孫 娟，王 磊，張小玉，劉詩雅

（山東省棗莊市婦幼保健院，山東 棗莊 277100）

精子DNA損傷對體外受精-胚胎移植助孕結(jié)局的影響分析

孫 娟，王 磊，張小玉，劉詩雅

（山東省棗莊市婦幼保健院，山東 棗莊 277100）

目的 分析精子DNA損傷對體外受精-胚胎移植助孕結(jié)局的影響。方法 選擇2016年2月～2017年2月在我院接受體外受精-胚胎移植助孕的男性患者355例，收集其資料進行回顧性分析，按照精子損傷是否超過25%，分成精子DNA損傷組（觀察組）125例，未損傷組（對照組）230例，分析組間受精、可移植胚胎、優(yōu)質(zhì)胚胎、妊娠及流產(chǎn)情況。結(jié)果 觀察組精子濃度、活力、正常形態(tài)精子率、受精率、可移植胚胎率、優(yōu)質(zhì)胚胎率等檢測指標均低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；觀察組妊娠率低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而流產(chǎn)率則高于對照組差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結(jié)論 精子DNA損傷能夠?qū)w外受精-胚胎移植助孕結(jié)局造成一定負面影響，因此加強精子DNA損傷的檢測，有助于預測體外受精-胚胎移植助孕結(jié)局。

精子DNA損傷；體外受精-胚胎移植；助孕結(jié)局

近年來，隨著生活壓力的增大，環(huán)境的污染及高齡夫婦越來越多，導致不孕不育的夫婦越來越多。因此，越來越多的夫婦采取體外受精-胚胎移植技術(shù)助孕。據(jù)文獻報道，其中因男性因素引起的不孕不育癥約占20%，另外大約30%與夫妻雙方有關(guān)，因此和男性因素相關(guān)的不育癥比例達到了50%，臨床上對于男性不育也越來越重視。而傳統(tǒng)的精液常規(guī)檢查不能對精子的受精能力及男性的生育能力進行準確的評價。精子DNA損傷作為一項新的評價受精能力和生育能力的指標，從基因?qū)W的角度為男性不育癥的研究做出了創(chuàng)新[1]。理想的精液質(zhì)量評估不僅要達到預測是否能自然受孕，而且還能指導選擇何種輔助生殖技術(shù)（ assisted reproductive technology，ART），并評估生殖結(jié)局[2-3]。目前臨床上通過檢測DNA斷裂指數(shù)（DNA fracture index，DFI）評價精子DNA損傷程度。本次研究選擇2016年2月-2017年2月在我院接受體外受精-胚胎移植助孕的男性患者355例作為研究對象，按照精子損傷是否超過25%，分成精子DNA損傷組（觀察組），未損傷組（對照組），分析關(guān)于精子常規(guī)參數(shù)等指標及體外受精-胚胎移植助孕結(jié)局等方面數(shù)據(jù)組間差異，以期用于指導臨床。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究選擇2016年2月～2017年2月在我院接受體外受精-胚胎移植助孕的男性患者355例作為研究對象，按照DFI是否超過25%，分成精子DNA損傷組（觀察組）125例，未損傷組（對照組）230例。觀察組125例，年齡22～38歲，年齡平均（30.59±6.84）歲；女方125例，年齡23～34歲，年齡平均（30.83±2.02）歲。對照組230例，年齡22-39歲，年齡平均（31.02±7.38）歲；女方230例，年齡25～34歲，年齡平均（30.54±2.93）歲。納入標準：（1）促排卵方案為達必佳短效長方案；（2）授精方式為IVF授精；（3）新鮮周期均移植；（4）夫婦雙方染色體核型正常。為排除女方的卵子質(zhì)量對實驗結(jié)果造成影響，本次研究女方的納入標準為：（1）年齡＜35歲，BMI：18～25 kg/m2；（2）單純輸卵管因素行輔助生殖技術(shù)；（3）雙側(cè)卵巢竇卵泡數(shù)＞7枚。排除標準：（1）多囊卵巢綜合征；（2）子宮內(nèi)膜異位癥；（3）子宮畸形及宮腔粘連；（4）一側(cè)或雙側(cè)輸卵管積水。男方的納入標準為：（1）年齡＜40歲；（2）精液常規(guī)檢查提示正常。排除標準：外生殖器及輸精管異常者。此外，夫婦雙方均無全身系統(tǒng)及傳染性疾病及未接觸有毒化學物質(zhì)和放射線。

