江 露， 汪善良

(貴州安為天檢測技術有限公司， 貴州 貴陽 550000)

反相高效液相色譜法測定植物油中苯并芘的研究

江 露， 汪善良*

(貴州安為天檢測技術有限公司， 貴州 貴陽 550000)

建立了植物油中苯并芘含量的反相高效液相色譜檢測方法。采用四氫呋喃- 乙腈的混合體系溶解油脂，將試樣液注入高效液相色譜儀中進行檢測。經(jīng)C18柱分離，熒光檢測器檢測，激發(fā)波長384 nm，發(fā)射波長406 nm，V(流動相乙腈)∶V(1‰乙酸水)(88∶12)，流速為1.0 mL/min，保留時間定性，苯并芘標準品外標定量。該方法重復性限r(nóng)為0.81和再現(xiàn)性限R為0.84，均大于2次測定結(jié)果絕對差值0.1，回收率達90%以上，線性范圍為0.5～100 ng/mL，方法的檢出限為0.09 μg/kg。此方法簡單快捷、檢測成本低，適用于植物油中苯并芘的快速測定。

反相高效液相色譜法； 苯并芘； 植物油

苯并芘又稱苯并(α)芘，英文縮寫B(tài)aP，是一種常見的高活性間接致癌物[1-2]，情節(jié)嚴重可致畸形、突變。食品中苯并芘的來源廣泛，比如熏烤肉類、高溫油炸食品等。我國現(xiàn)行國家標準GB 2762—2012對食品中苯并芘的限量有著嚴格的要求，其中對油脂及其制品的限量指標為10 μg/kg[3]。苯并芘的檢測方法多樣，有氣相色譜- 質(zhì)譜聯(lián)用法[4-6]、薄層掃描法[7]、熒光分光光度法[8-9]、紫外分光光度法[10]、酶聯(lián)免疫吸附測定法[11]、膠體金法[12]、液相色譜- 質(zhì)譜聯(lián)用法[13]、高效液相色譜法[14-15]等等，高效液相色譜法在眾多方法中靈敏度高、成本低而被廣泛使用。我國雖已有動植物油脂中苯并芘的檢測標準GB/T 22509—2008[15]，但存在樣品前處理繁瑣、自制層析柱柱效不穩(wěn)定、試驗成本高的局限性。李琴等[14]在國標的方法上，由自制層析柱改進為Cleanert BaP苯并芘專用固相萃取柱而得到一種快速測定苯并芘的方法，但并未克服成本高的難題。本文將萃取劑改為四氫呋喃和乙腈的混合溶液，過膜后直接上機測定。通過多次反復試驗，發(fā)現(xiàn)該方法簡單快捷、準確，大大降低了成本。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

乙腈 (色譜純)，Acetonitrile公司；四氫呋喃(色譜純)，阿拉丁公司；苯并芘標準品，Dr Ehrenstorfer GmbH公司；菜籽油，貴陽市市西路集貿(mào)市場散裝菜籽油雜貨鋪。

1.2 儀器與設備

UltiMate 3000型高效液相色譜儀(配有可調(diào)波長熒光檢測器)，美國Thermo公司。

1.3 實驗方法

1.3.1色譜條件

色譜柱，ODS- C18(5 μm)，150 mm×4.6 mm(內(nèi)徑)；進樣體積，10 μL；熒光檢測器，激發(fā)波長384 nm、發(fā)射波長406 nm；柱溫30 ℃；流動相，V(乙腈)∶V(1‰乙酸水)=88∶12；流速1.0 mL/min。

1.3.2標準溶液的制備

準確稱取苯并芘標準品5 mg，準確至0.1 mg，溶于乙腈，在容量瓶中定容至10 mL，混勻后逐級稀釋至0.5 μg/mL。用0.5 μg/mL的標準使用液梯度稀釋質(zhì)量濃度為100，50，20，10，5.0，2.0，1.0，0.5 ng/mL標準工作溶液，取10 μL注入液相色譜儀分析。

1.3.3樣品前處理

準確稱取1 g(精確至0.000 1 g)菜籽油于10 mL試管中，準確加入5.00 mL四氫呋喃，渦旋混勻后，用乙腈定容至刻度，搖勻，放置10 min后，過0.45 μm微孔濾膜，取10 μL注入液相色譜儀進行分析。

1.4 苯并芘質(zhì)量比的計算方法

苯并芘質(zhì)量比的計算見式(1)：

(1)

