莫涵瑢 王佩倫 張婧怡 顧 鑫 謝天伊 付 平

(1 北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京，100029； 2 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)信息研究所，北京，100020)

不同深度針刺“足三里”穴對慢性胃炎大鼠消化及免疫指標(biāo)的影響

莫涵瑢1王佩倫2張婧怡1顧 鑫1謝天伊1付 平1

(1 北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京，100029； 2 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)信息研究所，北京，100020)

目的：研究不同深度針刺“足三里”穴對慢性胃炎大鼠的治療作用機(jī)制以及提高免疫系統(tǒng)功能的效果。方法：根據(jù)隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)方法，將44只大鼠分為4組：正常對照組，造模組，淺刺組，深刺組。慢性胃炎大鼠模型采用碘乙酰胺溶液誘導(dǎo)制備。正常對照組不作任何處理，造模組用相同方法固定大鼠，但不做針刺處理，淺刺組、深刺組將毫針刺入不同深度后，分別測定各組大鼠的血清胃泌素、白介素含量及胃液pH值，觀察胃部出血點(diǎn)及體重變化。結(jié)果：相對于正常對照組，造模組大鼠血清胃泌素濃度降低，針刺后深刺組大鼠血清胃泌素濃度較造模組有顯著提高(P<0.01)且深刺組作用優(yōu)于淺刺組(P<0.05)；比較正常對照組、造模組、淺刺組、深刺組的白介素IL-1β，其差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。對正常對照組、造模組、淺刺組、深刺組的組間互相比較，pH值差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論：深刺大鼠“足三里”穴治療慢性胃炎，相較于淺刺，有著更明顯刺激機(jī)體內(nèi)血清胃泌素釋放的功能；針刺“足三里”穴對于調(diào)節(jié)慢性胃炎大鼠的血清白介素濃度及胃液pH值無明顯影響。

足三里；針刺深度；血清胃泌素；慢性胃炎

隨著現(xiàn)代社會的發(fā)展進(jìn)步，人們擁有越來越優(yōu)越的生活條件和環(huán)境，同時(shí)承受了快速的工作節(jié)奏和較大的精神壓力。目前，飲食及情志等方面因素是引起胃病的重要因素之一，胃病治療也成為醫(yī)學(xué)界關(guān)注的一個(gè)問題。慢性胃炎是由多種原因引起的胃黏膜慢性炎性反應(yīng)性疾病，其發(fā)病率居各種胃病之首，臨床上十分常見，約占接受胃鏡檢查患者的80% ～90%[1]，因此，我們有必要進(jìn)行更深一步研究探討。足三里穴為足陽明胃經(jīng)合穴，是治療胃病常用的一個(gè)主要穴位，早在古代就有“肚腹三里留”的記載，現(xiàn)代研究也表明，足三里穴具有調(diào)整提高機(jī)體免疫功能的作用[2]，對胃病治療具有顯著的效果，因此，從不同角度研究足三里穴的作用機(jī)制，顯得十分重要。本研究從針刺足三里穴不同深度對慢性胃炎的治療作用機(jī)制影響進(jìn)行了深入探討，旨在為今后科研工作及臨床治療提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1材料和方法

1.1 材料

1.1.1 動物 選用健康雄性成年Wistar大鼠44只，重量在(200±10)g。由斯貝福(北京)生物技術(shù)有限公司提供[許可證號：SCXK(京)2011-0004]。

1.1.2 試劑與儀器 1)儀器：天平，韓式電針儀(LH-202型)，高速冷凍離心機(jī)(Avanti J-26 XPI型)，直徑0.25 mm，長13 mm(0.5寸)毫針(漢醫(yī)牌一次性使用無菌針灸針，長春愛康醫(yī)療器械有限公司)。2)試劑：0.1%碘乙酰胺溶液，1%糖溶液，蒸餾水。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 將44只大鼠按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要求分為4處理組，分別為正常對照組，造模組，淺刺組，深刺組，每組11只；且為排除體重對實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響，根據(jù)隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)方法，即按體重排序，每4只為一區(qū)組，分為11區(qū)組，各區(qū)組內(nèi)按隨機(jī)數(shù)法將大鼠編號，按編號由大至小分別加入正常對照組，造模組，淺刺組，深刺組。

1.2.2 取穴 參考《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[3]大鼠“足三里”取穴方法：膝關(guān)節(jié)后外側(cè)，腓骨小頭下約5 mm處(脛、腓骨間隙中，皮下有腓骨肌、腓神經(jīng)及脛前動、靜脈分布)，左右各一穴。