1.2 方法

1.2.1 DFI檢測方法（SCD法）

PBS調(diào)整精子濃度至500～1000萬/mL，將30 μL低熔點瓊脂糖管加入30 μL精液樣本，于37℃水浴中備用；將瓊脂糖精液20 μL加到預處理載玻片上，放入4℃冰箱中5 min；然后于變性液中反應(yīng)7 min；取出后于裂解液中反應(yīng)20 min；取出后置于蒸餾水中5 min后，于70%，90%、100%的乙醇溶液中保持2 min后取出晾干；蒸餾水沖洗玻片晾干；最后在光學顯微鏡下觀察200個精子的涂片形態(tài)。DFI=（小光暈精子數(shù)+無光暈精子數(shù)+退化精子數(shù)）/200×100%。

1.2.2 IVF-ET術(shù)助孕方法

所有患者均采用達必佳短效長方案促排卵，均于排卵一周后每天皮下注射短效醋酸曲普瑞林注射液（Ferring GmbH公司）0.1mg，7天后改為每天0.05mg，直至HCG日降調(diào)節(jié)，降調(diào)節(jié)14天后根據(jù)卵泡數(shù)目及激素水平給予重組促卵泡素β注射液（ N.V.Organon公司）和尿促性腺激素（HMG，麗珠集團） 至HCG日。注射HCG后34-36小時行全麻下取卵術(shù)，術(shù)后第3天移植2枚胚胎，移植后給予黃體支持（黃體酮軟膠囊200mg pv tid聯(lián)合地屈孕酮20mg po qd）。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計數(shù)資料以百分數(shù)（%），例（n）表示，采用x2檢驗；計量資料以“±s”表示，采用t檢驗；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 基本資料分析

兩組患者女方年齡、基礎(chǔ)FSH、雙側(cè)卵巢竇卵泡數(shù)、獲卵數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。

兩組患者男方年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；觀察組精子濃度、活力、正常行態(tài)精子率均低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

觀察組患者受精率、可移植胚胎率，優(yōu)胚率低于對照組患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表3。

觀察組患者妊娠率低于對照組患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；流產(chǎn)率高于對照組患者，有統(tǒng)計學差異，見表4。

表1 兩組患者女方年齡、基礎(chǔ)FSH、雙側(cè)卵巢竇卵泡數(shù)、獲卵數(shù)（s）

表1 兩組患者女方年齡、基礎(chǔ)FSH、雙側(cè)卵巢竇卵泡數(shù)、獲卵數(shù)（s）

項目 觀察組（n=125） 對照組（n=230） P女方年齡 30.83±2.02 30.54±2.93 ＞0.05基礎(chǔ)FSH 6.12±1.21 6.03±1.54 ＞0.05雙側(cè)卵巢竇卵泡數(shù) 12.03±3.65 13.12±4.91 ＞0.05獲卵數(shù) 9.13±2.93 8.96±3.29 ＞0.05

表2 男方年齡，精子濃度、活力、正常行態(tài)精子率（x±s）

表3 兩組患者受精率、可移植胚胎率，優(yōu)胚率比較±s）

表3 兩組患者受精率、可移植胚胎率，優(yōu)胚率比較±s）

組別 受精率（%） 可移植胚胎率（%） 優(yōu)胚率（%）觀察組 77.2±32.3 55.67±32.22 32.67±23.22對照組 82.4±32.1 64.63±31.54 38.67±21.34 P 0.03 0.002 0.001

表4 兩組圍產(chǎn)兒存活及流產(chǎn)情況比較

3 討 論

精液分析包括精子活性、精子濃度以及精子外在形態(tài)等方面的檢測，能夠大約評價受檢男性的生殖能力，但檢測并不全面[4]，因此近幾年來，精液分析技術(shù)一直在不斷發(fā)展。尤其是二胎政策的來臨，對生殖醫(yī)學要求的檢測水平及診療服務(wù)逐漸提高，對精子DNA損傷及完整性的重視度日益提升。精子DNA損傷及完整性與男性生殖能力、女性受孕情況以及輔助生殖技術(shù)的助孕結(jié)局有關(guān)，現(xiàn)已成為相關(guān)領(lǐng)域的研究重點課題，比如SCD實驗是目前檢查精子DNA損傷的典型方法，對于精子DNA的檢查效果較好[5]。

