王小霞，陳煜森，馬曉瑭，潘群文，黃子慧

1.廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，廣東湛江市524002；2.廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)病學(xué)研究所，廣東湛江市524000

Rab27a基因位于15號(hào)染色體的反義鏈上(15q21)，所編碼的蛋白是參與真核細(xì)胞中各種囊泡對(duì)接、分泌、運(yùn)輸和融合的鳥(niǎo)苷三磷酸(guanosine triphosphate,GTP)酶蛋白家族的重要成員[1]。

1 Rab27a基因概述

1.1 克隆、表達(dá)及效應(yīng)蛋白

Rab蛋白家族的成員是Ras超家族的非轉(zhuǎn)化單體GTP結(jié)合蛋白，其含有涉及GTP結(jié)合和水解的4個(gè)高度保守區(qū)域。Rabs是膜結(jié)合蛋白參與囊泡融合和運(yùn)輸?shù)闹匾獏⑴c者。與其他Rab蛋白相似，Rab27a在GTP結(jié)合的活性狀態(tài)和鳥(niǎo)苷二磷酸(guanosine diphosphate,GDP)結(jié)合的非活性狀態(tài)之間循環(huán)。Rab27a在其C端的兩個(gè)保守半胱氨酸殘基處發(fā)生異戊二烯化，這種修飾在囊泡運(yùn)輸過(guò)程中可將Rab27a錨定到膜上。這是Rab27a參與真核細(xì)胞中囊泡和細(xì)胞器的靶向?qū)尤诤系幕A(chǔ)[1]。研究表明，通過(guò)保守Rab蛋白GTP結(jié)合結(jié)構(gòu)域的2個(gè)序列的簡(jiǎn)并寡核苷酸引物對(duì)人黑色素瘤細(xì)胞cDNA進(jìn)行PCR，能夠分離編碼Rab27a和Rab27b的cDNA[2]。序列比較顯示，Rab27b是與Rab27a在氨基酸水平上具有71%同一性的同系物[3]。

Rab27a作為Rab家族中的一類(lèi)Ras小GTP酶，廣泛參與調(diào)控真核生物的細(xì)胞內(nèi)膜運(yùn)輸，其功能的發(fā)揮往往都需要Rab27a效應(yīng)蛋白的參與。到目前為止，已經(jīng)在人類(lèi)和小鼠中鑒定了11種與Rab27的GTP結(jié)合形式特異性作用的不同Rab27效應(yīng)物，主要包括以下三組。第一組包含突觸結(jié)合蛋白樣蛋白(Slps)和rabphilin(Rab結(jié)合蛋白)，其特征在于N-末端Rab27-結(jié)合Slp同源結(jié)構(gòu)域(SHD)和C末端串聯(lián)C2結(jié)構(gòu)域。第二組含有Slac2(缺少C2結(jié)構(gòu)域的Slp同源物)和Noc2(Rab結(jié)合蛋白)。兩者都含有N-末端SHD但缺少C2結(jié)構(gòu)域。第三組僅包含Munc13-4(Rab結(jié)合蛋白)，含有兩個(gè)獨(dú)立的C2結(jié)構(gòu)域和不同于SHD的Rab27結(jié)合位點(diǎn)[4]。

1.2 Rab27a基因功能

脈絡(luò)膜缺失癥(choroideremia,CHM)是一種X連鎖的視網(wǎng)膜退行性疾病，由Rab Escort蛋白1(Rab Escort protein 1,REP1)突變引起。REP1在Rab GTP酶的異戊烯化中起作用，Rab GTP酶是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)傳遞的調(diào)節(jié)劑。Rab27a在Rabs中是獨(dú)特的，因?yàn)樗贑HM細(xì)胞中會(huì)被選擇性地非甲基化，這表明CHM中的退化過(guò)程可能是由于Rab27a的非甲基化和隨后的功能喪失所致[5]。在Rab27a敲除小鼠的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(retinal pigment epithelium,RPE)中，黑素體不能移出黏附連接軸并且不能進(jìn)入RPE光感受器頂端，這表明Rab27a調(diào)節(jié)RPE中的黑素體分布[6]。使用小鼠RPE原代培養(yǎng)的活細(xì)胞成像來(lái)研究黑素體動(dòng)態(tài)，結(jié)果表明與皮膚黑素細(xì)胞不同，Rab27a的作用是通過(guò)Rab27a-Myrip-MyoVIIa復(fù)合物(MYRIP、Rab27a效應(yīng)蛋白、MyoVIIa，肌球蛋白)調(diào)節(jié)黑素小體束縛到肌動(dòng)蛋白絲上，該過(guò)程確保黑素體向細(xì)胞周邊移動(dòng)[7]。

