馬喆　鮑俊翠　王慧軍　肖愛民　李小蘭　李環(huán)

[摘 要] 目的：檢測miR-222基因、雌激素受體α（ERα）、膠原蛋白在陰道前壁膨出（AVP）患者陰道壁中的表達，分析其臨床價值。方法：2014年6月至2016年3月，選取40例AVP患者（AVP組）和同期40例接受其他婦科手術的良性病變患者（對照組）。按照月經(jīng)狀態(tài)，再分為絕經(jīng)前亞組、絕經(jīng)后亞組，檢測各組患者陰道壁miR-222基因、ERα及膠原蛋白表達情況，計算各指標間相關性并分析其臨床意義。結果：AVP組絕經(jīng)前、絕經(jīng)后亞組陰道壁miR222高于對照組相應亞組，其ERα及Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白表達水平均低于對照組相應亞組，兩組內(nèi)比較絕經(jīng)后亞組miR-222表達水平高于絕經(jīng)前亞組，其ERα表達水平低于絕經(jīng)前亞組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。Pearson相關性分析可見miR-222與ERα表達水平呈負相關，Ⅰ型膠原蛋白與Ⅲ型膠原蛋白表達水平呈正相關（P<0.05）。結論：miR-222表達增加所致ERα含量下降以及Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白表達水平的減少，是引發(fā)AVP的重要機制，注重絕經(jīng)前后上述指標變化的監(jiān)測有望為AVP的診斷及靶向治療提供一定參考。

[關鍵詞] miR-222基因；雌激素受體α；膠原蛋白；陰道前壁膨出

中圖分類號：R711 文獻標識碼：A 文章編號：2095-5200（2017）05-078-03

DOI：10.11876/mimt201705032

陰道前壁膨出（AVP）是最常見的盆腔器官脫垂（POP）類型，盆底支持組織結構與功能完整性的破壞對患者生活質(zhì)量造成嚴重影響[1]。目前，臨床對AVP的發(fā)病機制尚無明確闡釋，多數(shù)研究認為，年齡、妊娠及分娩、肥胖、遺傳等與AVP相關[2]，絕經(jīng)后女性AVP呈上升趨勢，可能與雌激素水平變化有關[3]。此外，有學者認為，POP的發(fā)生與結締組織變化亦具有密切關聯(lián)，如膠原蛋白代謝異常者有著更高的POP發(fā)生率，且治療后復發(fā)率較高[4]。此次研究檢測miR-222基因、雌激素受體α（ERα）及膠原蛋白在AVP患者陰道壁中的表達，旨在進一步了解AVP發(fā)生機制。

1 資料與方法

1.1 對象與分組

征得醫(yī)學倫理委員會批準，2014年6月至2016年3月期間40例于我院接受手術的AVP患者納入AVP組；同期40例因為其他良性婦科疾病需行手術患者納入對照組。兩組均排除合并惡性腫瘤、子宮內(nèi)膜異位癥、婦科急性炎癥者以及既往有盆底手術史或術前3個月內(nèi)有雌激素藥物使用史者?；颊呔橥獠⒑炇鹬橥鈺侔凑栈颊咴陆?jīng)狀態(tài)分為絕經(jīng)前亞組、絕經(jīng)后亞組。

1.2 檢測方法

術中取患者陰道前壁組織，以10%甲醛溶液固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋，5 μm連續(xù)切片，使用逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）法，檢測miR-222基因相對表達水平 [5]；使用免疫組化法，檢測ERα[6]，一抗為兔抗人多克隆ERα抗體（美國Santa Cruz公司），二抗為辣根過氧化酶標記的山羊抗兔多克隆抗體（英國Abcam公司）；采用免疫組化S-P法，通過平均陽性染色面積百分比對I 型、III型膠原蛋白的表達水平進行檢測[7]，試劑盒購自杭州江萊ELISA檢測中心。

1.3 結果判讀

miR-222表達水平判讀[8]：在目的基因與內(nèi)參基因擴增效率相同的前提下，以U6為內(nèi)參，測定循環(huán)閾值（Ct值），計算△Ct（△Ct=miR-222 Ct值-U6 Ct值），以2-△△Ct表示miR-222表達水平；ERα表達水平判讀[9]：染色后顯微鏡下觀察細胞核ERα表達情況，棕黃色染色為陽性細胞，于400×視野下選取5個視野，計數(shù)100個細胞內(nèi)陽性染色強弱、陽性細胞百分率，二者乘積為ERα表達水平，其中，染色強弱計分0～3分，依次為無棕黃色染色、淺黃色染色、深黃色染色、深棕色染色；陽性細胞百分率計分0～4分，依次為0、1%～25%、26%～50%、51%～75%/、76%～100%；膠原蛋白表達水平判讀[10]：在光鏡下觀察所有染色切片，I、III型型膠原蛋白以細胞間質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)淺棕色或者棕黃色為陽性表達。每張切片隨機選取5個完整而不互相重復的×200視野，拍照后運用Image-Pro Plus計算機圖像分析系統(tǒng)，計算I型 、III型膠原蛋白所占面積百分比，即相對陽性染色面積平均值（%），得出I型、III型膠原蛋白的相對表達量。

