魏天征 張晉巧 甄 莉*

（1 山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，山西 太原 030001；2 山西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，山西 太原 030001）

須癬毛癬菌對(duì)3種外用抗真菌藥物敏感性的研究

魏天征1張晉巧1甄 莉2*

（1 山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，山西 太原 030001；2 山西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，山西 太原 030001）

目的通過對(duì)3種外用抗真菌藥物（2%酮康唑乳膏，鹽酸布替萘芬乳膏，曲安奈德益康唑乳膏）體外抗真菌活性和藥物敏感性進(jìn)行比較，為臨床的合理用藥提供參考。方法選用臨床分離須癬毛癬菌15株及其標(biāo)準(zhǔn)株1株，用瓊脂擴(kuò)散法作藥敏試驗(yàn)，在瓊脂的含菌平板打孔后分別加入上述3種藥物，培養(yǎng)7 d后測(cè)定各含藥孔周圍的抑菌圈直徑。結(jié)果3種外用藥物對(duì)須癬毛癬菌其均形成抑菌圈，2%酮康唑乳抑菌圈直徑均數(shù)15.94 mm，鹽酸布替萘芬乳膏抑菌圈直徑均數(shù)為68.39 mm，曲安奈德益康唑乳膏抑菌圈直徑均數(shù)為62.32 mm。而任意2組的抑菌圈均數(shù)比較，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.001），2%酮康唑乳膏和鹽酸布替萘芬乳膏臨床菌株與標(biāo)準(zhǔn)菌株抑菌圈均數(shù)比較，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.001）。結(jié)論對(duì)于須癬毛癬菌抗真菌活性而言，鹽酸布替萘芬乳膏優(yōu)于曲安奈德益康唑乳膏，曲安奈德益康唑乳膏優(yōu)于酮康唑乳膏，須癬毛癬菌臨床菌株對(duì)于酮康唑乳膏與鹽酸布替萘芬乳膏不排除耐藥情況的產(chǎn)生。

抗真菌活性；酮康唑乳膏；鹽酸布替萘芬乳膏；曲安奈德益康唑乳膏；體外培養(yǎng)

皮膚的淺部真菌感染主要由皮膚癬菌和念珠菌屬所致[1]，而常見的皮膚癬菌病有體癬、股癬、頭癬、手癬、足癬及甲癬等。其中體股癬主要由紅色毛癬菌、須癬毛癬菌、疣狀毛癬菌等感染引起，手足癬主要由紅色毛癬菌、須癬毛癬菌、石膏樣毛癬菌等感染引起。雖然外用抗真菌藥物應(yīng)用于臨床取得一定療效，但由于淺部真菌病復(fù)發(fā)率較高，患者依從性差，耐藥菌的出現(xiàn)等特點(diǎn)，患者生活質(zhì)量受到嚴(yán)重影響。本次實(shí)驗(yàn)研究須癬毛癬菌對(duì)3種常見外用抗真菌藥物（2%酮康唑乳膏，鹽酸布替萘芬乳膏，曲安奈德益康唑乳膏）的體外抗真菌活性和藥物敏感性。通過3種外用抗真菌藥物抑菌環(huán)大小比較其體外抗真菌活性。通過臨床分離菌株菌株與標(biāo)準(zhǔn)菌株抑菌環(huán)大小比較3種外用抗真菌藥物敏感性，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株：本研究臨床分離菌株須癬毛癬菌15株，標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC4439，均購(gòu)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病研究所。

1.1.2 培養(yǎng)基：根據(jù)實(shí)驗(yàn)菌株采取適合其生長(zhǎng)的沙堡弱培養(yǎng)基（SDA），成分為蛋白胨10 g、葡萄糖40 g、瓊脂20 g。

