王佳娜 沈建軍 張艷紅 王佳天 李文秀 潘軍英

Ki-67及PTEN在口腔腺樣囊性癌中的表達(dá)及臨床意義

王佳娜1沈建軍1張艷紅1王佳天1李文秀1潘軍英2

目的研究口腔腺樣囊性癌(OACC)中Ki-67和PTEN的表達(dá)情況，及其表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系。方法收集佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理實(shí)驗(yàn)室證實(shí)的40例口腔腺樣囊性癌。另選口腔腺樣囊性癌患者標(biāo)本癌旁正常腺體15例做對(duì)照組。免疫組化SP法檢測(cè)腺樣囊性癌中Ki-67蛋白及PTEN的表達(dá)。結(jié)果Ki-67蛋白在口腔腺樣囊性癌中的陽(yáng)性率為70%(28/40)，明顯高于對(duì)照組13%(2/15)(P<0.05)。PTEN蛋白在口腔腺樣囊性癌中的陽(yáng)性率為63%(25/40)，明顯高于對(duì)照組20%(3/15)(P<0.05)。Ki-67、PTEN的表達(dá)與TNM分期、腫瘤組織學(xué)類型、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和神經(jīng)節(jié)浸潤(rùn)均顯著相關(guān)，并且Ki-67和PTEN表達(dá)存在相關(guān)性。結(jié)論Ki-67和PTEN在口腔腺樣囊性癌發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中可能起重要作用。Ki-67和PTEN蛋白可能作為口腔腺樣囊性癌的診斷標(biāo)志物。

口腔腺樣囊性癌；Ki-67；PTEN；免疫組織化學(xué)

口腔腺樣囊性癌是口腔頜面部惡性腫瘤中比較常見(jiàn)的腫瘤之一，惡性常多發(fā)于女性，以腭部的小涎腺最多見(jiàn)，其次是腮腺[1]。該腫瘤生長(zhǎng)緩慢，但具有一定的侵襲能力，早期即可向周圍組織侵襲；局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移不常發(fā)生，主要通過(guò)血源性途徑向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。對(duì)于該病的治療，目前國(guó)內(nèi)外臨床上仍采用以手術(shù)為主的綜合治療，由于常發(fā)生局部復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移導(dǎo)致該病的術(shù)后遠(yuǎn)期生存率較低，有報(bào)道稱10年的生存率為43%[2-4]。因此探討其浸潤(rùn)性及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力具有一定臨床意義。目前關(guān)于Ki-67和PTEN在口腔腺樣囊性癌中的表達(dá)，在國(guó)內(nèi)外的研究中較少。因此本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Ki-67和PTEN在口腔腺樣癌中的表達(dá)，以探討兩種蛋白與腫瘤的浸潤(rùn)性及遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移能力之間的關(guān)系，從而為口腔腺樣囊性癌的臨床治療和預(yù)后作出判斷提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

選取佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理實(shí)驗(yàn)室2010年1月—2016年6月病史保存完整且病理診斷為口腔腺樣囊性癌進(jìn)行根治性手術(shù)石蠟標(biāo)本40例，其中男性10例，女性30例，年齡30～80歲，中位年齡55歲。腫瘤發(fā)生部位包括舌下腺、口底、頜下腺、腮腺、腭部(硬腭)、口頰部。病理診斷參照世界衛(wèi)生組織(2011)涎腺癌的TNM分類分期分為侵襲組20例和非侵襲組20例。對(duì)照組選取癌旁正常腺體15例。病理診斷由3名專業(yè)病理科醫(yī)師診斷核實(shí)，并且符合組織學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)和病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 試劑

Ki-67及PTEN均為單克隆抗體(Ki-67鼠抗人單克隆抗體ZM-0166；PTEN鼠抗人單克隆抗體ZM-0221)，工作濃度均為1∶100，SABC免疫試劑盒和DAB顯色試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 檢測(cè)方法