1.4 統(tǒng)計學分析

指標表達組間比較采用t檢驗，使用Pearson相關性分析，計算各指標間相關性，SPSS18.0處理數(shù)據(jù)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 患者陰道壁各項指標表達情況

AVP組絕經(jīng)前、絕經(jīng)后亞組陰道壁miR222高于對照組相應亞組，其ERα及Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白表達水平均低于對照組相應亞組，兩組患者組內(nèi)比較，絕經(jīng)后亞組miR-222表達水平高于絕經(jīng)前亞組，其ERα表達水平低于絕經(jīng)前亞組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

2.2 相關性分析

Pearson相關性分析顯示，miR-222與ERα表達水平呈負相關，Ⅰ型膠原蛋白與Ⅲ型膠原蛋白表達水平呈正相關（P<0.05）。

3 討論

女性盆底由盆底肌、韌帶、筋膜等結構組成，共同形成盆底支持結構，在維持膀胱、尿道、陰道、子宮和直腸等盆腔器官正常位置中發(fā)揮著重要作用[11]。盆底結構的松弛可引發(fā)POP，包括AVP、陰道頂端脫垂、陰道后壁脫垂等，其中AVP最為常見，且往往伴隨陰道分泌物增多、陰道脫出物、下尿路癥狀、腸道癥狀、性功能障礙等 [12]。

一項流行病學調(diào)查顯示，老年女性POP發(fā)生率高達32.8%，且人群中約有11%～19%的POP患者需手術治

療[13]。隨著人口老齡化的加劇，POP發(fā)生率不斷上升，已成為影響全球婦女健康和生活質(zhì)量的疾患。endprint

miRNA是近年來發(fā)現(xiàn)的一種小分子非編碼RNA，可調(diào)控靶基因轉錄過程，參與生物體的發(fā)育、細胞凋亡、增殖及分化等活動，其中，miR-222是一種高度保守的非編碼小分子RNA，與ERα存在靶向調(diào)控關系，且已有研究證實miR-222在乳腺癌發(fā)生發(fā)展過程中扮演的重要角色[14]。此次研究從絕經(jīng)前后不同狀態(tài)觀察AVP患者發(fā)病機制，結果表明，女性絕經(jīng)后miR-222表達水平大幅增加，AVP患者陰道壁miR-222表達水平高于非AVP患者，且miR-222與ERα表達水平呈負相關，說明miR-222、ERα可能參與了AVP的發(fā)展，其機制可能為：隨著女性年齡的增加，雌激素等內(nèi)分泌指標的變化可能引發(fā)miR-222過表達，而miR-222過表達可下調(diào)ERα表達、降低雌激素敏感性，進而影響陰道和盆底正常組織結構，造成盆底結構支撐力下降，以及陰道前壁松弛、膨出[15-16]。

在盆底支持組織中，子宮主韌帶、子宮骸韌帶以及肛提肌均發(fā)揮著重要作用，其中，韌帶的主要成分包括平滑肌、結締組織，而膠原蛋白是結締組織的重要組成部分，約占機體全部蛋白的25%以上[17]。盆底組織主要由Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原組成，Ⅰ型硬度大、直徑粗，主要分布于皮膚、肌肉、骨骼、韌帶等組織，發(fā)揮支持作用；Ⅲ型彈性大、直徑較細，主要調(diào)控組織彈性。Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原的比例平衡才能維持女性盆底結構的穩(wěn)定性[18]。本研究結果中AVP患者陰道壁Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原表達水平均較非AVP患者顯著下降，是導致盆底結締組織膠原變細、抗張能力不足的主要原因，而上述病理變化也是造成盆腔支持能力不足特別是AVP的主要原因。

綜上所述，AVP患者陰道壁miR-222基因高表達，ERα、Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原表達水平顯著下降，且miR-222、ERα表達水平與患者月經(jīng)狀態(tài)具有一定關聯(lián)，尋求高選擇性雌激素受體以逆轉ERα下降、探索改善盆腔組織彈性及支持力的方法，有望為AVP的治療提供新的思路與方向。

參 考 文 獻

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