1.2.3 針刺 用自制鼠袋及固定器固定大鼠后，暴露“足三里”穴。1)正常對照組：不作任何處理。2)造模組：固定大鼠但不做針刺處理。3)淺刺組：提捏皮膚將毫針沿15°角斜向下刺入約3 mm(達(dá)皮下層)。電針參數(shù)：斷續(xù)波，頻率2 Hz，電壓2 V，電流1 mA，以大鼠雙后肢輕微抖動為宜。留針20 min，1次/d，共7次。4)深刺組：將毫針直刺入約7 mm(達(dá)肌肉層)。電針參數(shù)：斷續(xù)波，頻率2 Hz，電壓2 V，電流1 mA，以大鼠雙后肢輕微抖動為宜。留針20 min，1次/d，共7次。

1.2.4 檢測指標(biāo)與方法 檢測指標(biāo)前對大鼠進(jìn)行禁食36 h，自由飲水處理。1)血樣本處理：大鼠針刺后第2天摘眼球取血，隨后以3 000 r/min離心20 min取上清液，-80 ℃保存待檢。2)pH值和胃液量測定：大鼠剖腹，以繩線系住胃袋兩端，完整取胃，于幽門一端剪開一小口，擠壓法取胃液清潔無渾濁物部分，然后用精密pH試紙測定pH值。血清胃泌素，白介素1-β均采用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行測定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 運(yùn)用SPSS 20.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不滿足正態(tài)分布。因此采用中位數(shù)M描述數(shù)據(jù)平均水平，四分位數(shù)(P25～P75)描述數(shù)據(jù)變異程度，即以M(P25～P75)表示。統(tǒng)計(jì)推斷方法采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)秩和檢驗(yàn)，兩2組間采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)樣本大鼠數(shù)量分析 納入大鼠44只，均進(jìn)入結(jié)果分析，有個(gè)別極端值，滿足統(tǒng)計(jì)方法條件，不剔除。pH值共有3例缺失值，正常對照組1例，淺刺組2例，實(shí)驗(yàn)中未能測得。

2.2 各組大鼠一般情況比較 正常對照組大鼠實(shí)驗(yàn)前后便質(zhì)無明顯變化，毛發(fā)光澤，活動正常，飲食及飲水量穩(wěn)定，體重逐步增加。造模組及深刺組、淺刺組大鼠在造模期間飲水量每日下降約200 mL，飲食量略有減少，便質(zhì)、毛發(fā)光澤及活動與正常對照組大鼠無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，體重增幅較小。

2.3 各組大鼠胃黏膜的觀察 實(shí)驗(yàn)針刺后，通過對正常對照組，造模組，淺刺組，深刺組4組大鼠胃黏膜情況的肉眼觀察，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過造模的造模組，淺刺組，深刺組大鼠胃黏膜可見數(shù)個(gè)大小不等出血點(diǎn)，說明慢性胃炎造模成功。深刺組大鼠胃黏膜狀況較優(yōu)于造模組和淺刺激組。見表1。

表1 4組大鼠胃黏膜出血情況比較

2.4 針刺慢性胃炎大鼠足三里對大鼠胃液pH值的影響 實(shí)驗(yàn)針刺后，正常對照組，造模組，淺刺組，深刺組間互相比較，pH值差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。數(shù)據(jù)表明，本項(xiàng)目使用碘乙酰胺對大鼠進(jìn)行慢性胃炎造?？赡軐Υ笫笪敢簆H值影響較小，且針刺大鼠足三里對胃液pH值無明顯影響。

2.5 針刺慢性胃炎大鼠足三里對大鼠血清胃泌素的影響 實(shí)驗(yàn)針刺后，不同組別大鼠血清胃泌素濃度中位數(shù)升序順序?yàn)樵炷＝M、淺刺組、正常對照組、深刺組。隨機(jī)區(qū)組秩和檢驗(yàn)顯示各組血清胃泌素中位數(shù)不完全相同。經(jīng)兩兩比較，深刺組與造模組間(P<0.01)，深刺組與淺刺組間(P<0.05)血清胃泌素差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其他各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。實(shí)驗(yàn)表明，慢性胃炎造模后大鼠血清胃泌素分泌量降低，針刺大鼠足三里可使分泌量增加，且深刺激作用優(yōu)于淺刺激。

表2 針刺慢性胃炎大鼠足三里對大鼠胃液 pH值的影響M(P25～P75)

表3 針刺慢性胃炎大鼠足三里對大鼠血清 胃泌素的影響M(P25～P75)