在皮膚黑素細(xì)胞中，Slac2-a/黑素蛋白在成熟黑素體上和基于肌動(dòng)蛋白的運(yùn)動(dòng)肌球蛋白Va之間形成橋接，并且所得到的三聯(lián)蛋白復(fù)合物促進(jìn)黑素體從微管轉(zhuǎn)移至肌動(dòng)蛋白絲，參與黑素體運(yùn)輸[8]。Melanophilin(Mlph)是一種與Rab27a-和肌球蛋白Va(MyoVa)結(jié)合的蛋白，也可調(diào)節(jié)黑色素細(xì)胞中黑素體轉(zhuǎn)運(yùn)這一過(guò)程。通過(guò)干預(yù)Mlph與Rab27a和MyoVa相互作用，可挽救黑素體運(yùn)輸缺陷[9]。

此外，Rab27a還可以調(diào)節(jié)溶酶體相關(guān)細(xì)胞器(lysosome-related organelle,LRO)的轉(zhuǎn)運(yùn)和分泌顆粒在各種類(lèi)型的細(xì)胞中的釋放。LRO包括黑素細(xì)胞中的黑素體、淋巴細(xì)胞中的溶解顆粒、血小板中的δ顆粒和破骨細(xì)胞中的“分泌”溶酶體("secretory"lysosomes in osteoclasts,OCL)。Rab27a 基 因 敲 除 灰 鼠(Ashen鼠)OCL顯示，骨吸收活性異常和溶酶體定位明顯減少，表明Rab27a缺陷導(dǎo)致OCL中LRO的異常轉(zhuǎn)運(yùn)[10]。有研究表明，Rab27a可促進(jìn)自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell)早期脫顆粒，并且不同的NK細(xì)胞活化受體優(yōu)先將Rab27a或Munc13-4募集到含有穿孔素的顆粒中以獲得細(xì)胞毒性，突出了Munc13-4和Rab27a之間的脫顆粒相互作用[11]。在細(xì)胞溶膠和未受刺激的NK細(xì)胞的質(zhì)膜中，大部分裂解顆粒(lytic granule,LG)是可移動(dòng)的。研究表明，細(xì)胞溶膠中的LG運(yùn)動(dòng)需要微管而不是肌動(dòng)蛋白，而在質(zhì)膜上的運(yùn)動(dòng)則需要微管和肌動(dòng)蛋白。在質(zhì)膜上，Rab27a缺陷會(huì)使可移動(dòng)LG比例減少，而在細(xì)胞溶膠中，Rab27a缺陷卻可以增加可移動(dòng)LG比例，增加它們的運(yùn)動(dòng)程度[12]。

研究表明，趨化因子CCL5是第一個(gè)涉及調(diào)節(jié)抗腫瘤免疫反應(yīng)的趨化因子之一。Rab27a或hMunc13-4的缺陷可消除T淋巴細(xì)胞分泌顆粒(cytotoxic T lymphocyte cytotoxic granules,CG)胞吐作用和CCL5的突觸分泌。細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)是通過(guò)將CCL5儲(chǔ)存在不同于CG的T細(xì)胞質(zhì)囊泡(CTL store CCL5 in cytoplasmic vesicles,CCL5V)中，并且與靶細(xì)胞，如肺腫瘤細(xì)胞，在免疫突觸(immunological synapse,IS)的Rab27a-hMunc13-4隔室合并，同時(shí)觸發(fā)CG胞吐以及CCL5突觸分泌的[13]。而CTL裂解顆粒向免疫突觸的終端轉(zhuǎn)運(yùn)則由驅(qū)動(dòng)蛋白-1/Slp3/Rab27a復(fù)合物介導(dǎo)[14]。此外，Rab27a介導(dǎo)的CTL中溶解顆粒分泌也是免疫突觸處皮質(zhì)肌動(dòng)蛋白功能恢復(fù)所需的[15]。

