崔曉霞, 尚世臣, 馬蘭芝, 黃 斌, 尚玉璞, 王冬平, 陳振文, 王全新

(1.軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院實驗動物中心, 北京 100071;2. 首都醫(yī)科大學(xué)實驗動物科學(xué)部，北京 100069;3. 遼寧長生生物技術(shù)有限公司， 本溪 117004）

白化金黃倉鼠血液生理指標(biāo)測定

崔曉霞1, 尚世臣1, 馬蘭芝1, 黃 斌1, 尚玉璞1, 王冬平1, 陳振文2, 王全新3

(1.軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院實驗動物中心, 北京 100071;2. 首都醫(yī)科大學(xué)實驗動物科學(xué)部，北京 100069;3. 遼寧長生生物技術(shù)有限公司， 本溪 117004）

目的測定白化金黃倉鼠的血液生理指標(biāo)，并與野生型金黃倉鼠進行比較。方法用眶靜脈叢采血的方法采集白化及野生型金黃倉鼠全血，制備抗凝血，應(yīng)用全自動血細胞分析儀及半自動血液凝固分析儀進行測定，應(yīng)用SPSS17.0軟件包對結(jié)果進行統(tǒng)計分析。結(jié)果初步測定了白化突變及野生型金黃倉鼠的血液生理指標(biāo)，二者的部分指標(biāo)存在差異。結(jié)論金黃倉鼠的白化基因突變可能對血液生理指標(biāo)有一定影響。

白化突變; 金黃倉鼠; 血液生理指標(biāo)

金黃倉鼠作為實驗動物使用范圍廣泛，根據(jù)其生理特點，多用于腫瘤、生殖生理、組織移植、神經(jīng)、血管生理學(xué)及微循環(huán)等方面的研究[1-3],同時是乙型腦炎減毒活疫苗的研制和狂犬病毒及乙型腦炎病毒的研究及其疫苗生產(chǎn)的主要生物材料，使用數(shù)量很大[4,5]。

白化金黃倉鼠是由金黃倉鼠白化突變個體培育而成，1964年武漢生物制品研究所飼養(yǎng)的金黃倉鼠群中首次發(fā)現(xiàn)了白色變種[5]。遼寧長生生物技術(shù)有限公司目前已繁殖保種一定規(guī)模的種群，但該白化突變金黃倉鼠的生物學(xué)特性、白化機制及應(yīng)用的研究剛剛起步。血液生理指標(biāo)是實驗動物的重要生物學(xué)特性之一，是應(yīng)用實驗動物進行科學(xué)研究的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。本文針對白化突變金黃倉鼠突變?nèi)旱陌准毎麛?shù)、紅細胞數(shù)、血紅蛋白濃度、紅細胞壓積等22項血細胞和4項凝血因子的生理指標(biāo)進行測定，比較其與野生型金黃倉鼠在血液生理指標(biāo)的差異，開發(fā)出自主知識產(chǎn)權(quán)的白化突變新品種，進而為醫(yī)學(xué)生物學(xué)及藥物研發(fā)提供新的動物模型奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

清潔級8周齡金黃倉鼠60只，雌雄各30只; 清潔級8周齡白化金黃倉鼠60只，雌雄各30只，均由遼寧長生生物技術(shù)有限公司提供[SCXK(遼)2010-0001]。

1.2 儀器設(shè)備及主要試劑

血細胞計數(shù)使用日本光電MEK-7222K 全自動血細胞分析儀(應(yīng)用本儀器調(diào)試的動物參數(shù))及配套試劑，凝血四項指標(biāo)測定使用山西亞森實業(yè)有限公司FB-40型半自動血液凝固分析儀。

1.3 抗凝血制備

禁食12～24 h，乙醚麻醉后，眼眶靜脈叢采血，EDTA-2K抗凝血用于測定血液生理指標(biāo)，枸櫞酸鈉抗凝血用于凝血4項指標(biāo)測定。

1.4 血液生理指標(biāo)測定及方法

血細胞: 白細胞數(shù)(WBC)、紅細胞數(shù)(RBC)、血紅蛋白濃度(HGB)、紅細胞壓積(HCT)、平均紅細胞體積(MCV)、紅細胞分布寬度(RDW)、血小板數(shù)(PLT)、血小板壓積(PCT)、平均血小板體積(MPV)、血小板分布寬度(PDW)。白細胞分類計數(shù)及百分比:淋巴細胞(LYM)、單核細胞(MON)、嗜中性粒細胞(NEUT)、嗜酸性粒細胞(EOS)、嗜堿性粒細胞(BAS)。

凝血4項: 凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)、纖維蛋白原(FIB)。

1.5 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用Spss17.0統(tǒng)計分析軟件，進行t檢驗和方差數(shù)據(jù)處理。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血細胞

白化金黃倉鼠與金黃倉鼠的血細胞測定結(jié)果顯示, 雄性間LYM差異顯著(P＜0.05), WBC、MCV、MON、NEUT、EOS、BAS、MON%、EOS%、BAS%差異極顯著(P＜0.01)，其余無顯著性差異(P＞0.05); 雌性間EOS%、BAS%差異顯著(P＜0.05),LYM、EOS差異極顯著(P＜0.01), 其余無顯著性差異(P＞0.05)(表 1)。