式(1)中：w為樣品中苯并芘的質(zhì)量比，μg/kg；C為標準曲線上查得的試樣中苯并芘的質(zhì)量濃度，ng/mL；C0為空白試樣中苯并芘質(zhì)量濃度，ng/mL；VD為定容的體積，mL；m為稱樣量，g；n為整個操作過程中稀釋倍數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍、標準曲線和檢出限

苯并芘在0.5～100 ng/mL內(nèi)線性良好，回歸方程：y=4 927.930 9x，相關系數(shù)0.999 5，通過3倍信噪比的方式計算其檢出限，取樣量為1 g時，方法檢出限為0.09 μg/kg。苯并芘標準溶液色譜圖(20 ng/mL)見圖1。

圖1 苯并芘標準溶液色譜圖Fig.1 Chromatogram of BaP standard solution

2.2 樣品分析

對同一樣品進行分析，圖2和圖3分別為樣品色譜圖和樣品加標后的色譜圖。從圖中可以看出，樣品中的苯并芘被很好地分離開來，無雜質(zhì)干擾峰。

圖2 樣品色譜圖Fig.2 Chromatogram of sample

圖3 樣品加標色譜圖Fig.3 Chromatogram of sample with a small amount of standard solution

2.3 精密度水平及加標回收率

取1 g菜籽油進行平行分析，2次測得結(jié)果分別為5.8，5.9 μg/kg。向1 g菜籽油樣品添加質(zhì)量濃度為0.5 μg/mL的苯并芘溶液40 μL，按樣品相同測定步驟和條件進行分析，精密度水平及加標回收率結(jié)果列于表1和表2，重復性限r(nóng)和再現(xiàn)性限R均大于平行測定絕對差值，滿足95%置信度要求，加標回收率達到90%以上，滿足要求。

表1 精密度水平

表2 加標回收率

同時，按照國標GB/T 22509—2008對同一樣品進行平行分析和加標平行樣分析，稱樣量為0.4g，由表1和表2可知，國標法在測定過程中存在損失，可能是由于層析柱柱效不穩(wěn)定所致，并且重復性限r(nóng)和再現(xiàn)性限R趨近于平行測定絕對差值，精密度水平較本法低。加標回收率方面，國標法測定結(jié)果也較低。由此可見，本法前處理簡單，試驗成本低，同時還提高了精密度和回收率，方法高效實用。

3 結(jié) 論

采用反相高效液相色譜法對植物油中苯并芘的含量進行測定，采用四氫呋喃- 乙腈作為萃取液的提取方法，結(jié)果檢出限達到0.09 μg/kg，回收率達90%以上，穩(wěn)定性良好。本方法簡單快捷、檢測成本低，適用于植物油中苯并芘的快速測定。

[1] 褚文靜, 常福厚, 于東升, 等. 苯并芘的致癌機理及抗煙毒中草藥的研究進展[J]. 北方藥學, 2015, 12(1): 100-102.

CHU W J, CHANG F H, YU D S, et al. The research progress of the mechanism of carcinogenesis induced by BaP and the Chinese herbs against the smoke toxicity[J]. Journal of North Pharmacy, 2015, 12(1): 100-102.

[2] 吳丹. 食品中苯并芘污染的危害性及其預防措施[J]. 食品工業(yè)科技, 2008, 29(5): 309-311.

WU D. The harm and prevention measures of benzopyrene pollution in food[J]. Science and Technology of Food Industry, 2008, 29(5): 309-311.

[3] 中華人民共和國衛(wèi)生部. 食品安全國家標準 食品中污染物限量: GB 2762—2012[S]. 北京: 中國標準出版社, 2012.

[4] 徐文君, 王峰, 朱曉軍, 等. 氣質(zhì)聯(lián)用法測定食用植物油中的多環(huán)芳烴[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學, 2014, 42(11): 339-341.

[5] 楊君, 王建華, 宮萍, 等.同位素稀釋- 氣相色譜- 三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法測定植物油中的多環(huán)芳烴[J]. 食品科學, 2013, 34(22): 202-207.

YANG J, WANG J H, GONG P, et al. Determination of polycyclic aromatic hydrocarbons(PAHs) in vegetable oil by gas chromatography coupled with triple quadrupole mass spectrometry using isotope dilution[J]. Food Science, 2013, 34(22): 202-207.

[6] HOSSAIN M A, SALEHUDDIN S M. Polycyclic aromatic hydrocarbons(PAHs) in edible oils by gas chromatography coupled with mass spectroscopy [J]. Arabian Journal of Chemistry, 2012, 5(3): 391-396.