1.1.3 試驗(yàn)用藥：藥品購(gòu)于太原國(guó)營(yíng)藥房，且均在有效期內(nèi)。酮康唑乳膏，每克含主要成分酮康唑20 mg，（批號(hào)：160428522）西安楊森制藥有限公司；鹽酸布替萘芬乳膏，每克含鹽酸布替萘芬每克含10 mg，（批號(hào)：55151101）西安楊森制藥有限公司；曲安奈德益康唑乳膏，每克含曲安奈德1 mg，硝酸益康唑10 mg（批號(hào)：160127274）魯南貝特制藥有限公司。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)方法：①活化菌株：須癬毛癬菌用斜面沙堡瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度為28 ℃，培養(yǎng)7 d。②取直徑9 cm沙堡瓊脂培養(yǎng)基，制作菌懸液，將芝麻大小菌團(tuán)溶于1 mL生理鹽水中，用振蕩器充分震蕩均勻，調(diào)節(jié)菌懸液濁度至0.5～1麥?zhǔn)蠞岫取＂壑谱骱桨澹河脽o菌棉簽蘸取菌懸液后，將其均勻涂布于實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基平板表面。④打孔加藥：在涂菌的培養(yǎng)基上用直徑4 mm的打孔器打孔，用1 mL無菌注射器將鹽酸布替萘芬乳膏、2%酮康唑乳膏、曲安奈德益康唑乳膏打入孔中，使藥膏與孔邊緣平齊并充分接觸，勿使藥膏沾染孔外瓊脂平面。⑤培養(yǎng)條件菌株置28 ℃，培養(yǎng)7 d。⑥結(jié)果觀察。觀察各藥膏孔周圍抑菌圈大小并記錄其直徑。抑菌圈直徑取最大徑和最小徑的均數(shù)（也 =quot;29quot; 紙書=quot;22quot;/gt;可用最大和最小半徑的均數(shù)乘2代表直徑）。

圖1 3種藥膏對(duì)須癬毛癬菌以及標(biāo)準(zhǔn)菌的抑藥效果比較（其中，（a）、（b）、（c）分別為2%酮康唑乳膏，鹽酸布替萘芬乳膏，曲安奈德益康唑乳膏臨床菌株的抑菌圈，（d）、（e）、（f）分別為2%酮康唑乳膏，鹽酸布替萘芬乳膏，曲安奈德益康唑乳膏標(biāo)準(zhǔn)菌株的抑菌圈）

1.2.2 統(tǒng)計(jì)方法：采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)表示為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差。采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)單因素方差對(duì)不同藥物組間數(shù)據(jù)分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。不同藥物組中，臨床菌株與標(biāo)準(zhǔn)菌株比較采用單樣本t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05，Plt;0.05表明差異有顯著性，Plt;0.01表明差異非常顯著。

2 結(jié) 果

3種藥膏對(duì)須癬毛癬菌以及標(biāo)準(zhǔn)菌的抑藥效果比較見圖1，3種藥膏在SDA培養(yǎng)基中對(duì)須癬毛癬菌抑菌圈半徑的比較見表1。

