劉曉政 嚴曉麗 胡 丹 施堂紅 占元毅

（浙江省果品質量檢驗中心，浙江常山 324200）

常山胡柚不同部位中檸檬苦素的含量分析*

劉曉政**嚴曉麗 胡 丹 施堂紅 占元毅

（浙江省果品質量檢驗中心，浙江常山 324200）

常山胡柚，又名金柚，于20世紀70年代末期被發(fā)現(xiàn)，1991年被東北林學院張韻冰教授正式命名為常山胡柚，以產(chǎn)地命名，具有鮮明的地域特色。常山胡柚果實與常見的柑桔類果實不同，甜度不如砂糖橘，香味不如臍橙，具有清涼祛火、平喘化痰、生津止咳、健胃壯身、降血脂、抗便秘、抗衰老等特殊的藥理功效。當?shù)罔洲r(nóng)形容胡柚是“有點苦、確實涼”。常山胡柚“有點苦”的主要原因是胡柚中含有的檸檬苦素類化合物。

檸檬苦素類化合物是存在于蕓香科和楝科植物中一類三萜系化合物，是具有高度生物活性的植物次生代謝產(chǎn)物。柑桔屬蕓香科植物，是天然檸檬苦素化合物的主要來源。最新研究表明，檸檬苦素類化合物在抗癌、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)體內(nèi)膽固醇水平、防止動脈粥樣硬化和除蟲方面具有明顯效果，被認為是理想的功能食品添加物。美國、日本已經(jīng)報道了檸檬苦素類物質作為功能性成分在食品和飲料制作中的應用，因而具有植物天然活性物質的檸檬苦素類物質具有廣闊的應用前景。

本文對常山胡柚不同部位中的檸檬苦素含量進行了分析，確定常山胡柚不同部位中檸檬苦素含量的分布規(guī)律，為常山胡柚深加工中胡柚的脫苦和檸檬苦素的提取提供理論依據(jù)。

1 試驗材料

1.1 材料與試劑

常山胡柚，常山縣俊優(yōu)胡柚專業(yè)合作社、常山縣連福胡柚專業(yè)合作社和常山縣芙蓉旺水果專業(yè)合作社的胡柚鮮果。

胡柚樣品的制備，分別取胡柚皮、海綿層、囊衣，置于45℃烘箱內(nèi)，烘10 h后粉碎，放入密封塑料袋中，置于干燥器內(nèi)保存。

檸檬苦素標準品，純度98.0%，上海同田生物技術有限公司；甲醇、乙腈，均為色譜純；乙酸銨，分析純；其他物質均為分析純；水為超純水。

1.2 儀器與設備

ProStar230液相色譜儀，美國瓦里安公司；PL403電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；KQ-500DE超聲波清洗機，昆山舒美超聲儀器有限公司；電熱鼓風干燥箱，上海森信實驗儀器有限公司；R-200旋轉蒸發(fā)器，瑞士布奇公司；數(shù)顯水浴鍋，上海銀屏儀器儀表有限公司；超純水器，杭州永潔達凈化科技有限公司；循環(huán)水式真空泵，河南鞏義英峪予華儀器廠；UV-2800AH紫外可見分光光度計，尤尼柯（上海）儀器有限公司；孔徑0.45 μm針頭過濾器，安捷倫科技有限公司；DKU-250A電熱恒溫油槽，上海森信實驗儀器有限公司；PHS-3C酸度計，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；FP6410火焰光度計，上海欣益儀器儀表有限公司。

2 試驗方法

2.1 不同胡柚基地土壤基本肥力的測定

采集了常山縣3個不同區(qū)域的胡柚基地周邊的39個土壤樣本，自然風干，根據(jù)Y/T 53—1987土壤全氮測定法（半微量開氏法）；NY/T 1121.2— 2006土壤檢測第2部分：土壤pH的測定；NY/T 1121.6—2006土壤檢測第6部分：土壤有機質的測定；NY/T 1121.7-2006土壤檢測第7部分：酸性土壤有效磷的測定；NY/T 889-2004土壤速效鉀和緩效鉀含量的測定的方法對土壤中全氮、pH值、有機質、速效磷及速效鉀的測定，了解土壤的基本肥力情況。

