周志堅，王一然，趙明星，王雅杰，孫繼勇

1綏化市第一醫(yī)院外科，黑龍江 綏化 152000

2第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院腫瘤科，上海 200433

腫瘤的發(fā)生與多種因素相關(guān)，是一個涉及多基因和多階段的生物學(xué)過程，最常見的表現(xiàn)為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路發(fā)生變化[1]，細(xì)胞分裂異常以及生長不受控制，其中DNA損傷修復(fù)障礙和增殖異常起著重要的作用[2]。GADD45A基因可以通過阻滯細(xì)胞周期、修復(fù)DNA損傷和促進(jìn)細(xì)胞凋亡等途徑減少細(xì)胞癌變的可能[3]，所以GADD45A基因突變和腫瘤的發(fā)生有密切的關(guān)系，如肺癌[4]、食管癌[5]、卵巢癌[6]和前列腺癌[7]等。

1 GADD45A的結(jié)構(gòu)和功能

GADD45A屬于GADD45基因家族，是DNA損傷修復(fù)的重要相關(guān)基因，還包括GADD45B和GADD45G等[8]。GADD45A基因位于1號染色體，全長4138 bp，含4個外顯子，轉(zhuǎn)錄的mRNA全長為1355 bp，翻譯的蛋白主要表達(dá)在細(xì)胞核內(nèi)。GADD45A基因是細(xì)胞生長阻滯和DNA損傷修復(fù)基因，是重要的抑癌基因，是p53和BRCA基因調(diào)控的下游基因。GADD45A基因的第3個內(nèi)含子區(qū)段，存在一個保守的p53結(jié)合位點，與p53結(jié)合后，PML/RARα和p53對GADD45A有共調(diào)控關(guān)系，可以促進(jìn)GADD45A基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)[9-10]。GADD45A還可以通過不依賴p53的其他途徑發(fā)揮作用，由BRCA1對GADD45A進(jìn)行調(diào)節(jié)，再通過NEK2維持基因的穩(wěn)定[11]。

2 GADD45A基因突變與腫瘤預(yù)后相關(guān)

GADD45A在56.5%（35/62）的食道癌中表達(dá)陽性，同時GADD45A表達(dá)與病理分期相關(guān)，其陽性表達(dá)的患者生存期更長，預(yù)后較好，而陰性表達(dá)者預(yù)后較差[5]。GADD45A多態(tài)性與卵巢癌的發(fā)病率及預(yù)后相關(guān)，GADD45A攜帶T等位基因（TT+TC）患者的無復(fù)發(fā)生存期（recurrence free survival，RFS）和總生存期（overall survival，OS）更長，提示可以用其基因類型預(yù)測卵巢癌患者的預(yù)后[6]。Reis等[7]的研究發(fā)現(xiàn)，前列腺特異性抗原（prostate-specific antigen，PSA）的特異度不高，但是如果聯(lián)合檢測血液中的GADD45A甲基化DNA水平，敏感度和特異度分別達(dá)到94.1%和87.5%，ROC曲線下面積為0.937。Li等[12]在一項非小細(xì)胞肺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，P53可以激活miRNA-138，激活的miRNA-138結(jié)合AGO2后，miRNA-130b表達(dá)降低，GADD45A表達(dá)升高，導(dǎo)致細(xì)胞G2/M期阻滯，抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖，說明GADD45A與非小細(xì)胞肺癌的惡性程度相關(guān)。在結(jié)腸癌化療效果與GADD45A關(guān)系的研究中發(fā)現(xiàn)，觀察組腫瘤組織GADD45A陽性表達(dá)率低于對照組，GADD45A與結(jié)直腸癌組織分化程度相關(guān)，化療有效組GADD45A的陽性表達(dá)率高于無效組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.05）；GADD45A表達(dá)與卡培他濱＋奧沙利鉑（XELOX）化療效果存在一定的聯(lián)系，推測可以通過檢測GADD45A的表達(dá)水平預(yù)測XELOX化療的效果[13]。GADD45A與激素受體的表達(dá)相關(guān)，正常乳腺組織中GADD45A表達(dá)較低（16.3%），Luminal A型和B型的表達(dá)較高（65.3%和80.7%），三陰性乳腺癌的表達(dá)介于二者之間（32.0%），說明GADD45A可以作為乳腺癌預(yù)后的判斷指標(biāo)，同時是潛在的治療靶點[14]。