注:*，比較深刺組；**，比較深刺組

2.6 針刺慢性胃炎大鼠足三里對大鼠白介素IL-1β的影響 實(shí)驗(yàn)針刺后，正常對照組，造模組，淺刺組，深刺組間互相比較，白介素IL-1β差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4。數(shù)據(jù)表明，本項(xiàng)目使用碘乙酰胺對大鼠進(jìn)行慢性胃炎造?？赡軐Υ笫蟀捉樗豂L-1β分泌量影響較小，且針刺大鼠足三里對白介素IL-1β無明顯作用。

表4 針刺慢性胃炎大鼠足三里對大鼠白介素 IL-1β的影響M(P25～P75)

3討論

慢性胃炎是現(xiàn)代一種常見疾病，臨床表現(xiàn)為上腹部脹滿或疼痛，呃逆噯氣，惡心嘔吐等，中醫(yī)主要以疏肝理氣，和胃止痛為治療原則，采取湯劑或針灸治療，西醫(yī)治療以根除Hp，抑制胃酸分泌，保護(hù)胃黏膜等為主要治療方法，但存在一些不良作用。相形之下，針灸治療具有十分明顯的優(yōu)勢，尤其是足三里穴的應(yīng)用，在某種程度上滿足“簡、便、驗(yàn)、廉”的優(yōu)勢治療方案。

足三里穴是足陽明胃經(jīng)合穴，對于各型脾胃疾病均有非常好的治療效果[4]?！鹅`樞·五邪》言“邪在脾胃，則病肌肉痛，陽氣有余，陰氣不足，則熱中善饑；陽氣不足，陰氣有余則腸中寒鳴腹痛；陰陽俱有余，若俱不足，則有寒有熱，皆調(diào)于三里。”現(xiàn)代文獻(xiàn)也表明，針刺足三里穴對胃病具有很好的治療效果，且療效明顯優(yōu)于上、下巨虛[5]。侯云霞等[6]也指出“足三里是目前臨床治療慢性胃炎使用頻率最高的穴位”。所以如何針刺足三里才能獲得更好的治療效果，成為最關(guān)鍵的一個(gè)問題。

針刺深度在針刺技術(shù)中占有重要地位，直接影響到針刺的療效。《靈樞·經(jīng)水》：“足陽明刺深六分，留十呼”，是最早關(guān)于針刺治療深度的記載。然《黃帝內(nèi)經(jīng)》有言：“病有浮沉，刺有淺深，各至其理，無過其道。”因此，一直以來針刺深度并無固定標(biāo)準(zhǔn)，多出于醫(yī)者自身經(jīng)驗(yàn)判斷，且對于針刺深度的選擇上有一些分歧。如陸永輝根據(jù)《靈樞》針刺深度法治療腹瀉型腸易激綜合征時(shí)的針刺深度普遍較淺[7]；楊維杰所著的《董氏奇穴針灸學(xué)》中則認(rèn)為針刺深度不同，足三里穴的治療效果也不同，“若針一寸半至二寸治療胃腸病”[8]。無統(tǒng)一針刺深度標(biāo)準(zhǔn)會對初學(xué)者或臨床從業(yè)者的治療工作造成困惑。

本次實(shí)驗(yàn)選用胃液pH值、血清胃泌素、白介素IL-1β作為評價(jià)指標(biāo)。胃泌素是一種胃腸激素，主要來自于胃竇G細(xì)胞，是反應(yīng)胃功能的指標(biāo)之一。血清胃泌素在臨床慢性胃炎的診斷中有重要意義[9]，它可以刺激壁細(xì)胞分泌胃酸，以及促進(jìn)胃腸道細(xì)胞的增殖與分化[10]。慢性胃炎發(fā)生時(shí)，由于胃黏膜固有腺體數(shù)量減少，胃泌素分泌減少，從而血清胃泌素水平降低[11-12]。白介素1-β是由單核細(xì)胞產(chǎn)生的一種多功能細(xì)胞因子，主要功能有保護(hù)胃細(xì)胞、抗胃黏膜潰爛以及抑制胃酸分泌[13-14]，是目前已知最強(qiáng)的胃酸分泌抑制因子[15]。