[7] 厲曙光, 潘定華. 薄層掃描法測定食用油及其加熱產(chǎn)物中多環(huán)芳烴含量[J]. 衛(wèi)生研究, 1991, 20(4): 44-46.

[8] 中華人民共和國衛(wèi)生部. 食品中苯并(a)芘的測定: GB/T 5009.27—2003[S]. 北京: 中國標準出版社, 2003.

[9] 陳亮. 多環(huán)芳烴的檢測及降解處理研究[D]. 綿陽: 西南科技大學, 2009.

[10] 弓玉紅, 郝林, 郭凱凱. 萃取- 紫外分光光度法測定土壤中3, 4-苯并芘含量[J]. 山西農(nóng)業(yè)科學, 2012, 40(4): 383-385.

GONG Y H, HAO L, GUO K K. Determination of 3, 4-benzopyrene content in the soil with the solvent extraction and UV absorption method[J]. Journal of Shanxi Agricultural Sciences, 2012, 40(4): 383-385.

[11] 史巧巧. 苯并芘的免疫學快速檢測技術研究[D].鄭州: 河南工業(yè)大學, 2014.

[12] 劉波, 王宇, 戚平, 等. 食用油中致癌物苯并芘的快速免疫檢測膠體金層析試紙條研制[J]. 中國油脂, 2016, 41(7): 68-72.

LIU B, WANG Y, QI P, et al. Development of colloidal gold immunochromatographic strip for rapid detection of carcinogens benzo(a)pyrene in edible oil[J]. China Oils and Fats, 2016, 41(7): 68-72.

[13] 王浩, 楊紅梅, 郭啟雷, 等. 高效液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定植物油中苯并芘與黃曲霉毒素B1, B2, G1, G2[J]. 分析測試學報, 2014, 33(8): 911-916.

WANG H, YANG H M, GUO Q L, et al. Simultaneous determination of benzo(a)pyrene and aflatoxins(B1, B2, G1, G2) in vegetable oil by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Journal of Instrumental Analysis, 2014, 33(8): 911-916.

[14] 李琴, 楚元衛(wèi). 高效液相色譜法快速測定植物油中苯并芘[J]. 農(nóng)業(yè)機械, 2013,23: 42-44.

[15] 國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局, 中國國家標準化管理委員會. 動植物油脂 苯并(a)芘的測定 反相高效液相色譜法: GB/T 22509—2008[S]. 北京: 中國標準出版社, 2008.

ReversedPhaseHighPerformanceLiquidChromatographyMethodWasDevelopedforDeterminationofBenzopyreneinVegetableOil

JIANG Lu, WANG Shanliang*
(GuizhouAweitianDetectingTechnologyCoLtd,Guiyang550000,China)

A method for determination of benzopyrene (BaP) in vegetable oil by reversed phase high performance liquid chromatography (RP- HPLC) was established. Vegetable oil was dissolved in the mixed liquor of tetrahydrofuran and acetonitrile, then sample liquid was injected into HPLC for testing. BaP was separated by C18 colum, and quantified by fluorescence detector. The excitation wavelength was 384 nm, and the emission wavelength was 406 nm. Mobile phase was acetonitrile and 1‰ acetic water (88∶12), and the flow rate was 1.0 mL/min. The retention time was applied for the qualitative analysis with BaP as the external standard. The method repeatability limit(r) 0.81 and reproducibility limit(R) 0.84 were more than twice the determination results of absolute difference value of 0.1. Meanwhile, the recovery rate was above 90%, and the linear range was from 0.5 ng/mL to 100 ng/mL. The method detection limit was 0.09 μg/kg. This method was simple and low cost, which was suitable for the rapid determination of benzopyrene in vegetable oil.

RP- HPLC; benzopyrene; vegetable oil

10.3969/j.issn.2095-6002.2017.05.015

2095-6002(2017)05-0091-04

江露，汪善良.反相高效液相色譜法測定植物油中苯并芘的研究[J]. 食品科學技術學報，2017,35(5):91-94.

JIANG Lu, WANG Shanliang. Reversed phase high performance liquid chromatography method was developed for determination of benzopyrene in vegetable oil[J]. Journal of Food Science and Technology, 2017,35(5):91-94.

TS227; TS207.7; O657.7

A

2016-09-22

江 露，男，助理工程師，主要從事食品安全與環(huán)境檢測方面的研究；

*汪善良，男，高級工程師，主要從事快速檢測產(chǎn)品研發(fā)等相關工作，通信作者。

(責任編輯：檀彩蓮)