范文昌 梅全喜

實(shí)驗(yàn)研究

HPLC法測(cè)定金銀崗梅顆粒中梔子苷的含量※

范文昌1梅全喜2

（1 廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院中醫(yī)保健學(xué)院，廣州 510520；2 廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山醫(yī)院科教科，廣州 528401）

目的 建立測(cè)定金銀崗梅顆粒中梔子苷含量的方法；方法 采用高效液相色譜（HPLC）法。色譜柱為YMC-Pack ODS-A(250×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相以水為流動(dòng)相A，以乙腈為流動(dòng)相B，檢測(cè)波長(zhǎng)：240 nm，流速為1.0 mL/min，進(jìn)樣量為10 μL。結(jié)果 梔子苷質(zhì)量濃度線性范圍在3.14～62.70 μg/mL（r=0.99999，n=6），平均加樣回收率為102.73%，RSD為0.72%。結(jié)論 本方法結(jié)果準(zhǔn)備、快速、簡(jiǎn)便、專屬性好，重現(xiàn)性良好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

HPLC；金銀崗梅顆粒；梔子苷；中藥化學(xué)

自擬方金銀崗梅顆粒由梔子、金銀花、崗梅根、一點(diǎn)紅、火炭母、三丫苦、甘草等組成的中藥新藥，用于治療急慢性咽炎、扁桃體炎等咽喉疾病?？寡准版?zhèn)痛作用研究表明，該配方對(duì)疼痛有一定的鎮(zhèn)痛作用，對(duì)變質(zhì)性炎癥有抗炎作用[1]。該方中梔子為君藥，具有瀉火除煩、清熱利濕、涼血解毒的功效，臨床用于熱病心煩，濕熱黃疸，淋證澀痛，血熱吐衄，目赤腫痛，火毒瘡瘍。梔子中含有黃酮類、三萜類、環(huán)烯醚萜類、苯丙素類等[2]，以梔子苷為主要有效成分。梔子苷已為多種制劑的含量測(cè)定指標(biāo)，如舒肝寧注射液[3]。為了更好控制該顆粒的質(zhì)量，本文采用高效液相色譜（HPLC） 法測(cè)定金銀崗梅顆粒中的有效成分梔子苷含量。

1 儀器與樣品

島津 LC-20AT；島津SPD-M20A全波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器；Labsolutions數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)；Waters 2695；Waters 2996全波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器；Empower數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)。對(duì)照品：梔子苷對(duì)照品（來(lái)源：中國(guó)藥品生物制品鑒定所，批號(hào)：749-9202）。試劑：乙腈（HPLC Merck），水為制備純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱YMC-Pack ODS-A(250×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相以水為流動(dòng)相A，以乙腈為流動(dòng)相B，檢測(cè)波長(zhǎng)：240 nm，流速為1.0 mL/min，進(jìn)樣量為10 uL。

2.2 顆粒制備 金銀花等七味藥材，加水煎煮2次，每次10倍量2 h，過(guò)濾，合并濾液，75℃減壓濃縮至相對(duì)密度1.10～1.15（30℃）稠膏；加入適量糖分、糊精（糖粉∶糊精=2∶1），制成顆粒45 g，即得。

2.3 供試品溶液制備 取本品適量，研細(xì)，取約0.2 g，精密稱定為0.2018 g，置于50 mL具塞三角瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率59 kHz）15 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液3 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 陰性樣品溶液制備 取梔子陰性樣品約0.2 g，精密稱定為0.2330 g，樣品處理過(guò)程參照供試品溶液。

2.5 梔子苷對(duì)照品溶液 取梔子苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解稀釋制成每1 mL含33.44 μg的溶液，即得。

2.6 對(duì)照品制備 取梔子苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇稀釋制成每1 mL含33.44 μg的溶液，即得。

2.7 專屬性試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品、供試品、陰性對(duì)照品依法進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果見(jiàn)圖1～4。

圖1 梔子苷對(duì)照品測(cè)定圖譜

圖2 陰性樣品測(cè)定圖譜

圖3 金銀崗梅顆粒供試品測(cè)定圖譜

圖4 自上至下依次為樣品、對(duì)照品及陰性樣品

結(jié)果可知，梔子苷的保留時(shí)間約為18.1 min，陰性樣品中無(wú)雜質(zhì)峰干擾，供試品中雜質(zhì)峰與梔子苷的最小分離度R約為3.306，拖尾因子T為1.195，理論塔板數(shù)為13179，分離效果較好。

2.8 儀器精密度 取濃度為37.62 μg/mL梔子苷對(duì)照品溶液，按照色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 儀器精密度測(cè)定結(jié)果