本實(shí)驗(yàn)利用大鼠進(jìn)行分組及慢性胃炎造模，以不同深度針刺慢性胃炎大鼠“足三里”，觀察其對治療慢性胃炎效果及血清胃泌素、白介素濃度的影響。本研究結(jié)果表明：1)慢性胃炎造模后大鼠血清胃泌素濃度降低，針刺后深刺組大鼠血清胃泌素濃度較造模組有顯著提高(P<0.01)且深刺組作用優(yōu)于淺刺組(P<0.05)。這說明深刺足三里穴對于提高血清胃泌素有著更好的效果，其治療慢性胃炎的作用機(jī)制可能是通過刺激胃泌素分泌，調(diào)節(jié)胃酸，促進(jìn)胃內(nèi)消化吸收實(shí)現(xiàn)的。2)針刺結(jié)束后，比較正常對照組、造模組、淺刺組、深刺組的白介素IL-1β，其差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。提示：使用碘乙酰胺對大鼠進(jìn)行慢性胃炎造模可能對大鼠白介素IL-1β分泌量影響較小，且針刺大鼠足三里對白介素IL-1β水平無明顯作用，其原因目前尚不清楚。推測可能與白介素IL-1β抑制胃酸分泌的功能有關(guān)，因?yàn)獒槾炭梢詫C(jī)體進(jìn)行雙向的良性調(diào)解，所以對血清胃泌素分泌水平已經(jīng)降低的病鼠并無明顯影響。3)根據(jù)對正常對照組、造模組、淺刺組、深刺組的組間互相比較，pH值差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。提示：使用碘乙酰胺對大鼠進(jìn)行慢性胃炎造模可能對大鼠胃液pH值影響較小，且針刺大鼠足三里對胃液pH值無明顯影響。

前期文獻(xiàn)研究表明，胃蛋白酶為慢性胃炎發(fā)展轉(zhuǎn)歸中，能較好反映胃功能及免疫功能的測量指標(biāo)，由于實(shí)驗(yàn)條件及課題經(jīng)費(fèi)限制，本次實(shí)驗(yàn)未進(jìn)行測量。同時(shí)，大鼠體重與消化功能具有相關(guān)性，為排除大鼠體重對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，本研究在實(shí)驗(yàn)伊始采用以體重為區(qū)組劃分因素的隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，以減弱大鼠質(zhì)量對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，但尚未將實(shí)驗(yàn)過程中針刺對大鼠體重的影響進(jìn)行控制，可能對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生部分影響。

綜上所述，以深刺大鼠“足三里”穴治療慢性胃炎，相較于淺刺，有著更明顯刺激機(jī)體內(nèi)血清胃泌素釋放的功能，從而達(dá)到更良好的治療效果，同時(shí)針刺“足三里”穴對于調(diào)節(jié)慢性胃炎大鼠的血清白介素濃度無明顯影響。

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(2016-09-11收稿 責(zé)任編輯：徐穎)

EffectsofAcupunctureatZusanliinVariousDepthsonDigestionandImmuneIndicesofRatswithChronicGastritis

Mo Hanrong1, Wang Peilun2, Zhang Jingyi1, Gu Xin1, Xie Tianyi1, Fu Ping1

(1BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China; 2InstituteofMedicalInformation,PekingUnionMedicalCollege,ChineseAcademyofMedicalScience,Beijing100020,China)

Objective:To observe the effect of acupuncture at Zusanli in various depths on the mechanism of the treatment and on improving immune function of the rats with chronic gastritis.Methods:There were 44 rats randomized into a control group, a model group, a shallow-needling group and a deep-needling group. A chronic gastritis rats′ model was set up using iodine acetamide solution. The control group

no intervention. For the model group, the rats were fastened without any acupuncture. After insertion in the deep-needling and the shallow-needling group, the serum gastrin, interleukin content and pH value of gastric juice, the weight changed and the stomach bleeding spots in all 4 groups were observed.Results:In comparison with the control group, the serum gastrin concentration decreased in the model group, and the serum gastrin concentration in the deep-needling group significantly increased compared with that in the model group (P<0.01). The serum gastrin concentration of deep-needling group increased more than that of shallow-needling group; there was no statistically significant difference in both the concentration of interleukin IL-1β and the pH value in the control group, the model group，the deep-needling group and the shallow-needling group (P>0.05).Conclusion:Acupuncture in rats at the Zusanli acupoint deeply into the muscle layer, compared with shallowly at the subcutaneous level, has a more obvious stimulation on the body′s serum gastrin release function; meanwhile, there is no significant influence on regulation of rats with chronic gastritis and gastric juice concentration of serum interleukin pH by acupuncture in rats at the Zusanli acupoint.

Zusanli; Depth of acupuncture; Serum gastrin; Chronic gastritis

R245

：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2017.09.039

2015年國家級大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練項(xiàng)目(201510026012)

莫涵瑢(1994.02—)，女，2012級本科在讀，E-mail:mdn0223@163.com

付平(1966.10—)，女，博士，北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院副教授、副主任醫(yī)師，研究方向：有關(guān)腧穴的特異性研究，E-mail:bjzfp@hotmail.com