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(1.東北林業(yè)大學(xué)鹽堿地生物資源環(huán)境研究中心,東北油田鹽堿植被恢復(fù) 與重建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,黑龍江哈爾濱 150040; 2.河套學(xué)院農(nóng)學(xué)系,內(nèi)蒙古巴彥淖爾 015001; 3.大連海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,遼寧大連 116032)

釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)是人類最早利用的真核單細(xì)胞微生物,早在公元前3000年,人類就已經(jīng)開(kāi)始利用酵母制作食品。目前人們對(duì)釀酒酵母進(jìn)行的研究,尤其是對(duì)其細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的研究早已建立在分子水平[1]。研究酵母細(xì)胞壁,對(duì)更好地利用酵母有著重要的作用[2-6]。酵母細(xì)胞壁約占細(xì)胞干重的20%～30%,主要由D-葡萄糖和D-甘露糖兩類多糖組成,酵母細(xì)胞壁會(huì)隨著周?chē)h(huán)境發(fā)生變化而發(fā)生自我調(diào)節(jié),從而適應(yīng)或抵抗不良環(huán)境,保護(hù)酵母細(xì)胞[7]。

青蛤凝集素(CSL)是一種能夠凝集酵母細(xì)胞的Ca2+依賴型凝集素,其凝集活性可以被D-甘露糖和N-乙酰-D-半乳糖胺抑制[8]。CSL通過(guò)與釀酒酵母細(xì)胞壁上的甘露糖相互作用,能夠提高釀酒酵母單位時(shí)間內(nèi)的乙醇產(chǎn)量[9]。酵母細(xì)胞壁含有肽聚糖,其對(duì)維持細(xì)胞形態(tài)具有重要作用[1]。但目前為止,對(duì)于凝集素作用對(duì)酵母形態(tài)影響的研究還未有報(bào)道。本文通過(guò)對(duì)CSL與酵母相互作用時(shí),分析酵母體積的變化,了解酵母細(xì)胞壁的變化規(guī)律,并分析CSL與酵母細(xì)胞壁肽聚糖的相互作用，有助于了解凝集素與酵母相互作用的機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

青蛤凝集素(CSL) 由實(shí)驗(yàn)室前期制備所得;釀酒酵母 安琪酵母股份有限公司;辣根過(guò)氧化物酶(Horse radish peroxidase,HRP)、牛血清蛋白(BSA) 北京索萊寶公司;肽聚糖(peptidoglycan)、甘露糖(D-Mannose)、N-乙酰-D-半乳糖胺(N-acetyl-D-galactosamine) 美國(guó)sigma公司;鈣離子定量試劑盒 AAT Bioquest Inc;其他試劑 均為分析純。

YPD液體培養(yǎng)基(Yeast Extract Peptone Dextrose Medium) 分別取葡萄糖2.0 g、酵母浸粉1.0 g、蛋白胨2.0 g溶于100 mL去離子水中,121 ℃條件下滅菌20 min。

LDZX-30KBS型立式壓力蒸氣滅菌器 上海申安醫(yī)療器械廠;HZQ-C型空氣浴振蕩器 哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司;ZDP-A2160A型曲線控制恒溫培養(yǎng)箱 上海智城分析儀器制造有限公司;ZHJH-C1109B型超凈工作臺(tái) 上海智城分析儀器制造有限公司;Multiskan MK3型酶標(biāo)儀 美國(guó)Thermo公司;S-4800型掃描電鏡 日本Hitachi公司;Q150R ES型離子濺射鍍膜儀 英國(guó)Quorum公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 CSL-HRP酶聯(lián)物的制備 凝集素酶聯(lián)物制備采用高碘酸鈉法[10]。取10.0 mg CSL溶解于1 mL 0.01 mol/L磷酸鹽緩沖溶液(pH5.5)備用。取5.0 mg HRP溶解于1 mL超純水中,再加入0.2 mL 0.1 mol/L高碘酸鈉溶液,避光攪拌20 min,在1 mmol/L醋酸鈉緩沖溶液(pH4.4)中4 ℃透析12 h。透析結(jié)束后,在透析液中加入20 μL 0.2 mol/L 碳酸鹽緩沖溶液(pH9.5),之后加入全部CSL備用液,避光攪拌2 h。再加入0.1 mL 4.0 mol/mL硼氫化鈉溶液,4 ℃靜置2 h。最后在0.2 mol/L磷酸鹽緩沖溶液(pH7.4)中透析12 h,制得CSL-HRP。

