常表達(dá)與胃癌有關(guān)，其也可能是胃癌癌前病變向胃癌發(fā)展過(guò)渡的關(guān)鍵因素。進(jìn)一步分析以上蛋白的表達(dá)與胃癌癌前病變和胃癌臨床病理因素的關(guān)系可知，在癌前病變患者中，三者的表達(dá)與患者的臨床病理因素均無(wú)顯著的相關(guān)性，而在胃癌患者中，CD133、β-catenin和hTERT的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度和浸潤(rùn)深度有關(guān)，這與以往關(guān)于CD133、β-catenin和hTERT在其他腫瘤中異常表達(dá)的特點(diǎn)相一致[16-17]，進(jìn)一步提示CD133、β-catenin和hTERT的表達(dá)可能與胃癌癌前病變向胃癌方向的發(fā)展有關(guān)。也有研究[18-19]發(fā)現(xiàn)，CD133、β-catenin及β-catenin與hTERT之間存在功能上的相關(guān)性；三者又在胃癌中同時(shí)高表達(dá)，提示三者在胃癌中表達(dá)的相關(guān)性。據(jù)此，本實(shí)驗(yàn)分析了CD133、β-catenin和hTERT在胃癌患者中表達(dá)的相互性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在胃癌中CD133、β-catenin和hTERT三者兩兩之間均呈明顯的正相關(guān)，提示同時(shí)檢測(cè)CD133、β-catenin和hTERT可預(yù)測(cè)胃癌的發(fā)展。近年來(lái)，分子靶向治療是胃癌治療研究的熱點(diǎn)，本探究證實(shí)CD133、β-catenin和hTERT的異常表達(dá)與胃癌有關(guān)，提示CD133、β-catenin和hTERT是極具潛力的胃癌基因靶向治療的潛在靶點(diǎn)。

綜上所述，本研究證實(shí)，在胃癌和癌前病變中，CD133、β-catenin和hTERT表達(dá)均明顯上調(diào)，但還是存在顯著的差異，這可能與胃癌的發(fā)生及胃癌癌前病變向胃癌的發(fā)展有關(guān)。在胃癌中，三者的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度和浸潤(rùn)深度有關(guān)，且CD133、β-catenin和hTERT 在胃癌中的高表達(dá)呈顯著正相關(guān)。提示CD133、β-catenin和hTERT的正向高表達(dá)與胃癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。本研究也有許多不足，比如涉及的病理標(biāo)本相對(duì)較少，沒(méi)有探明CD133、β-catenin和hTERT在胃癌中異常表達(dá)的分子機(jī)制等，這將是本課題組后續(xù)的研究重點(diǎn)。

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(責(zé)任編輯：馬 軍)

Correlation study of CD133, β-catenin and hTERT expressions in gastric cancer and precancerous lesion

QI Hongxia1, PAN Xiaoyan2

1.Department of Gastroenterology; 2.Department of Pathology, Jing’an District Shibei Hospital, Shanghai 200435, China

ObjectiveTo investigate the clinical significance and correlation of CD133, β-catenin and human telomerase reverse transcriptase (hTERT) in gastric cancer and precancerous lesion.MethodsSixty cases of gastric cancer specimens, 60 cases of precancerous lesions and 40 cases of gastritis specimens were collected in Jing’an District Shibei Hospital. The expressions of CD133, β-catenin and hTERT were detected by immunohistochemical (IHC) method. The relationship of expressions of CD133, β-catenin and hTERT with clinicopathological factors were analyzed.ResultsCompared with gastritis tissues, the expressions of CD133, β-catenin and hTERT were significantly increased in gastric cancer tissues and precancerous lesions (P<0.01). Compared with the precancerous lesions, the expressions of the above three proteins in gastric cancer were also significantly increased, the difference was also statistically significant (P<0.01). The expressions of CD133, β-catenin and hTERT were not correlated with clinicopathological factors in precancerous lesions, but the expressions of the above three proteins were correlated with lymph node metastasis, differentiation and infiltration depth in gastric cancer (P<0.05). In addition, there were also positive correlations among CD133, β-catenin and hTERT in gastric cancer (P<0.05).ConclusionThe co-expressions of CD133, β-catenin and hTERT are closely related to the development of gastric cancer and transformation of precancerous lesions to gastric cancer, which may be key factors for inhibiting the transformation of precancerous lesions to gastric cancer.

Gastric cancer; Precancerous lesions; CD133; β-catenin; hTERT

10.3969/j.issn.1006-5709.2017.09.006

R735.2

：A

：1006-5709(2017)09-0981-05

：2017-01-05

2014年上海市閘北區(qū)衛(wèi)生局級(jí)課題面上項(xiàng)目(2014MS04)

戚紅霞，副主任醫(yī)師，研究方向：擅長(zhǎng)內(nèi)鏡操作及治療。E-mail：rye@21cn.com