在病毒感染方面，Rab27a能通過(guò)促進(jìn)包膜蛋白的細(xì)胞表面轉(zhuǎn)運(yùn)促進(jìn)人類(lèi)parain流感病毒2型的生長(zhǎng)[16]。Rab27a可通過(guò)指導(dǎo)磷脂酰肌醇4-激酶2型(PI4KII)陽(yáng)性?xún)?nèi)涵體向病毒多蛋白Pr55質(zhì)膜(PM)轉(zhuǎn)運(yùn)從而控制HIV-1的復(fù)制[17]。在Rab27a沉默細(xì)胞中單純皰疹病毒感染少突膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量和病毒產(chǎn)量顯著降低[18]。

1.3 基因結(jié)構(gòu)

Rab27a基因包含5個(gè)編碼外顯子和2個(gè)非編碼外顯子，其中一個(gè)可交替使用，并且跨越約65 kB的DNA。在長(zhǎng)3'UTR區(qū)域中有3個(gè)可選擇的poly-A加成位點(diǎn)，還有6個(gè)潛在的單核苷酸多態(tài)性。通過(guò)熒光原位雜交確定該基因位于染色體15q15-21.1上，并通過(guò)輻射雜交作圖定位于標(biāo)記D15S209和AFM321ZD5之間[5]。

1.4 遺傳學(xué)特征

Griscelli綜合征2型(Griscelli syndrome 2,GS2)是由Rab27a基因突變引起的一種常染色體隱性遺傳疾病，其臨床特征為部分白化病和嗜血細(xì)胞性淋巴細(xì)胞增多癥(hemophagocytic lymphohistiocytosis,HLH)，免疫異常則表現(xiàn)在以細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞裂解活性受損為主。造血干細(xì)胞移植(hematopoietic stem cell transplantation,HSCT)是GS2的唯一治愈性治療[19]。

1.5 動(dòng)物模型

與GS2型患者相對(duì)應(yīng)的小鼠模型Ashen鼠存在Rab27a基因突變，灰色表型也是由于黑色素在黑素細(xì)胞的核周區(qū)域中積聚，損害了這些顆粒向角質(zhì)形成細(xì)胞轉(zhuǎn)移，因此導(dǎo)致色素沉著不足，毛發(fā)灰色，免疫學(xué)特征包括對(duì)重復(fù)感染的易感性和T細(xì)胞細(xì)胞毒性活性的缺乏[20]。

研究表明，Ashen鼠存在血小板缺陷，可導(dǎo)致出血時(shí)間增加和血小板致密顆粒數(shù)量分泌減少或基本正常，但顆粒內(nèi)部是異常的。膠原介導(dǎo)的Ashen鼠血小板的聚集能力明顯抑制。其他2種主要血小板顆粒，溶酶體和α顆粒，其濃度或分泌率無(wú)明顯異常[21-22]。

Rab27a在胰島中高度特異性地表達(dá)，在胰腺β細(xì)胞中，高葡萄糖刺激下，Rab27a介導(dǎo)胰島素顆粒與質(zhì)膜的緊密對(duì)接。Ashen小鼠顯示葡萄糖不耐受，外周組織沒(méi)有胰島素抵抗的跡象或胰腺中的胰島素缺乏。在Ashen小鼠胰島中，胰島素顆粒在質(zhì)膜上的對(duì)接和在葡萄糖刺激期間對(duì)接顆粒的補(bǔ)充顯著減少[23]。

還有研究表明，Ashen鼠表現(xiàn)出低繁殖力，Rab27a不參與卵母細(xì)胞成熟，但在調(diào)控皮質(zhì)顆粒(cortical granule,CG)胞吐方面發(fā)揮重要作用，在小鼠卵母細(xì)胞的孤雌激活劑氯化鍶(strontium chloride,SrCl2)孤雌激活后，Rab27a RNAi或抗體注射卵母細(xì)胞則不能進(jìn)行CG胞吐作用[24]。