1.2.2 肽聚糖包被96孔酶標(biāo)板 將3.0 mg酵母菌肽聚糖溶解于8 mL 0.1 mol/L 碳酸鹽緩沖溶液(pH9.5)中,并在每孔中加入肽聚糖溶液100 μL,4 ℃過(guò)夜。用含有0.05% Tween 20的0.02 mol/L磷酸鹽緩沖溶液(pH7.2)洗滌3次,每次3 min。洗滌后,在每孔中加入200 μL含有0.1% BSA的磷酸鹽緩沖溶液(pH7.2),4 ℃過(guò)夜。最后再用相同方式洗滌3次,備用[10]。

1.2.3 CSL-HRP固相吸附實(shí)驗(yàn) 將1.2.1方法所得的CSL-HRP溶液用超純水分別稀釋至2、1、0.5、0.25、0.125 mg/mL。取各稀釋液100 μL加入到1.2.2方法所得的96孔板中,37 ℃反應(yīng)1 h后,以PBS洗滌3次。加入100 μL含有0.4 mg/mL鄰苯二胺及0.01% H2O2的磷酸-檸檬酸緩沖液(pH5.0),37 ℃進(jìn)行顯色反應(yīng)10 min,用2 mol/L H2SO4終止反應(yīng),在492 nm處測(cè)定吸光值[10]。

1.2.4 pH對(duì)CSL-HRP結(jié)合肽聚糖的影響 取90 μL 0.05 mol/L的HAc-NaAc(pH5.0)、NaH2PO4-Na2HPO4(pH6.0)、NaH2PO4-Na2HPO4(pH7.0)、Tris-HCl(pH8.0)、Gly-NaOH(pH9.0)溶液加入到1.2.2方法所得的96孔板中,再加入90 μL CSL-HRP,37 ℃反應(yīng)1 h后,以PBS洗滌3次后,按照1.2.3顯色反應(yīng)和終止反應(yīng)方法進(jìn)行,并測(cè)吸光值[10]。

1.2.5 D-Mannose與GalNAc的濃度對(duì)CSL-HRP結(jié)合肽聚糖的影響 分別取50 μL 0.625、1.25、2.5、5、10 mg/mL的D-Mannose溶液和GalNAc溶液,加入到1.2.2方法所得的96孔板中,再加入50 μL CSL-HRP,37 ℃反應(yīng)1 h后,以PBS洗滌3次后,按照1.2.3顯色反應(yīng)和終止反應(yīng)方法進(jìn)行,并測(cè)吸光值[10]。

1.2.6 酵母菌活化 將活性干酵母1.0 g加入到100 mL含2%葡萄糖的無(wú)菌水中,35 ℃條件下,活化30 min,得到酵母菌懸液。

1.2.7 釀酒酵母與CSL結(jié)合后表面積變化測(cè)定 由于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的酵母細(xì)胞新陳代謝水平以及各種代謝物的積累水平都比較穩(wěn)定,所以本實(shí)驗(yàn)選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的中間階段,即酵母生長(zhǎng)到12 h時(shí)對(duì)其進(jìn)行NaCl和CSL浸泡處理,盡量縮小由取樣時(shí)間帶來(lái)的偏差。

將活化后的酵母溶液10 mL加入到100 mL YPD液體培養(yǎng)基中,在30 ℃、150 r/min條件下培養(yǎng)12 h(對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期)得到酵母菌懸液。將進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的釀酒酵母懸液按照1∶1體積比加入到6種不同濃度的NaCl溶液中,溶液中含有的NaCl終濃度分別為0、20、40、60、80、100 mg/mL,30 ℃浸泡30 min后,置于室溫15 min后,利用顯微鏡測(cè)量酵母細(xì)胞直徑大小,并計(jì)算其表面[11]。每個(gè)濃度重復(fù)3次,每次隨機(jī)選取5個(gè)細(xì)胞進(jìn)行測(cè)量。