表1 3種藥膏在SDA培養(yǎng)基中對(duì)須癬毛癬菌抑菌圈半徑的比較（±s，mm）

表1 3種藥膏在SDA培養(yǎng)基中對(duì)須癬毛癬菌抑菌圈半徑的比較（±s，mm）

注：A為2%酮康唑乳膏，B為鹽酸布替萘芬乳膏，C為曲安奈德益康唑乳膏

菌種 A B C須癬毛癬菌1 15.04±0.62 68.71±0.01 62.09±0.65須癬毛癬菌2 16.41±0.13 65.36±0.06 59.11±0.31須癬毛癬菌3 17.57±0.22 69.25±0.50 65.43±1.10須癬毛癬菌4 18.99±0.66 67.10±0.59 62.16±0.71須癬毛癬菌5 16.94±0.68 65.22±1.73 61.71±0.55須癬毛癬菌6 15.57±0.34 66.77±0.19 64.99±0.53須癬毛癬菌7 14.08±0.78 67.12±0.33 65.82±0.64須癬毛癬菌8 15.54±0.26 65.42±0.30 61.64±0.56須癬毛癬菌9 16.38±0.05 70.65±0.50 58.77±0.50須癬毛癬菌10 16.07±0.62 71.75±0.46 62.53±0.53須癬毛癬菌11 13.98±0.74 72.29±0.11 60.62±0.57須癬毛癬菌12 14.95±0.39 69.17±1.24 61.37±0.14須癬毛癬菌13 15.20±0.36 65.39±0.16 61.91±0.33須癬毛癬菌14 14.35±1.00 67.29±0.25 61.64±0.60須癬毛癬菌15 14.39±0.19 70.89±0.61 64.79±0.56標(biāo)準(zhǔn)菌株 19.61±0.44 71.88±0.50 62.63±0.41

根據(jù)表1，采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)的方差分析對(duì)須癬毛癬菌在3種藥膏周圍的抑菌圈直徑進(jìn)行分析，得F值為2976.60（Plt;0.001），說明3種藥膏形成的抑菌圈的大小差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

進(jìn)一步用LSD法對(duì)3種藥膏的抑菌圈的大小進(jìn)行兩兩之間比較，得出3種藥膏中任意2種間的抑菌圈大小差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.001）。故可認(rèn)為3種藥膏的抑菌圈大小均不同，鹽酸布替萘芬組大于曲安奈德益康唑組。曲安奈德益康唑組大于酮康唑組。

采用單樣本t檢驗(yàn)，將各藥物組中的臨床菌株與標(biāo)準(zhǔn)菌進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)曲安奈德益康唑組中兩種菌株間抑菌圈大小不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），曲安奈德益康唑組的臨床菌株與標(biāo)準(zhǔn)菌抑菌圈相差不大，而酮康唑組與鹽酸布替萘芬組中其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.001），酮康唑組與鹽酸布替萘芬組中臨床菌株抑菌圈均數(shù)小于標(biāo)準(zhǔn)菌株。

3 討 論

酮康唑?yàn)檫溥蝾惪拐婢幬铮淇咕V廣，尤其對(duì)皮膚癬菌、念珠菌和馬拉色菌具有明顯的抑制作用及較高的抗菌活性[2]，作用機(jī)制為通過抑制14-α-脫甲基酶，從而抑制了羊毛甾醇轉(zhuǎn)化為麥角固醇，gt;來干預(yù)細(xì)胞膜的合成。鹽酸布替萘芬為芐胺類抗真菌藥物，特異性地gt;抑制角鯊烯環(huán)氧化酶，從而抑制了鯊烯轉(zhuǎn)化為羊毛甾醇，破壞了真菌gt;細(xì)胞膜的功能。硝酸益康唑?qū)龠溥蜓苌铮瑢?duì)真菌的作用機(jī)制是抑制gt;真菌細(xì)胞膜上麥角固醇和磷脂的生物合成，進(jìn)一步破壞真菌細(xì)胞膜，gt;導(dǎo)致細(xì)胞破壞死亡[3-4]。