采用免疫組織化學(xué)SABC法(按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行)，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，陰性對(duì)照PBS緩沖液分別代替一抗，其余步驟同實(shí)驗(yàn)組。顯微鏡下觀察結(jié)果：陽(yáng)性為蛋白以細(xì)胞核或者細(xì)胞漿出現(xiàn)顯色。由兩位高資歷的病理醫(yī)生采用雙盲法對(duì)免疫組化結(jié)果進(jìn)行評(píng)估。觀察至少5個(gè)具有代表性的高倍視野，根據(jù)細(xì)胞陽(yáng)性染色范圍計(jì)數(shù)腫瘤細(xì)胞中的陽(yáng)性個(gè)數(shù)百分比來(lái)判斷：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<15%記為(-)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在16%～30%記為(+)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在31%～50%記為(++)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>51%記為(+++)，(+)～(+++)均記為陽(yáng)性。圖片拍照。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)(%)表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Ki-67和PTEN的表達(dá)情況

Ki-67和PTEN在口腔腺樣囊性癌中的表達(dá)如圖1～2所示，Ki-67和PTEN在癌旁正常組織中的陽(yáng)性表達(dá)如圖3～4所示，Ki-67和PTEN在淋巴結(jié)組織中的陽(yáng)性表達(dá)如圖5～6所示。Ki-67和PTEN主要分布于細(xì)胞核和細(xì)胞漿中，陽(yáng)性表達(dá)率分別為70%和63%，在正常組織中陽(yáng)性表達(dá)率為13%和20%，兩組陽(yáng)性表達(dá)率間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

圖1 Ki-67在口腔腺樣囊性癌中的表達(dá)(400×)Figure 1 Expression of Ki-67 in oral adenoid cystic carcinoma(400×)

圖2 PTEN在口腔腺樣囊性癌中的表達(dá)(400×)Figure 2 Expression of PTEN in oral adenoid cystic carcinoma(400×)

圖3 Ki-67在癌旁組織中的陽(yáng)性表達(dá)(200×)Figure 3 The positive expression of Ki-67 in paracancerous tissues(200×)

圖4 PTEN在癌旁組織中的陽(yáng)性表達(dá)(200×)Figure 4 The positive expression of PTEN in paracancerous tissues(200×)

圖5 Ki-67在淋巴結(jié)組織中的陽(yáng)性表達(dá)(200×)Figure 5 The positive expression of Ki-67 in lymph node tissue(200×)

圖6 PTEN在淋巴結(jié)組織中的陽(yáng)性表達(dá)(200×)Figure 6 The positive expression of PTEN in lymph node tissue(200×)

表1 Ki-67和PTEN在口腔正常組織和口腔腺癌組織中的表達(dá)(n，%)Table 1 The expression of Ki-67 and PTEN in normal tissues and OACC(n，%)

2.2 Ki-67及PTEN表達(dá)與OACC臨床病理特征的關(guān)系

Ki-67及PTEN的表達(dá)與口腔腺樣囊性癌的TNM分期、組織學(xué)類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、神經(jīng)侵犯有關(guān)(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤位置無(wú)關(guān)(P>0.05)(表2)。

2.3 Ki-67與PTEN在口腔腺樣囊性癌中表達(dá)的關(guān)系

口腔腺樣囊性癌中Ki-67與PTEN的表達(dá)存在相關(guān)性(φ=0.394，P<0.05)(表3)。

表3Ki-67及PTEN的相關(guān)性檢驗(yàn)
Table3The correlation of Ki-67 with PTEN expression

Ki-67PTEN+-Totalχ2P+217284．5710．033-4812Total251540

表2 Ki-67及PTEN表達(dá)與口腔腺樣囊性癌臨床病理特征的關(guān)系Table 2 The relationship between the expression levels of Ki-67 and PTEN in OACC and clinicopathological features

3 討論

口腔腺樣囊性癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤，早期即可向周圍組織侵襲并通過(guò)血源性途徑向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。但其侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制不清[1-4]。Ki-67蛋白是增殖細(xì)胞標(biāo)記物，在細(xì)胞周期的所有活躍階段均表達(dá)。Ki-67的陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的分?jǐn)?shù)(Ki-67標(biāo)記指數(shù))與癌癥的進(jìn)展有關(guān)[5-6]。PTEN是一種近年來(lái)新識(shí)別的基因，可以抑制多種基因的活性，對(duì)腫瘤的轉(zhuǎn)移、侵襲抑制基因的作用尤為明顯，體現(xiàn)在PTEN可以有效促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移[7-8]。