取進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的酵母懸液100 μL分別加入到100 μL不同濃度CSL溶液中,得到CSL最終濃度分別為3.37、6.73、13.45 mg/mL的酵母菌懸液,30 ℃浸泡30 min后,置于室溫15 min后,利用顯微鏡測(cè)量酵母細(xì)胞直徑大小,并計(jì)算其表面積。每個(gè)濃度重復(fù)3次,每次隨機(jī)選取5個(gè)細(xì)胞進(jìn)行測(cè)量。

由圖2可知，鮮肉泥的紅度值隨腌制時(shí)間的延長(zhǎng)而下降，因此，選取腌制3 h時(shí)紅度值較高的生鮮肉泥用于制作肉脯。

酵母細(xì)胞表面積計(jì)算,假設(shè)酵母細(xì)胞為球體。

表面積S=4πR2(R為球體半徑)

1.2.8 酵母細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度測(cè)定 鈣離子標(biāo)準(zhǔn)曲線:取300 mmol/L鈣離子標(biāo)準(zhǔn)溶液10 μL加入到990 μL稀釋緩沖液中,制得3 mmol/L鈣離子標(biāo)準(zhǔn)液。再取50 μL 3 mmol/L鈣離子標(biāo)準(zhǔn)液加入到950 μL稀釋緩沖液中,制得150 μmol/L鈣離子標(biāo)準(zhǔn)液,1∶2梯度稀釋分別得到濃度為75、37.5、18.75、9.375、4.68、2.34、0 μmol/L的鈣離子標(biāo)準(zhǔn)液,在96孔板中分別每孔加入鈣離子標(biāo)準(zhǔn)液50 μL及顯色液50 μL,室溫下避光反應(yīng)5～10 min,于650 nm處測(cè)吸光度值。

酵母細(xì)胞裂解緩沖液:分別取EDTA 1.46 g,β-巰基乙醇35 μL,NaCl 0.585 g,甘油10 mL,PMSF(100×)0.5 mL,溶于0.1 mol/L 的Tris-HCl(pH7.5)并定容至50 mL。

苯甲基磺酰氟(PMSF)(100×):取0.1742 g PMSF溶于10 mL異戊醇,室溫保存。

取按1.2.6方法所得的菌懸液以及終濃度為13.45 mg/mL CSL浸泡30 min的菌懸液,用0.05 mol/L pH7.4 PBS清洗3次,然后用PBS將菌液調(diào)整至OD600值為0.85±0.005,各取75 mL離心收集酵母細(xì)胞,懸浮于1 mL酵母細(xì)胞裂解緩沖液中,超聲破碎30 min(超聲功率300 W,工作1 s,間歇0.5 s)。4 ℃ 10000 r/min離心15 min,取上清液使用鈣離子定量試劑盒于650 nm處測(cè)吸光度[12]。鈣離子濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及樣品中鈣離子濃度的測(cè)定均平行3次實(shí)驗(yàn)。

1.2.9 掃描電鏡觀察 按1.2.6方法所得的菌懸液及終濃度為13.45 mg/mL CSL浸泡30 min的菌懸液,于4 ℃ 4000 r/min條件下離心10 min,所得菌體用0.05 mol/L pH7.4的PBS清洗3次,之后沉淀物用1 mL 2.5%戊二醛固定液,于4 ℃固定12 h。固定后的菌懸液,以0.05 mol/L pH7.4的PBS清洗3次,沉淀以0.05 mol/L pH7.4的PBS 制成菌懸溶。

取200 μL菌懸液滴加到蓋玻片上,在培養(yǎng)皿中自然沉降2 h。依次以50%、70%、80%、90%、100%叔丁醇溶液脫水,脫水間隔10 min。100%叔丁醇脫水2次后,再加入100%叔丁醇于4 ℃固化,真空冷凍干燥。將干燥后的菌體切割成3 mm×6 mm小塊,以導(dǎo)電雙面膠粘貼于銅臺(tái)上,用噴金儀進(jìn)行噴金,置于掃描電鏡中進(jìn)行觀察(10000倍)[13]。