2 Rab27a基因與多種疾病的關(guān)聯(lián)性

Rab27a基因位于染色體15q15-21.1上，研究表明，Rab27a蛋白在造血譜系、脾臟、肺、眼睛、胰腺和胃腸道中廣泛表達(dá)。其他組織如肝臟、心臟、肌肉、睪丸和腦組織在正確組織灌注時(shí)則Rab27a的表達(dá)比較少[25]。大量證據(jù)顯示，Rab27a基因廣泛參與癌癥、炎癥、血栓形成等疾病的發(fā)生發(fā)展。

2.1 Rab27a與癌癥及血管形成

研究表明，Rab27a表達(dá)水平降低會(huì)削弱血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-1(vascular endothelial growth factor,VEGFR1)的棕櫚?；?，降低其穩(wěn)定性，使血管萌芽和體內(nèi)血管生成增加[26]。Rab27a基因還能對(duì)多種腫瘤的遷移和侵襲等特性產(chǎn)生重要影響，在結(jié)腸癌組織和細(xì)胞系中，Rab27a過(guò)表達(dá)時(shí)miRNA-582-5P表達(dá)下調(diào)，而過(guò)表達(dá)miR-582-5P能夠通過(guò)靶向抑制Rab27a從而抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的侵襲能力[27]。在腦膠質(zhì)瘤中，Rab27a在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)高于正常腦組織，且其表達(dá)隨著膠質(zhì)瘤級(jí)別進(jìn)展而增加[28]，Rab27a可以促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和侵襲，抑制細(xì)胞凋亡[29]。在胰腺癌中，Rab27a下調(diào)能增強(qiáng)對(duì)順鉑的敏感性并誘導(dǎo)人轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞(ASPC-1)的凋亡，降低ASPC-1細(xì)胞的侵襲和增殖能力[30]。研究表明，在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中干擾Rab27a的表達(dá)水平能顯著降低腫瘤的增殖和侵襲，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，并增加對(duì)NSCLC化療藥物的敏感性[31]。很多研究顯示，Rab27a在腫瘤中很可能發(fā)揮癌基因的作用，抑制Rab27a的表達(dá)能夠抑制腫瘤的生長(zhǎng)。因此Rab27a很可能是治療腫瘤的有效靶分子。到目前為止，Rab27a在人類(lèi)癌癥中的作用還存在一些矛盾的地方，如與正常組織相比，miR-182-5p在胃癌(gastric cancer,GC)組織中以較高水平表達(dá)，而Rab27a在癌組織中以較低水平表達(dá)。miR-182-5p的下調(diào)和Rab27a的上調(diào)可顯著降低HGC-27細(xì)胞的活力、遷移、侵襲和有絲分裂[32]。這些矛盾的發(fā)現(xiàn)表明，Rab27a在特定情況下可能在不同的人類(lèi)癌癥中具有不同的分子機(jī)制，這還有待以后進(jìn)一步探究。

2.2 Rab27a與炎癥

中性粒細(xì)胞響應(yīng)各種炎癥刺激，可形成嗜中性粒細(xì)胞胞外陷阱(neutrophil extracellular traps,NETs)，在宿主防御中起著至關(guān)重要的作用，而活性氧(reactive oxygen species,ROS)的產(chǎn)生是NETs形成的關(guān)鍵。研究表明，Rab27a敲除抑制了ROS陽(yáng)性吞噬體的形成，也抑制血清處理的白色念珠菌以ROS依賴(lài)性方式觸發(fā)的NET形成[33]。一方面，Munc13-4可限制表達(dá)Rab27a的囊泡運(yùn)動(dòng)性以促進(jìn)脂多糖誘導(dǎo)的嗜中性粒細(xì)胞胞吐作用[34]。另一方面，在脂多糖誘導(dǎo)的系統(tǒng)性炎癥模型中，Ashen小鼠對(duì)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)的死亡具有拮抗性，Ashen小鼠顯示LPS施用后顯著降低的腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α)的血漿水平和肝臟中嗜中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)，突出了Rab27a在LPS介導(dǎo)的全身性炎癥中以前未被認(rèn)識(shí)到的作用[35]。Ashen小鼠的嗜中性粒細(xì)胞在體外和體內(nèi)表現(xiàn)出遷移缺陷[36]。另外，Rab27a敲除也損害了髓過(guò)氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)向血漿中的分泌，干擾JFC1/Slp1-Rab27a分泌機(jī)制能夠減弱透化的嗜中性粒細(xì)胞中MPO的分泌[37]。有研究表明，Ashen小鼠在內(nèi)毒素攻擊時(shí)顯示極低的嗜中性粒細(xì)胞分泌蛋白的血漿水平，說(shuō)明過(guò)表達(dá)Rab27a可能有利于阻斷膿毒癥的進(jìn)展，突出顯示Rab27a作為治療系統(tǒng)性炎癥的新型治療靶標(biāo)[38]。