結(jié)論：梔子苷峰面積RSD為0.09%，說(shuō)明儀器精密度符合要求。

2.9 線性關(guān)系考察 取梔子苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋，制成每1 mL含418 μg的對(duì)照品溶液，精密移取對(duì)照溶液6 mL，置于20 mL量瓶中，加甲醇稀釋定容得對(duì)照品線性儲(chǔ)備液。精密吸取線性儲(chǔ)備液0.25 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋定容，得1～6號(hào)線性溶液。取線性溶液，按照上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，以對(duì)照品濃度X（μg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見(jiàn)表2、圖5。

表2 梔子苷線性關(guān)系考察

圖5 梔子苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

結(jié)論：梔子苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=15056X+2062.4，r=0.9999，表明梔子苷在3.14～62.70 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.10 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品顆粒粉末6份，每份約0.2 g，精密稱定，分別按照供試品溶液制備方法處理，依法進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算樣品中梔子苷含量。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)論：樣品中梔子苷含量為0.96%，RSD為0.31%，本分析方法重復(fù)性良好。

2.11 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取室溫條件下的同一供試品溶液，按照色譜條件，分別于0、2、4、6、8、12、18、24 h進(jìn)樣測(cè)定梔子苷面積，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)論：梔子苷面積均值為555155，RSD為0.42%，故在室溫條件下，供試品溶液中梔子苷在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.12 回收率試驗(yàn) 取已知含量的本品顆粒細(xì)粉6份，每份約0.1 g，精密稱定，精密加入對(duì)照品溶液 (稱取梔子苷對(duì)照品11 mg，精密稱定為10.45 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得)2.5 mL，加入50%甲醇48 mL，按照供試品溶液制備方法處理，依法進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 梔子苷回收率試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)論：梔子苷平均回收率為102.73%，RSD為0.72%，本法有較好的回收率。

3 討論

3.1 色譜條件選擇 色譜柱：YMC-PackODS-A(250×4.6mm，5 μm)；流動(dòng)相：以水為流動(dòng)相A，以乙腈為流動(dòng)相B。結(jié)果可知，梔子苷保留時(shí)間約為18.0 min，陰性樣品無(wú)雜峰干擾，供試品溶液中與相鄰雜質(zhì)峰分離度為3.925，符合要求，拖尾因子為1.106，理論塔板數(shù)為13890，結(jié)果較好。該色譜條件適用于金銀崗梅顆粒中梔子苷測(cè)定。

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 液相色譜儀，進(jìn)行紫外光譜掃描，結(jié)果在240 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，因此本實(shí)驗(yàn)所用的色譜波長(zhǎng)選擇在240 nm處。

3.3 溶劑的選擇 當(dāng)溶劑為50%甲醇、30%甲醇、30%乙醇時(shí)，梔子苷提取效率最優(yōu)，但從樣品過(guò)濾及雜質(zhì)含量角度考慮，最終確定50%甲醇作為提取溶劑。本實(shí)驗(yàn)建立的HPLC法測(cè)定金銀崗梅顆粒中梔子苷的含量，該方法準(zhǔn)備、快速、簡(jiǎn)便、專屬性好，重現(xiàn)性良好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

[1]]范文昌.復(fù)方金銀崗梅合劑抗炎及鎮(zhèn)痛作用研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2015，13（1）:136-138.

[2]左月明，嚴(yán)歡，張忠立，等.梔子化學(xué)成分研究(Ⅵ)[J].中藥材，2017，3(40):596-599.

[3]何峰，張昀，張艷萍.HPLC法測(cè)定梔子提取物中梔子苷的含量[J].貴州醫(yī)藥，2017，41(3):245-247.

Content Determination of Geniposide in Jinyin Gangmei Granules by HPLC

FAN Wenchang1,MEI Quanxi2
(1.College of Traditional Chinese Medicine Health,Guangdong Food and Drug Vocational College,Guangdong Province,Guangzhou 510520,China;2.Science and Education Department,Zhongshan Hospital Affiliated to Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangdong Province,Zhongshan 528401,China)

Objective To establish high performance liquid chromatography (HPLC)for determining the content of geniposide in Jinyin Gangmei granules.Methods The HPLC method was used.The chromatogram conditions were YMC-Pack ODS-A (250×4.6mm,5μm)column.The mobile phase A was water.The mobile phase B was acetonitrile.The detection wavelength was 240nm,flow rate was 1.0 ml/min,and the injection volume was 10ul.Results Geniposide concentration linear range was 3.14～62.70μg/ml(r=0.99999,n=6),and the average recovery was 102.73%with RSD of 0.72%.Conclusion The mothod is accurate,rapid,simple and specific,and has reproducibility.The method can be used for the quality control of the preparation.

HPLC;Jinyin Gangmei granules;geniposide;chemistry of Chinese materia medica

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.21.064

1672-2779（2017）-21-0145-03

廣東省中醫(yī)藥局項(xiàng)目【No.20151026】

2017-09-04）