2 結(jié)果與分析

2.1 CSL與肽聚糖的相互作用

2.1.1 固相吸附 將酵母細(xì)胞壁肽聚糖與新制備的不同濃度的CSL-HRP溶液在96孔板板上進(jìn)行結(jié)合測(cè)試,結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可知,CSL與肽聚糖可以結(jié)合,并隨著CSL濃度的增加,CSL與肽聚糖結(jié)合的量也在增加,具有濃度依賴關(guān)系。

圖1 CSL固相吸附Fig.1 Binding ability of CSL to peptidoglycan

2.1.2 pH對(duì)CSL與肽聚糖結(jié)合的影響 pH對(duì)CSL與肽聚糖結(jié)合的影響結(jié)果見(jiàn)圖2。由圖2可知,當(dāng)pH為6時(shí),CSL結(jié)合肽聚糖的量最高,但隨著pH的上升,CSL與肽聚糖的結(jié)合能力逐步下降。結(jié)果表明,CSL與肽聚糖的結(jié)合受pH的影響,在pH為6時(shí)結(jié)合能力最強(qiáng)。

圖2 pH對(duì)CSL與肽聚糖結(jié)合的影響Fig.2 Effect of pH on binding ability of CSL to peptideglycan

2.1.3 GalNAc對(duì)CSL與肽聚糖結(jié)合的影響 GalNAc對(duì)CSL與肽聚糖結(jié)合的影響結(jié)果見(jiàn)圖3。由圖3可知,隨著GalNAc濃度的增加,CSL結(jié)合肽聚糖的能力逐漸下降。結(jié)果表明,CSL與酵母細(xì)胞壁肽聚糖的結(jié)合受到GalNAc的抑制,而CSL凝集活性又可以被GalNAc抑制,說(shuō)明CSL上有GalNAc結(jié)合位點(diǎn)[13]。

圖3 GalNAc對(duì)CSL與肽聚糖結(jié)合的影響Fig.3 Effect of GalNAc on binding ability of CSL to peptideglycan

2.1.4 D-Mannose對(duì)CSL與肽聚糖結(jié)合的影響 D-Mannose對(duì)CSL與肽聚糖結(jié)合的影響結(jié)果見(jiàn)圖4。由圖4可知,隨著D-Mannose濃度的增加,CSL結(jié)合肽聚糖的能力逐漸下降。結(jié)果表明,CSL與酵母細(xì)胞壁肽聚糖的結(jié)合受到D-Mannose的抑制,而CSL凝集活性又可以被D-Mannose抑制,說(shuō)明CSL上有D-Mannose結(jié)合位點(diǎn)[13]。

圖4 D-Mannose對(duì)CSL與肽聚糖結(jié)合的影響Fig.4 Effect of D-mannose on binding ability of CSL to peptideglycan

Tong等[14]研究凝集素MCL-T時(shí)發(fā)現(xiàn),該凝集素結(jié)合OMP時(shí),受到PSM及GalNAc的抑制。一般而言,凝集素具有專一的糖結(jié)合位點(diǎn),而CSL與肽聚糖的結(jié)合受到GalNAc、D-Mannose的抑制說(shuō)明,肽聚糖結(jié)合位點(diǎn)與GalNAc、D-Mannose的結(jié)合位點(diǎn)分別存在于凝集素上不同的結(jié)構(gòu)域中,CSL與GalNAc、D-Mannose的結(jié)合導(dǎo)致了其與肽聚糖的結(jié)合,導(dǎo)致結(jié)合減少。

2.2 釀酒酵母細(xì)胞鹽脅迫條件下及青蛤凝集素CSL作用下表面積變化

釀酒酵母細(xì)胞在不同環(huán)境條件下其代謝行為發(fā)生改變,在這一應(yīng)激過(guò)程中,酵母細(xì)胞可能發(fā)生了一系列的變化,包括細(xì)胞大小、表面積等的變化,因此本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了青蛤凝集素與釀酒酵母共培養(yǎng)以觀察細(xì)胞表面積變化。

將釀酒酵母細(xì)胞放大1000倍后,在100 mg/mL NaCl鹽脅迫條件下表面積變化如圖5所示。圖5A為在正常條件下酵母細(xì)胞大小,圖5B為在NaCl濃度100 mg/mL條件下酵母細(xì)胞大小。由圖5可見(jiàn),NaCl在濃度為100 mg/mL時(shí)會(huì)導(dǎo)致釀酒酵母細(xì)胞表面積變小。