2.3 Rab27a與止血和血栓形成

血管內(nèi)皮細(xì)胞含的棒狀分泌細(xì)胞器，稱(chēng)為Weibel Palade體(Weibel Palade body,WPB)，其含有止血蛋白(VWF)、P-選擇素(P-selectin)和炎癥介質(zhì)等混合物[39]。文獻(xiàn)表明，Rab27a通過(guò)其募集多種效應(yīng)物的能力，在調(diào)節(jié)WPB胞吐方面起著特別重要的作用，已經(jīng)證明Rab27a/MyRIP復(fù)合體是外周錨定WPB所必需的。這種錨定提供了對(duì)胞吐作用的制動(dòng)，并且可以防止不成熟/較少的多聚VWF的釋放[40]。研究表明，Slp4-a在促進(jìn)激素激活的WPB胞吐中起關(guān)鍵作用，WPB上的Rab27a-Slp4-a復(fù)合物通過(guò)與突觸融合蛋白結(jié)合蛋白1(syntaxin-binding protein 1,SPXBP1)相互作用促進(jìn)胞吐，從而控制脈管系統(tǒng)中血管活性物質(zhì)的釋放[41]。雖然血小板還含有Rab27b，可以補(bǔ)償灰鼠中血小板Rab27a缺陷的功能[3]。但是，最近的研究顯示，Ashen小鼠出現(xiàn)血小板聚集功能降低，出血時(shí)間延長(zhǎng)和血小板致密顆粒分泌數(shù)量減少[21]，而Rab27a調(diào)節(jié)血小板中致密顆粒的分泌機(jī)制是通過(guò)其效應(yīng)蛋白Munc13-4實(shí)現(xiàn)的[42]。雖然目前還沒(méi)有文獻(xiàn)顯示Rab27a與止血和血栓形成直接相關(guān)，鑒于Rab27a基因與血小板致密顆粒分泌過(guò)程以及血管內(nèi)皮細(xì)胞關(guān)系密切，推測(cè)Rab27a調(diào)節(jié)血小板致密顆粒的分泌異常極有可能是通過(guò)調(diào)節(jié)血小板功能或其活化后產(chǎn)生的微囊泡等的釋放作用，從而影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能以及調(diào)節(jié)止血和血栓形成等過(guò)程。

3 Rab27a基因與外泌體

3.1 Rab27a基因調(diào)節(jié)外泌體的分泌

外泌體是細(xì)胞內(nèi)在內(nèi)吞多泡室中形成的小囊泡(直徑50～100 nm)，由大多數(shù)細(xì)胞類(lèi)型分泌，包括腫瘤和免疫細(xì)胞等。外泌體攜帶了許多生物活性蛋白和核酸，可通過(guò)多膜晚期內(nèi)涵體(multivesicular late endosomes,MVEs)與質(zhì)膜融合而分泌，參與細(xì)胞間通訊、傳染病和退行性疾病等的發(fā)病機(jī)制。肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)蛋白(an actin-binding protein,coronin)控制質(zhì)膜(plasma membrane,PM)的MVE?？课稽c(diǎn)的數(shù)量。Cortactin、coronin1b和Rab27a協(xié)調(diào)控制MVE對(duì)接位點(diǎn)和外泌體分泌的肌動(dòng)蛋白穩(wěn)定性[43]。有研究指出，HeLa細(xì)胞中有5種促進(jìn)外泌體分泌的Rab GTP酶。其中，Rab27a或Rab27b敲低減少了MVE與質(zhì)膜的對(duì)接。電子顯微鏡分析顯示，來(lái)自Rab27a敲低細(xì)胞的MVEs顯著大于來(lái)自對(duì)照細(xì)胞，而在Rab27b敲低細(xì)胞中MVEs則較小。另外，沉默兩種已知的Rab27效應(yīng)物，Slp4和Slac2b分別抑制外泌體分泌和表型沉默Rab27a和Rab27b，電子顯微鏡顯示由Rab27a和Rab27b敲低細(xì)胞分泌的外泌體在大小和形態(tài)上與對(duì)照細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體相同。表明沉默Rab27a或Rab27b主要是減少細(xì)胞培養(yǎng)上清液中釋放的外泌體的量，但不修飾外泌體蛋白質(zhì)含量或形態(tài)學(xué)。在Rab27a敲低細(xì)胞中Slp4蛋白水平降低，結(jié)果顯示Rab27a和Slp4在HeLa細(xì)胞的MVE和外泌體分泌途徑中共同起作用。相反，盡管Slac2b的沉默誘導(dǎo)了Rab27b敲低細(xì)胞的表型，但還沒(méi)有研究證明這兩種蛋白之間的功能相互作用[44]。