2.2 檸檬苦素提取方法

準確稱取2.000 g樣品置于三角瓶中，加入50 mL純凈水，調(diào)節(jié)提取溫度80℃，提取時間90 min，樣品提取后，提取液用濾紙過濾，將濾液真空干燥至干，立即加入2 mL乙腈洗脫溶解，經(jīng)針頭過濾器過濾后待測。在同樣的條件下，采用超聲波輔助提取。

2.3 檸檬苦素的測定方法

色譜柱：ZORBAX SB-C18StableBond Analytical 4.6×250 mm 5-Micron；進樣量：10 μL；流動相乙腈∶水為45∶55；紫外檢測器波長：210 nm；流動相流速：1.0 mL/min。以標樣的保留時間和峰面積進行定性、定量計算檸檬苦素含量Y。

式中：m1——提取物中檸檬苦素含量，mg；

m0——胡柚樣品重量，g。

3 結果與分析

3.1 常山縣不同區(qū)域胡柚基地土壤的基本肥力

常山縣胡柚種植面積達7.4×103hm2，本次研究選取了常山東案鄉(xiāng)、青石鎮(zhèn)和球川鎮(zhèn)3個不同的胡柚種植基地，這3個胡柚基地均為多年豐產(chǎn)果園。在3個基地周邊選取了具有代表性的土壤樣本39個，對土壤中的全氮、速效磷、速效鉀、pH值及有機質進行測定。所取土壤為胡柚開始結果實時的土壤樣本，整個胡柚生長期未施肥。測定結果如下頁表1、表2、表3。

由表1、表2、表3可知，3個鄉(xiāng)鎮(zhèn)胡柚生長基地土壤中速效磷、速效鉀的含量差異較大，其他指標差異不大，東案鄉(xiāng)胡柚生長基地土壤中速效磷、速效鉀的含量明顯高于其他2個鎮(zhèn)。

3.2 檸檬苦素的檢測方法

檸檬苦素的檢測質量濃度在50μg/mL～800μg/mL范圍內(nèi)，按選定的色譜條件進行HPLC分析，以保留時間定性，以峰面積對標準品的質量濃度繪制工作曲線。結果表明，在該濃度范圍內(nèi)呈良好線性關系，峰面積與質量濃度的線性回歸方程為Y=109 741X-607 677，相關系數(shù) r=0.999 6。當信噪比S/N=3時，檸檬苦素的檢測限為0.028 μg/g。精密度好，穩(wěn)定性好，加標回收率在90%以上。

表1 青石鎮(zhèn)胡柚基地周邊范圍內(nèi)土壤基本肥力

表2 東案鄉(xiāng)胡柚基地周邊范圍內(nèi)土壤基本肥力

表3 球川鎮(zhèn)胡柚基地周邊范圍土壤基本肥力

3.3 不同胡柚基地的胡柚樣品中檸檬苦素含量

本研究選取3個鄉(xiāng)鎮(zhèn)常山胡柚基地的3個胡柚專業(yè)合作社的胡柚樣品。因為胡柚種子量少，不利于胡柚深加工規(guī)模發(fā)展，所以分別取胡柚皮、海綿層、囊衣進行研究。以水作為提取溶劑，在一定的提取條件下，得到的胡柚不同部位的檸檬苦素含量見表4。

表4 胡柚不同部位的檸檬苦素含量（水提?。?/p>

由表4可知，不同胡柚基地的常山胡柚不同部位中檸檬苦素含量變化規(guī)律基本相同，胡柚皮中最多，其次是囊衣，最后是海綿層。

3.3.1 以水作為提取溶劑進行提取

以水作為提取溶劑，提取溫度80℃，料液比1∶25（g∶mL），提取時間90 min，胡柚皮中檸檬苦素含量可達2.68 mg/g，囊衣中檸檬苦素含量可達1.13 mg/g，海綿層中檸檬苦素含量可達0.88 mg/g。