圖5 釀酒酵母細(xì)胞在100 mg/mL NaCl脅迫條件下細(xì)胞表面積(1000×)Fig.5 Surface area of the yeast against 100 mg/mL NaCl(1000×)注：A：對(duì)照組釀酒酵母細(xì)胞; B：100 mg/mL NaCl脅迫下的釀酒酵母細(xì)胞。

不同濃度NaCl環(huán)境中酵母細(xì)胞表面積大小見(jiàn)圖6。由圖6可見(jiàn),NaCl濃度在小于20 mg/mL時(shí),釀酒酵母細(xì)胞表面積無(wú)明顯變化。NaCl濃度在大于40 mg/mL時(shí),釀酒酵母細(xì)胞隨著NaCl濃度的增加,酵母細(xì)胞收縮,液泡縮小,細(xì)胞的表面積縮小。

圖6 在NaCl脅迫條件下釀酒酵母細(xì)胞表面積的變化Fig.6 Surface area change of yeast cell during exposure to NaCl solution

釀酒酵母細(xì)胞在CSL作用下表面積變化如圖7所示。圖7A、7B、7C、7D分別為CSL濃度0、3.37、6.73、13.45 mg/mL條件下的酵母細(xì)胞顯微鏡下照片。結(jié)果表明,CSL可以致使釀酒酵母細(xì)胞表面積發(fā)生改變。

不同濃度CSL環(huán)境中酵母細(xì)胞表面積的大小見(jiàn)圖8。由圖8可知,正常條件下,酵母細(xì)胞表面積的平均值約為89.21 μm2。在CSL的作用下,釀酒酵母細(xì)胞表面積明顯縮小,并隨CSL濃度增加而減小,在CSL濃度增加到3.37、6.73、13.45 mg/mL條件下,細(xì)胞表面積平均值分別為81.16、72.94及69.94 μm2,這表明CSL促使釀酒酵母細(xì)胞壁發(fā)生了改變,導(dǎo)致了釀酒酵母細(xì)胞的表面積隨著CSL濃度的增加而變小。

圖8 不同CSL濃度條件下酵母細(xì)胞表面積的變化Fig.8 Surface area change of yeast cell during exposure to different concentration of CSL solution

圖7 CSL對(duì)釀酒酵母細(xì)胞表面積的影響(1000×)Fig.7 Effect of CSL on surface area of Saccharomyces cerevisiae(1000×)注:A：對(duì)照組釀酒酵母細(xì)胞;B：CSL為3.37 mg/mL時(shí)的釀酒酵母細(xì)胞; C：CSL為6.73 mg/mL時(shí)的釀酒酵母細(xì)胞;D：CSL為13.45 mg/mL時(shí)的釀酒酵母細(xì)胞。

NaCl濃度的增加會(huì)導(dǎo)致酵母細(xì)胞體積減小,說(shuō)明此種酵母細(xì)胞的體積及表面積會(huì)在周?chē)h(huán)境發(fā)生變化的條件下進(jìn)行適應(yīng)性改變。Tong等與Liu等已證明在釀酒酵母發(fā)酵過(guò)程中加入CSL能夠凝集釀酒酵母細(xì)胞、促進(jìn)其增殖和提高乙醇產(chǎn)量[8-9]。本實(shí)驗(yàn)加入CSL導(dǎo)致酵母細(xì)胞體積及表面積減小,說(shuō)明CSL與釀酒酵母細(xì)胞壁相互作用,使釀酒酵母的細(xì)胞壁發(fā)生了變化,從而使外源信號(hào)傳遞到釀酒酵母胞內(nèi),使代謝途徑產(chǎn)生了相應(yīng)的響應(yīng),提高了酵母細(xì)胞產(chǎn)生乙醇能力。

2.3 酵母細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度

鈣離子濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖9。由圖9可知,使用鈣離子定量試劑盒繪制的鈣離子濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍為0～75 μmol/L,其濃度和吸光度呈良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)R2大于0.994。通過(guò)該方法測(cè)得對(duì)照組Ca2+濃度為24.0949 μmol/L,凝集素添加組鈣離子濃度為24.3513 μmol/L,與對(duì)照組相比,無(wú)顯著性差異(p<0.05)。