Rab27a與外泌體的形成和分泌密切相關(guān)，目前Rab27a在外泌體方面的研究主要是通過(guò)修飾Rab27a基因來(lái)調(diào)節(jié)外泌體分泌和作用效能，進(jìn)而干擾疾病的發(fā)生發(fā)展。

3.2 Rab27a基因與腫瘤來(lái)源的外泌體

Rab27a特異性shRNA減少Rab27a表達(dá)水平，可以顯著降低非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系(A549細(xì)胞)分泌外泌體[45]，乳腺癌細(xì)胞中的Rab27a阻斷也減少了以?xún)?nèi)吞標(biāo)記物為特征的外泌體的分泌。阻斷Rab27a可導(dǎo)致原發(fā)性腫瘤生長(zhǎng)減少和肺轉(zhuǎn)移性癌(4T1)的播散，但不是非轉(zhuǎn)移癌(TS/A)[46]。直腸癌(colorectal cancer,CRC)細(xì)胞中通過(guò)敲低Rab27a可抑制外泌體分泌從而抑制外泌體誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移[47]。通過(guò)敲除外泌體分泌調(diào)節(jié)劑Rab27a減少纖維肉瘤細(xì)胞向外泌體缺乏的血清的梯度遷移[48]。在B16F10黑色素瘤細(xì)胞系中，Rab27a shRNA也可以減少外泌體及一些血管生成生長(zhǎng)因子(血小板衍生生長(zhǎng)因子，胎盤(pán)生長(zhǎng)因子)的分泌[46]。將Rab27a過(guò)表達(dá)載體轉(zhuǎn)染到人A549細(xì)胞中，體外免疫來(lái)源于Rab27a過(guò)表達(dá)細(xì)胞的外泌體在小鼠模型中抑制腫瘤生長(zhǎng)[49]。這證明了來(lái)自Rab27a過(guò)表達(dá)癌細(xì)胞的外泌體可引起更有效的抗腫瘤免疫效應(yīng)，可為有效的基于外泌體的癌癥疫苗的開(kāi)發(fā)提供新的見(jiàn)解。外泌體向來(lái)被認(rèn)為是腫瘤抗原的理想來(lái)源，并且在腫瘤免疫治療中具有潛在的治療作用。總的來(lái)說(shuō)，體內(nèi)腫瘤局部分泌外泌體可以促進(jìn)腫瘤進(jìn)展，而Rab27a又可以調(diào)節(jié)外泌體的分泌，因此，通過(guò)干預(yù)Rab27a從而干擾腫瘤的進(jìn)展，具有臨床意義。