3 GADD45A對腫瘤基因組穩(wěn)定性的影響

中心體的復(fù)制與基因組穩(wěn)定有密切的關(guān)系，GADD45A通過對中心體的調(diào)節(jié)影響基因組的穩(wěn)定[15]。GADD45A缺失可以導(dǎo)致細(xì)胞S期監(jiān)測點功能喪失，而中心體的復(fù)制處于S期，中心體復(fù)制異常，直接導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定。DNA去甲基化與基因的穩(wěn)定性有密切的關(guān)系。有研究表明，GADD45A在10-11易位蛋白1（ten-eleven translocation，TET1）去甲基化中發(fā)揮協(xié)同作用，5-羥甲基胞嘧啶（5-hydroxymethylcytosine，5-hmC）表達(dá)上調(diào)，而5-甲酰胞嘧啶（5-formylcytosine，5-fC）和5-羧基胞嘧啶（5-carboxylcytosine，5-caC）表達(dá)下調(diào)，去甲基化正常進(jìn)行[16]。此外，胸腺嘧啶DNA糖苷酶（thymine DNA glycosylase，TDG）也參與了報道基因（reporter gene）的去甲基化，敲除GADD45A后，TDG的目的基因的甲基化增加，去甲基化減少[17]。在惡性膠質(zhì)瘤中，輕鏈鐵蛋白可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，同時伴隨著GADD45A表達(dá)抑制，如果轉(zhuǎn)染GADD45A，使其高表達(dá)，可以抑制腫瘤細(xì)胞的增殖能力，減弱基因組穩(wěn)定性[15]。

4 GADD45A與腫瘤細(xì)胞周期阻滯及凋亡的關(guān)系

研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)細(xì)胞基因損傷導(dǎo)致GADD45A高表達(dá)時，細(xì)胞周期阻滯于G2/M期，而GADD45A的缺失導(dǎo)致細(xì)胞G2/M期數(shù)值減小，G2/M期阻滯需要以p21和p53依賴的方式進(jìn)行[18]。食品添加劑奧喹多司可以導(dǎo)致肝腫瘤細(xì)胞S期阻滯，使GADD45A、cyclin A、CDK2、p21和p53蛋白表達(dá)上調(diào)。如果下調(diào)GADD45A表達(dá)，奧喹多司可以使S期阻滯更為明顯，細(xì)胞活力下降，DNA損傷增加。這說明GADD45A在奧喹多司導(dǎo)致的細(xì)胞周期阻滯中發(fā)揮重要的作用[19]。呋喃唑酮在肝腫瘤細(xì)胞中亦可發(fā)揮相同的作用[20]。SMAD4主要在細(xì)胞核中表達(dá)，是TGF-β1下游信號因子，可以抑制c-MYC，激活p21和p15，從而抑制細(xì)胞的增殖；而在腫瘤細(xì)胞中，SMAD4表達(dá)常下調(diào)，細(xì)胞逃避細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡，并且與GADD45A表達(dá)下調(diào)相關(guān)。如果GADD45A過表達(dá)，可以通過SCFβ-trcp1抑制SMAD4的泛素化降解，保持其穩(wěn)定性，恢復(fù)細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡[21]。