圖9 鈣離子濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.9 The standard curve of calcium ion

酵母細(xì)胞中包括鹽、環(huán)境壓力和營(yíng)養(yǎng)物感應(yīng)等許多方面的Ca2+信號(hào)已被充分研究,Ca2+作為真核細(xì)胞內(nèi)廣泛存在的細(xì)胞內(nèi)信使調(diào)控許多細(xì)胞過(guò)程。酵母細(xì)胞外Ca2+一般情況下是通過(guò)一個(gè)未知的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白X(transporter X)進(jìn)入到細(xì)胞質(zhì)內(nèi),當(dāng)外界環(huán)境中Ca2+濃度較高時(shí)還會(huì)有轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白M(transporter M)參與[15]。通過(guò)研究添加CSL后，酵母細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度變化來(lái)考察CSL信號(hào)的傳遞途徑。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)鈣離子定量試劑盒,對(duì)單位時(shí)間內(nèi)乙醇產(chǎn)量發(fā)生變化的對(duì)照組與CSL添加組兩組酵母菌內(nèi)的Ca2+含量進(jìn)行了測(cè)定,發(fā)現(xiàn)兩組酵母菌內(nèi)的鈣離子含量未發(fā)生明顯變化,說(shuō)明CSL刺激酵母菌產(chǎn)乙醇可能與酵母細(xì)胞內(nèi)鈣離子通路相關(guān)性不強(qiáng),CSL與釀酒酵母細(xì)胞壁的相互作用可能并未影響到transporter X。

2.4 電鏡掃描結(jié)果

通過(guò)電鏡掃描觀察對(duì)照組與CSL添加組的酵母形態(tài)見(jiàn)圖10,發(fā)現(xiàn)這兩者具有較明顯差異。由圖10A能觀察到對(duì)照組酵母細(xì)胞表面較圓潤(rùn)光滑,而圖10B中CSL添加組酵母細(xì)胞表面有較多贅附凸起。電鏡掃描結(jié)果提示,CSL使釀酒酵母的細(xì)胞壁表面形態(tài)發(fā)生了變化,這一變化與CSL促進(jìn)了酵母細(xì)胞的發(fā)酵能力的提高[8-9]有一定的內(nèi)在聯(lián)系。

圖10 酵母電鏡掃描照片F(xiàn)ig.10 Scanning electron micrographs of yeast 注:A：對(duì)照組釀酒酵母細(xì)胞;B：CSL組釀酒酵母細(xì)胞。

3 結(jié)論

通過(guò)研究發(fā)現(xiàn),CSL可與酵母細(xì)胞壁肽聚糖結(jié)合且兩者的結(jié)合具有濃度依賴關(guān)系,該結(jié)合位點(diǎn)受甘露糖(D-Mannose)及N-乙酰-D-半乳糖胺(N-acetyl-D-galactosamine)的抑制。顯微鏡觀察釀酒酵母細(xì)胞在鹽脅迫條件和青蛤凝集素CSL作用下的細(xì)胞狀態(tài)研究發(fā)現(xiàn),鹽脅迫和CSL分別與釀酒酵母細(xì)胞壁相互作用,均會(huì)導(dǎo)致釀酒酵母細(xì)胞的表面積發(fā)生改變,說(shuō)明鹽脅迫和CSL均會(huì)改變釀酒酵母細(xì)胞的細(xì)胞壁。對(duì)照組與CSL添加組兩組酵母菌內(nèi)的Ca2+含量未發(fā)生明顯變化,說(shuō)明CSL刺激酵母菌產(chǎn)乙醇可能與酵母細(xì)胞內(nèi)鈣離子通路相關(guān)性不強(qiáng)。通過(guò)電鏡掃描觀察對(duì)照組與CSL添加組的酵母形態(tài),發(fā)現(xiàn)對(duì)照組酵母細(xì)胞表面較圓潤(rùn)光滑,CSL添加組酵母細(xì)胞表面有較多贅附凸起。研究結(jié)果為CSL促進(jìn)酵母發(fā)酵能力的提高機(jī)理提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

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