由于胚胎質(zhì)量與男女雙方均有關(guān)系，本次研究對象中男女患者均納入，為突出研究DNA損傷對胚胎質(zhì)量的影響，本研究對女性入選標準嚴格。本次研究中，觀察組精子濃度、活力、正常形態(tài)精子率、可移植胚胎率、優(yōu)質(zhì)胚胎率等檢測指標均低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；且觀察組妊娠率低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；而觀察組流產(chǎn)率高于對照組。造成這種情況的可能性原因是精子DNA受到損傷后，其基因編碼改變，導致ATP無法正常釋放能量，進而造成精子活性降低，而且觀察組精子濃度、正常形體精子率均降低，提示可將精子DNA損傷作為檢測男性生殖能力的指標之一；觀察組受精率低于對照組的可能性原因在于精子DNA受損后導致其染色質(zhì)原核形成受到阻礙，或難以穿越透明帶，無法與卵子結(jié)合，或自我修復能力比較受限[6]。但精子DNA損傷與妊娠率、流產(chǎn)等情況的關(guān)系存在較大爭議，需進一步研究。

綜上所述，降低精子DNA損傷有可能提高IVF-ET術(shù)助孕成功率。因此，如何降低精子DNA損傷勢在必行。生殖道炎癥、睪丸部高溫、精索靜脈曲張、吸煙、環(huán)境因素、藥物與放療、化療均可引起精子DNA損傷。因此，對于精子DNA損傷的治療可通過查找病因?qū)ΠY治療，同時輔助抗氧化藥物[7]。此外，對于精子DNA損傷高的患者行ICSI-ET術(shù)是否有助于助孕結(jié)局尚需探討。

[1] 江瑤瑤,曾向陽,孫建明.精子DNA損傷在男性不育癥中的研究進展[J].現(xiàn)代泌尿外科雜志,2014,19(6):419-422.

[2] Garrido N,Remohí J,Martínez-Conejero JA,et al．Contribution of sperm molecular features to embryo quality and assisted reproduction success[J].Reprod Biomed Online,2008,17(6):855-865.

[3] 李志凌,劉容菊.精子DNA完整性及對輔助生殖技術(shù)治療結(jié)局的影響生殖與避孕[J].2006,26(6):433－437.

[4] 孫波瀾,鄒紅艷,彭南妮.精子DNA損傷對試管嬰兒助孕結(jié)局的影響探討[J].黑龍江醫(yī)學,2014,38(6):630-631.

[5] 黃劍磊,賀 曉,吳 靜,等.男性不育癥患者精子畸形率及DNA完整性對輔助生殖技術(shù)助孕結(jié)局的影響[J].中國臨床醫(yī)生雜志,2016,44(12):86-89.

Effects of sperm DNA fragmentation on outcome of IVF-ET

SUN Juan, WANG Lei, ZHANG Xiao-yu, LIU Shi-ya
(Zaozhuang maternal and child health care hospital,Shandong Zaozhuang 277100,China)

Objective To investigate the effect of sperm DNA fragmentation index on the pregnancy outcome after in vitro fertilization (IVF) procedure.Methods We selected 355 male patients who underwent conventional IVF-ET in our hospital between 2016.2 and 2017.2.A retrospective analysis was performed with collected data. Patients were divided into sperm DNA damage group (observation group) 125 cases, non-damage group (control group) 230 cases according to the sperm DNA fragmentation index was/wasnot more than25%.Fertilization rate, the number of transferable embryos,high-quality embryo rate,pregnancy rate and abortion rate were recorded for statistics analysis.Results The observation group in sperm concentration, motility, normal sperm morphology rate, fertilization rate, detection index of embryo transfer rate and good quality embryos rate were lower than the control group, the difference was statistically significant (P＜0.05); pregnancy rate in observation group than in the control group, the difference was statistically significant (P＜0.05), while the abortion rate is higher the control group was statistically significant (P＜0.05).Conclusion Sperm DNA damage may have some negative effects on the outcome of IVF, thus the detection of sperm DNA fragmentation index is conducive to predicting the outcome of IVF.

Sperm DNA fragmentation;in vitro fertilization-embryo transfer;pregnancy outcome

R321

B

ISSN.2095-6681.2017.32.188.03

李 豆