實(shí)驗(yàn)中3種藥物均有抑菌圈形成，說明須癬毛癬菌對(duì)其都具有敏gt;感性，并且鹽酸布替萘芬乳膏抑菌效果優(yōu)于曲安奈德益康唑乳膏，gt;曲安奈德益康唑乳膏抑菌效果優(yōu)于酮康唑乳膏。咪唑類藥物雖然抗gt;菌譜廣，但對(duì)皮膚癬菌的活性相對(duì)較弱，這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果與臨床文獻(xiàn)gt;一致[5-7]，另有體外研究顯示，鹽酸布替萘芬對(duì)皮膚癬菌療效優(yōu)于咪唑gt;類外用抗真菌藥[8]，而芐胺類和咪唑類藥物分別作用于真菌細(xì)胞膜合gt;成代謝中的不同位置，也造成布替萘芬對(duì)須癬毛癬菌抑菌活性強(qiáng)。從gt;藥品成分分析，酮康唑乳膏每克含主要成分酮康唑20 mg。曲安奈德gt;益康唑乳膏，每克含硝酸益康唑10 mg，從性價(jià)比而言，曲安奈德益gt;康唑乳膏抑菌效果較好。以上3種藥物都有一定的抗炎作用，酮康唑gt;的抗炎作用于氫化可的松相當(dāng)，而曲安奈德為中效糖皮質(zhì)激素，具有g(shù)t;抗炎和收縮血管等作用，二者需要進(jìn)一步在實(shí)際臨床應(yīng)用觀察療效。gt;同時(shí)，與標(biāo)準(zhǔn)菌株對(duì)照，酮康唑組和鹽酸布替萘芬組臨床菌株抑菌效gt;果均較標(biāo)準(zhǔn)菌株差，不排除耐藥情況的產(chǎn)生。隨著抗真菌藥物的廣泛gt;應(yīng)用，真菌的耐藥出現(xiàn)不可避免，會(huì)影響治療效果。目前，丙烯胺類gt;的耐藥性機(jī)制已在一些酵母菌中發(fā)現(xiàn)[9]，而鹽酸布替萘芬對(duì)抗念珠菌gt;的與唑類抗真菌外用藥相比作用較弱。應(yīng)用瓊脂擴(kuò)散法對(duì)在同樣培養(yǎng)gt;條件下的藥物成品實(shí)驗(yàn)，其客觀性強(qiáng)，可以作為臨床上淺部真菌病藥gt;物的選擇提供參考價(jià)值。

在實(shí)際用藥過程中，受多重因素的影響，比如患者的一般狀況，gt;免疫能力，以及藥物的吸收面積等等，即便同種藥物對(duì)于不同患者的gt;療效也不盡相同。需要進(jìn)一步臨床的療效與應(yīng)用相結(jié)合，對(duì)于抑菌活gt;性進(jìn)一步探究。

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T.mentagrophytes to Three Topical Antifungal Drug Sensitivity Study

WEI TIAN-zheng1, ZHANG JIN-qiao1, ZHEN Li2

(1 First Clinical Medical College, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China;2 First Af filiated Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China)

ObjectiveThis study on three kinds of topical antifungal drugs (2% ketoconazole cream, butenafine hydrochloride cream, triamcinlone acetonide and econazoie nitrate cream) the comparison of in vitro antifungal activity and drug sensitivity, provide reference for clinical rational drug use.MethodsThe agar diffusion method was used to judge drug sensitivity. Select 15 strains of clinical isolates t.mentagrophytes 1 strain and standard strain,punching AGAR plate containing bacteria, respectively, to join the three drugs, drug cultivation, 7 days to determine the bacteriostatic circle diameter.ResultsThree kinds of drugs is the formation of bacteriostatic ring for t.mentagrophytes.2% ketoconazole cream bacteriostatic circle diameter of 15.94 mm on average, butena fine hydrochloride cream round cloth paste the average diameter of 68.39 mm. triamcinlone acetonide and econazoie nitrate cream average bacteriostatic circle diameter of 62.32 mm. Any bacteriostatic annulus compared two groups of drug, the difference statistically signi ficant (Plt;0.001).Compared with the standard strains, 2% ketoconazole cream and butena fine hydrochloride cream group signi ficant difference (Plt;0.001).ConclusionThe antifungal activity of t. mentagrophytes, cloth butena fine hydrochloride cream is better than that of triamcinlone acetonide and econazoie nitrate cream,triamcinlone acetonide and econazoie nitrate cream is better than that of 2% ketoconazole cream compared with the corresponding standard bacteria, 2%ketoconazole cream and butena fine hydrochloride cream was statistically signi ficant, does not exclude the resistance.

Antifungal activity; 2% ketoconazole cream; Butena fine Hydrochloride cream; Triamcinlone Acetonide and Econazoie Nitrate cream; In vitro

R978.1

B

1671-8194（2017）33-0021-03

*通訊作者：E-mail:zhenli0351.163.com