5 GADD45A導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡

GADD45A通過多種途徑導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。GADD45A可能是通過上調(diào)p21和p53等DNA損傷修復(fù)基因與MTKI／MEKK4相互作用，活化p38和JNK通路，有效地促進(jìn)細(xì)胞凋亡[22]。GADD45A可以引發(fā)細(xì)胞骨架穩(wěn)定性降低，導(dǎo)致BIM從細(xì)胞骨架上解離、釋放，向線粒體轉(zhuǎn)移；在線粒體上積累的BIM蛋白與線粒體膜穩(wěn)定蛋白Bcl-2發(fā)生相互作用，形成BAX寡聚體；BAX寡聚體最終促使線粒體外膜通透性增強(qiáng)，誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡[23]。Su等[24]的研究發(fā)現(xiàn)，抗腫瘤生物活性肽（anticancer bioactive peptide，ACBP）是一種通過人胃癌細(xì)胞免疫山羊獲得并提純的肽類，可以抑制胃癌細(xì)胞的增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，其中GADD45A的表達(dá)明顯上調(diào)；如果下調(diào)GADD45A的mRNA和蛋白表達(dá)，胃癌細(xì)胞對ACBP的敏感性下降，凋亡減少。Chen等[25]的研究發(fā)現(xiàn)，GADD45A在造血干細(xì)胞的分化中發(fā)揮重要的作用。經(jīng)過輻射損傷后，GADD45A缺失的造血干細(xì)胞的DNA修復(fù)更慢，凋亡率更低。累積的DNA損傷最終導(dǎo)致B細(xì)胞白血病的進(jìn)展。有進(jìn)一步的研究表明，在GADD45A野生型細(xì)胞中，修復(fù)DNA損傷和p38絲裂原激活蛋白激酶（mitogen activation protein kinase，MAPK）通路有關(guān)，通過后者可以進(jìn)一步阻止DNA突變細(xì)胞分化[26]。

6 GADD45A在腫瘤中的其他作用

GADD45A與細(xì)胞自噬相關(guān)，通過影響B(tài)ECN1和PIK3C3復(fù)合體的形成，其可以使包括食管鱗癌在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)胞的LC3-Ⅱ和自噬體的表達(dá)下調(diào)。如果下調(diào)GADD45A表達(dá)，腫瘤細(xì)胞的自噬體增多[27]。目前的研究表明，在腫瘤早期，自噬體的減少可以促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展；但是在腫瘤的晚期，尤其是接受放療和化療之后，自噬體的增多促進(jìn)了腫瘤的進(jìn)展[28]。GADD45A可能在腫瘤晚期起到抑制細(xì)胞自噬的作用，所以GADD45A可能成為腫瘤治療的靶點，尤其是針對放療和化療后的耐藥患者。GADD45A與炎性反應(yīng)相關(guān)，Mathew等[29]的研究表明，肺損傷模型小鼠的GADD45A表達(dá)上調(diào)，維持損傷修復(fù)的大部分過程，作用時間可以達(dá)到6周；如果下調(diào)GADD45A表達(dá)，肺泡灌洗液中炎性因子增加，提示GADD45A是肺部炎性反應(yīng)的重要調(diào)節(jié)因子。GADD45A通過阻斷mTOR/STAT3通路抑制腫瘤組織中血管形成。GADD45A缺失后，mTOR和STAT3通路介導(dǎo)VEGFa表達(dá)上調(diào)，可以明顯增加腫瘤內(nèi)部血管的密度，促進(jìn)腫瘤生長[30]。

7 問題與展望

GADD45A作為細(xì)胞生長阻滯和DNA損傷調(diào)節(jié)基因，在細(xì)胞損傷反應(yīng)中通過不同的途徑發(fā)揮作用，維持基因組的穩(wěn)定，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。在當(dāng)前的研究中發(fā)現(xiàn)，不同的腫瘤組織，GADD45A的表達(dá)高低不同，腫瘤組織中的表達(dá)低于正常組織，細(xì)胞的凋亡率減少，細(xì)胞周期阻滯降低，增殖能力增強(qiáng)；GADD45A高表達(dá)的腫瘤組織預(yù)后較好，化療效果也較好，但是理論上，伴有細(xì)胞生長阻滯和DNA損傷調(diào)節(jié)基因突變的腫瘤，對DNA損傷的藥物治療有更好的效果[31]。理論和實驗結(jié)果的差異需要進(jìn)一步探索，是實驗誤差還是其他特殊機(jī)制的作用，有待進(jìn)一步研究。此外，GADD45A不僅對疾病的預(yù)后有重要的意義，還可能成為腫瘤治療的新靶點。

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