□ 韓 晶 吉林省食品檢驗(yàn)所

食品中的非食用色素可以采用極譜法、薄層層析、液相色譜等多種方法進(jìn)行檢測(cè)，但是目前使用廣泛的是液相色譜法。本次研究中選取了4種食品中非食用色素作為研究目標(biāo)，采用超聲波提取固相萃取柱凈化，通過(guò)高效液相色譜方法進(jìn)行快速檢測(cè)，這種方法操作簡(jiǎn)便，而且結(jié)果精密度較高，可以運(yùn)用于市場(chǎng)上一些食品中的非食用色素的快速檢測(cè)。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 儀器與試劑

本次實(shí)驗(yàn)中，我們采用的高效液相色譜儀為1260TG-16WS，DAD檢測(cè)器，安捷倫；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；實(shí)驗(yàn)中所使用的試劑有甲醇、乙酸銨，均為色譜純；去離子水。酸性紅1號(hào)（AR1），橙黃G（OY-G），酸性大紅（AR26），金黃粉（oII）等標(biāo)準(zhǔn)品。色譜柱型號(hào)為SymmetryRC，檢測(cè)的波長(zhǎng)為500 nm，色譜柱的溫度為 40 ℃，流動(dòng)相A為乙酸銨和四乙基溴化銨溶液，流動(dòng)相B為甲醇采用梯度洗脫的方法。在 15 min 內(nèi)由 80∶20 降至98∶2，流速為每分鐘0.3 mL，波長(zhǎng)為500 nm。以保留時(shí)間結(jié)合吸收曲線定性讀取待測(cè)物吸收峰面積，利用回歸方程計(jì)算，并計(jì)算樣品中的色素含量。

1.2 樣品的預(yù)處理

稱(chēng)取定量的樣品置于燒杯中，加入20 mL的提取液（乙醇V∶氨水V∶水V=7∶2∶1），利用超聲波，經(jīng)過(guò)20 min進(jìn)行提取，過(guò)濾之后向?yàn)V渣中加入20 mL的提取液，重復(fù)幾次，將濾液進(jìn)行合并之后，濃縮至10 mL，調(diào)節(jié)pH等于6即可獲得樣品溶液，凈化。固相萃取柱按順序需要采用甲醇，酸化甲醇溶液進(jìn)行預(yù)淋洗，將流速控制在5 mL/min，控制好柱內(nèi)的液體高度要高于0.5 cm，然后加入樣品溶液之后，保持流速6 mL/min進(jìn)行柱萃取。按照丙酮與正己烷以1∶1的比例加入5 mL的混合溶液，5 mL丙酮溶液和3 mL的甲醇溶液按順序進(jìn)行萃取柱的洗滌，萃取柱之后用 5 mL的洗脫液（甲醇 500 mL 與NaOH 以及氨水各 1 mol/L 50 mL 配制兩種洗脫液）洗脫后，收集淋洗液，濃縮加水定容到2 mL，過(guò)濾后待測(cè)。

2 結(jié)果分析

2.1 色譜柱的選擇

在通過(guò)對(duì)比兩款不同長(zhǎng)度的色譜柱對(duì)于非食品色素分離的影響中，發(fā)現(xiàn)兩種色譜柱都能實(shí)現(xiàn)分析物的分離，但是相比起來(lái)100 mm的色譜柱分析時(shí)間較長(zhǎng)，因此選擇50 mm作為最終的色譜分析柱。

2.2 流速的選擇

在本次實(shí)驗(yàn)中，分別設(shè)置流速為0.2、0.3、0.5、0.6 mL/min，并觀察不同的流速對(duì)色素分離的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在流速為0.2 mL/min時(shí)分析時(shí)間較長(zhǎng)，同時(shí)所分析出來(lái)的峰值效果較差，流速超過(guò)0.5 mL/min時(shí)不能達(dá)到完全分離的狀態(tài)，因此將流速定為0.3 mL/min。出峰順序?yàn)樗嵝约t1號(hào)，酸性大紅，橙黃G，金黃粉。

2.3 樣品溶液的pH優(yōu)化

在本次實(shí)驗(yàn)中，我們針對(duì)一些含有非食用色素的食品進(jìn)行分析，這些色素都含有磺酸基。我們發(fā)現(xiàn)溶液的pH是與其帶電情況相關(guān)的，為了能夠獲得較好的回收率，我們對(duì)溶液的pH值進(jìn)行優(yōu)化，通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)溶液的pH為5～7時(shí)具有較好的回收率，因此將樣品的pH調(diào)至5～7進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.4 洗脫溶劑和洗脫體積的優(yōu)化

在實(shí)驗(yàn)中選擇了兩種洗脫溶劑，分別比較這兩種溶劑的洗脫效果。通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)利用氫氧化鈉-甲醇溶液和氨水-甲醇溶液這兩種洗脫溶劑時(shí)，前者能夠獲得較高的回收率，當(dāng)洗脫體積為5 mL時(shí)，該條件下可以將色素完全洗脫，因此可以采用氫氧化鈉-甲醇溶液作為洗脫溶劑。

2.5 方法驗(yàn)證

將4種色素按照不同的梯度濃度，分別為0.1、0.5、1、5、10、100 μg/mL進(jìn)樣，通過(guò)色譜峰的面積對(duì)濃度作圖，獲得曲線圖，r＞0.999。方法檢出限以3倍信噪比進(jìn)行計(jì)算，低于81 ng/mL。回收率RSD在0.6%～5%之間，達(dá)87%以上。用市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)到的梅干樣品做檢測(cè)，但是經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)上述樣品不含非食用色素，但檢測(cè)出胭脂紅和日落黃這兩種食用色素。

3 結(jié)語(yǔ)

利用高效液相色譜法能夠在短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)對(duì)食品中非食用色素的定性和定量分析，這種方法靈敏度較高，而且結(jié)果準(zhǔn)確可靠，能夠廣泛用于日常食品樣品中的色素檢測(cè)。