在本研究中Ki-67和PTEN在口腔腺樣囊性癌中的表達(dá)明顯高于正常腺體組織，與腫瘤的分期、轉(zhuǎn)移和神經(jīng)侵犯密切相關(guān)(P<0.05)。并且口腔腺樣囊性癌組織各分期間表達(dá)強(qiáng)度隨著分期越高，表達(dá)率越高；轉(zhuǎn)移侵襲越遠(yuǎn)，表達(dá)越活躍。Ki-67、PTEN二者在口腔腺樣囊性癌中的表達(dá)呈顯著的相關(guān)性。這與近年來(lái)在胃癌、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌等進(jìn)行的研究結(jié)果相似[9-10]。

Ki-67的活化和表達(dá)與許多癌前病變和惡性疾病有關(guān)，可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、增殖、黏附、侵襲、轉(zhuǎn)移和血管生成，甚至抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡。PTEN在調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、轉(zhuǎn)移等各方面均具有重要作用。(1)通過(guò)對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的影響來(lái)阻滯細(xì)胞生長(zhǎng)的周期；(2)PTEN能夠增加細(xì)胞的凋亡率；(3)抑制細(xì)胞的聚集、分化、轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散；(4)減少腫瘤血管的生成。這些結(jié)果說(shuō)明口腔腺樣囊性癌中Ki-67、PTEN對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展可能起到協(xié)同作用。由于本實(shí)驗(yàn)的病例數(shù)有限，實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)及研究時(shí)間限制，不能進(jìn)一步探討整個(gè)通路在口腔腺樣囊性癌發(fā)生發(fā)展中起到的作用，檢測(cè)的結(jié)果可能存在一些不足，希望更多的學(xué)者搜集更多的病例進(jìn)一步研究相關(guān)的問(wèn)題。

綜上所述，Ki-67和PTEN可能在口腔腺樣囊性癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，可能是口腔腺樣囊性癌的標(biāo)志物。在臨床工作中檢測(cè)Ki-67和PTEN這兩種蛋白可能對(duì)評(píng)估口腔腺樣囊性癌的惡性程度、預(yù)后具有重要意義。

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ExpressionofKi-67andPTENinoraladenoidcysticcarcinomaanditsclinicalsignificance

WANGJiana1，SHENJianjun1，ZHANGYanhong1，WANGJiatian1，LIWenxiu1，PANJunying2

1.Heilongjiang University of TCM，Jiamusi 154007，China；2.The First Affiliated Hospital，Heilongjiang University of Chinese Medicine

ObjectiveThe aims of this study were to determine the expression of Ki-67 and PTEN in oral adenoid cystic carcinoma(OACC)and its relationship with clinicopathological features，and to explore the relationship between the expression of Ki-67 and PTEN.MethodsForty cases of oral adenoid cystic carcinoma were collected from the pathological laboratory in our hospital.Another 15 cases of normal gland in patients with oral adenoid cystic carcinoma were selected as the control group.The expression of Ki-67 protein and PTEN in adenoid cystic carcinoma was detected by immunohistochemistry.ResultsThe positive rate of Ki-67 protein in oral adenoid cystic carcinoma was 70%(28/40)，which was significantly higher than that in the control group(2/15)(P<0.05).The positive rate of PTEN in oral adenoid cystic carcinoma was 63%(25/40)，which was significantly higher than that in the control group 20%(3/15)(P<0.05).They were associated with histological types，metastasis，lymph node metastasis and neural invasion，and not correlated with age，gender and tumor location.The expression of Ki-67 and PTEN in oral adenoid cystic carcinoma may have a significant correlation.ConclusionThe expression of Ki-67 and PTEN in adenoid cystic carcinoma is high，and their occurrence and development in adenoid cystic carcinoma play an important role in the process of evolution and metastasis.Ki-67 and PTEN proteins may be markers of oral adenoid cystic carcinoma.

Adenoid cystic carcinoma of the oral cavity；Ki-67；PTEN；Immunohistochemistry

黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)科研基金面上項(xiàng)目(201722)

1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)(佳木斯 154007)；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院

王佳娜，女，(1973-)，本科，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，從事中醫(yī)藥抗腫瘤的研究。

潘軍英，E-mail：pjy19810621@163.com

R739.87

A

10.11904/j.issn.1002-3070.2017.06.002

(收稿：2017-01-14)