3.3.2 以水作為提取溶劑超聲提取

以水作為提取溶劑超聲提取，提取溫度80℃，料液比1∶25（g∶mL），提取時間90min，胡柚皮中檸檬苦素含量可達3.01 mg/g，囊衣中檸檬苦素含量可達1.37mg/g，海綿層中檸檬苦素含量可達1.12mg/g。

表5 胡柚不同部位的檸檬苦素含量（超聲水提取）

4 結論

本研究主要是為常山胡柚中檸檬苦素物質的功能性應用及胡柚深加工行業(yè)中的脫苦提供理論基礎。研究結果表明，常山胡柚不同部位中檸檬苦素的含量也不同，胡柚皮中含量最高，囊衣次之，海綿層中含量最低。土壤中的速效磷、速效鉀的含量對胡柚中檸檬苦素的含量有一定的影響，速效磷、速效鉀含量高的土壤，胡柚中檸檬苦素的含量相對較低。以水作為提取溶劑，提取溫度80℃，料液比1∶25（g∶mL），提取時間90 min，胡柚皮中檸檬苦素含量可達2.68 mg/g，囊衣中檸檬苦素含量可達1.13 mg/g，海綿層中檸檬苦素含量可達0.88 mg/g。超聲輔助提取，胡柚皮中檸檬苦素含量可達3.01 mg/g，囊衣中檸檬苦素含量可達1.37 mg/g，海綿層中檸檬苦素含量可達1.12 mg/g。

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Study on content of limonin in different tissues of citrus changshan-huyou*

LIU Xiaozheng**YAN XiaoliHU Dan SHI Tanghong ZHAN Yuanyi
（Testing center for fruit quality of Zhejiang province，Zhejiang Changshan 324200，China）

利用高效液相色譜法檢測常山胡柚中檸檬苦素的含量，并對常山3個不同胡柚基地的胡柚不同部位中檸檬苦素的含量進行了對比分析。結果表明，不同基地的常山胡柚不同部位中檸檬苦素含量變化規(guī)律基本相同，其中胡柚皮中含量最多，其次是囊衣，最后是海綿層。用水作為提取溶劑，提取溫度80℃，料液比1∶25(g∶mL)，提取時間90 min，胡柚皮中檸檬苦素含量達2.68 mg/g，囊衣中檸檬苦素含量可達1.13 mg/g，海綿層中檸檬苦素含量可達0.88 mg/g。超聲輔助提取時，含量依次為3.01 mg/g、1.37 mg/g、1.12 mg/g。

常山胡柚；檸檬苦素；提取；檢測

Todevelopasensitivehighperformanceliquidchromatography（HPLC）methodtodeterminelimoninin Citrus chang shan-huyou.Citrus changshan-huyou of three bases in changshan were selected.Results showed:the changelawoflimonincontentofcitruschangshan-huyouindifferentbaseswasthesame.Thelimonincontentofcitrus chang shan-huyou peel was the highest and the limonin content of interlayer took second place,the limonin content of cystmembranewasleast.Theoptimumconditionsofwaterextractionwereachievedasfollows:soakingtemperatureas 80℃,the ratio of materials to solution as 1∶25(g∶mL),extraction time as 90 min.The limonin content of citrus chang shan-huyoupeelwas2.68mg/g.Thelimonincontentofcitruschangshan-huyouinterlayerwas1.13mg/g.Thelimonin content of citrus chang shan-huyou cyst membrane was 0.88 mg/g.The limonin content with ultrasonic extraction underthesameconditionwas3.01mg/ginpeel,1.37mg/gininterlayerand1.12mg/gincystmembrane.

citrus changshan-huyou peel；limonin；extraction；determine

TS255.7

A

1673-6044（2017）02-0054-04

10.3969/j.issn.1673-6044.2017.02.015

國家質檢總局項目，（2012QK317）。

**劉曉政，女，1982年出生，2009年畢業(yè)于浙江工商大學食品科學專業(yè)，碩士，工程師。

2017-03-19