金黃倉鼠雌性和雄性間WBC、MON、NEUT、MON%、BAS%差異極顯著(P＜0.01), 其余均無顯著性差異(P＞0.05)(表1)。白化金黃倉鼠雄性和雌性間LYM差異極顯著(P＜0.01), 其余均無顯著性差異(P＞0.05)(表 1)。

2.2 凝血指標(biāo)

白化金黃倉鼠與金黃倉鼠的凝血指標(biāo)測定結(jié)果顯示，雄性間APTT差異顯著(P＜0.05)，PT差異極顯著(P＜0.01)，其余均無顯著性差異(P＞0.05); 雌性間TT和FIB差異顯著(P＜0.05)，其余均無顯著性差異(P＞0.05)(表 2)。

金黃倉鼠雄性和雌性間FIB差異極顯著(P＜0.01),其余均無顯著性差異(P＞0.05)(表2)。白化金黃倉鼠雄性和雌性間PT差異極顯著(P＜0.01), APTT差異顯著(P＜0.05), 其余均無顯著性差異(P＞0.05)(表 2)。

3 討論

實驗動物血液生理參數(shù)主要是動物自身的遺傳因素與環(huán)境因素決定。遺傳因素是內(nèi)在物質(zhì)基礎(chǔ)，而環(huán)境因素則是外在條件[6]。不同品種(系)的動物血液正常生理值存在較大差異，每個品種(系)的血液指標(biāo)都有其相對穩(wěn)定值，這也是區(qū)別各品種(系)的一個重要指標(biāo)[7]。血液生理生化指標(biāo)在醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究中是重要的指標(biāo)，是判斷動物健康狀態(tài)和選擇合格動物的依據(jù)，也是病理學(xué)、毒理學(xué)等研究的重要參考依據(jù)[8]。

凝血過程是一系列血漿凝血因子相繼酶解激活的過程，一般分為內(nèi)源性凝血途徑，外源性凝血途徑和凝血共同途徑。目前，臨床主要用凝血4項(PT、APTT、TT、FIB)測定來反映體內(nèi)凝血系統(tǒng)的狀況。其中PT是外源性凝血系統(tǒng)較為敏感和常用的篩選試驗，反映血漿中凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅷ、Ⅹ和Ⅰ的總體活性; APTT是內(nèi)源性凝血系統(tǒng)較為敏感和常用的篩選試驗，能反映血漿凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ的水平; TT測定主要反映凝血共同途徑纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白的過程中，是否存在纖維蛋白原異常及是否發(fā)生纖溶和是否存在抗凝物質(zhì)的情況。FIB主要由肝臟合成，是凝血酶作用的底物，在凝血酶水解下形成肽A和肽B，最后形成不溶性的纖維蛋白以達到止血作用。血液離體即開始變化，隨存放方式和時間的不同，凝血因子逐漸消耗而導(dǎo)致檢驗結(jié)果不同，實驗室外在因素對實驗準(zhǔn)確性十分重要，不適當(dāng)?shù)臉?biāo)本采集如抽血量多或少、標(biāo)本溶血、標(biāo)本凝固和送檢時間往往是導(dǎo)致結(jié)果誤差的主要因素[9-14]。本研究表明金黃倉鼠雌雄間FIB差異極顯著; 白化倉鼠的雌雄間PT差異極顯著，APTT差異顯著; 金黃倉鼠與白化倉鼠雄性間PT差異極顯著，APTT差異顯著，雌性間TT和FIB結(jié)果差異顯著。

目前，對于金黃倉鼠和白化倉鼠的研究報道很少，本研究對8周齡成年金黃倉鼠及白化倉鼠正常血液生理值進行檢測, 結(jié)果表明: 大多數(shù)所檢測指標(biāo)均在正常值范圍內(nèi),與灰倉鼠、黑線倉鼠及大、小鼠等無明顯差異[15-19]，同種動物雌雄個體間在少數(shù)幾個指標(biāo)存在一定差異，如W BC、M O N、NEUT、FIB等，這可能與性別有關(guān)。而金黃倉鼠與其白化倉鼠雄性之間LYM差異顯著，WBC、MCV、MON、NEUT、EOS、BAS、MON%、EOS%、NEUT%差異極顯著; 雌性間EOS%、NETU%差異顯著，LYM、EOS差異極顯著，這或許與白化倉鼠的突變基因有一定關(guān)系。

本研究為白化突變倉鼠積累生物學(xué)特性數(shù)據(jù)，為進一步研究突變機理奠定基礎(chǔ)，對該動物的實驗應(yīng)用及飼養(yǎng)管理等方面都具有重要意義，從而為其在醫(yī)學(xué)生物學(xué)中的廣泛應(yīng)用提供依據(jù)。

表 1 兩種倉鼠血細胞生理指標(biāo)雌雄比較Table 1 Comparison of Blood physiological index between male and female

表 2 兩種倉鼠凝血4項指標(biāo)比較Table 2 Comparison of four items of blood coagulation between male and female

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Q95-33

A

1674-5817(2017)06-0478-04

10.3969/j.issn.1674-5817.2017.06.011

2017-07-18

國家自然科學(xué)基金項目(No. 3137227)

崔曉霞(1977-), 女, 碩士, 研究方向: 實驗動物遺傳與病理。E-mail: cuixiaoxia@tom.com

王冬平(1964-), 女, 副研究員, 研究方向: 實驗動物生物學(xué)特性研究。E-mail: wangdp6493@126.com陳振文(1959-), 男, 教授, 研究方向: 實驗動物遺傳學(xué)。E-mail: czwen@ccmu.edu.cn