3.3 Rab27a基因與其他來(lái)源的外泌體

研究表明，Rab27依賴(lài)產(chǎn)生的外泌體能抑制慢性炎癥，并對(duì)炎性刺激產(chǎn)生急性應(yīng)答。實(shí)驗(yàn)證明缺乏外泌體分泌的Ashen小鼠具有以升高的炎性細(xì)胞因子和骨髓增生為特征的慢性，低度炎癥表型[50]。在帕金森病MN9D多巴胺能細(xì)胞模型的研究中發(fā)現(xiàn)，α-突觸核蛋白(alpha-synuclein,αSyn)表達(dá)細(xì)胞經(jīng)Mn處理后，Rab27a蛋白增加，其調(diào)節(jié)外泌體從細(xì)胞中的釋放。新一代測(cè)序顯示，與對(duì)照組外泌體相比，從暴露于Mn的細(xì)胞分離的外泌體中存在更多的miRNA。這表明Mn可能通過(guò)增加Rab27a蛋白調(diào)節(jié)外泌體miRNA表達(dá)水平，從而導(dǎo)致進(jìn)行性神經(jīng)變性[51]。急性骨髓性白血病則通過(guò)外泌體分泌將骨髓龕轉(zhuǎn)化為白血病允許性微環(huán)境，通過(guò)靶向參與外泌體釋放的重要調(diào)節(jié)劑Rab27a破壞急性骨髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML)細(xì)胞中的外泌體分泌，可顯著延遲白血病的發(fā)展[52]。外泌體還可以將miR-214轉(zhuǎn)移到成骨細(xì)胞中以抑制其功能，Rab27a小干擾RNA抑制外泌體分泌阻止體內(nèi)卵巢切除誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞功能障礙[53]。在Ashen小鼠中，移植的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stem cells,BMSC)在梗死心臟中的存活增加，這表明，受損的心肌細(xì)胞衍生的外泌體加速了梗死心臟中移植的BMSC損傷，從而突出了心肌梗死后移植細(xì)胞損傷的新機(jī)制[54]。

4 總結(jié)

Rab27a是Rab家族的一類(lèi)Ras小GTP酶，參與調(diào)控真核細(xì)胞內(nèi)膜運(yùn)輸。一方面，Rab27a參與黑素體運(yùn)輸、調(diào)節(jié)NK細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞等細(xì)胞中溶酶體相關(guān)細(xì)胞器(lysosome-related organelle,LRO)的轉(zhuǎn)運(yùn)和分泌顆粒的釋放，其缺失引起GS2和CHM等疾病。另一方面，Rab27a對(duì)血管形成及多種腫瘤的遷移和侵襲等能力具有多樣化調(diào)控作用，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。其缺失通過(guò)抑制ROS形成及嗜中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)和功能等方面調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，參與膿毒癥等相關(guān)疾病發(fā)病。Rab27a缺失還能導(dǎo)致血小板聚集功能降低，血小板致密顆粒分泌數(shù)量減少，調(diào)控血栓形成等病理過(guò)程。此外，外泌體攜帶了許多蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、mRNA和微小RNA，可參與細(xì)胞間通訊，是目前基因和藥物傳遞的新型載體。Rab27a參與調(diào)控外泌體的釋放，抑制Rab27a表達(dá)水平，不影響外泌體蛋白質(zhì)含量或形態(tài)學(xué)，卻能減少外泌體分泌水平。在非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、直腸癌等癌癥中，Rab27a敲除能降低癌癥細(xì)胞外泌體分泌，抑制其對(duì)周?chē)荏w細(xì)胞功能的影響，并且Rab27a過(guò)表達(dá)細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體可抑制腫瘤生長(zhǎng)，提示通過(guò)干預(yù)Rab27a治療腫瘤的巨大潛力。除腫瘤細(xì)胞外，Rab27a還能調(diào)控多種細(xì)胞外泌體分泌參與疾病發(fā)病或發(fā)揮治療作用，如神經(jīng)變形疾病、白血病和心肌梗死等。眾所周知，血小板活化可釋放外泌體和微粒，而且血小板中高濃度表達(dá)Rab27a，Ashen小鼠可出現(xiàn)血小板聚集功能降低、出血時(shí)間延長(zhǎng)和血小板致密顆粒分泌減少等情況。我們的初步研究表明，與C57小鼠相比，Ashen小鼠的血小板微粒在功能上有一定程度的缺失。鑒于血小板來(lái)源的微粒及外泌體在血栓形成機(jī)制上密切相關(guān)，推測(cè)Rab27a也可能通過(guò)調(diào)節(jié)血小板外泌體參與血栓形成的發(fā)生發(fā)展，當(dāng)然，這還有待進(jìn)一步探究。