汪 玲，陳朝紅

(南京總醫(yī)院，國(guó)家腎臟疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心，全軍腎臟病研究所，南京 210016)

近年來，基于斑馬魚模型的藥物篩選發(fā)展迅速。而在腎領(lǐng)域，利用斑馬魚進(jìn)行藥物實(shí)驗(yàn)的研究相對(duì)較少。隨著多種斑馬魚腎疾病模型的建立以及斑馬魚腎臟研究方法的完善，利用斑馬魚進(jìn)行腎藥物實(shí)驗(yàn)具有非常大的潛力。本文主要就斑馬魚在發(fā)現(xiàn)腎保護(hù)性藥物中的應(yīng)用作一綜述。

1 斑馬魚用于腎藥物發(fā)現(xiàn)的可行性分析

經(jīng)分析，利用斑馬魚動(dòng)物模型進(jìn)行腎保護(hù)性藥物篩查和藥理學(xué)研究是切實(shí)可行的，主要體現(xiàn)在三個(gè)方面：第一，斑馬魚腎結(jié)構(gòu)和功能與高等脊椎動(dòng)物高度保守；第二，轉(zhuǎn)基因技術(shù)和基因突變技術(shù)的發(fā)展促進(jìn)腎臟疾病模型的建立；第三，斑馬魚腎功能檢測(cè)方法學(xué)已建立并不斷被完善。

1.1 斑馬魚腎臟結(jié)構(gòu)特點(diǎn)

斑馬魚前腎與高等脊椎動(dòng)物具有高度保守性[1]。其前腎均起源于中胚層，由兩個(gè)腎單位組成，腎小球在發(fā)育至48 hpf(hours post fertilization)即可發(fā)揮血液濾過功能[1]。 96 hpf時(shí)超微結(jié)構(gòu)下可見與哺乳動(dòng)物相似的完整的濾過膜，掃描電鏡見前腎足細(xì)胞形態(tài)與人類相似[2]，足細(xì)胞伸出指狀足突沿著毛細(xì)血管腔包繞，與基底膜(glomerular basement membrane, GBM)和內(nèi)皮窗孔一起構(gòu)成腎小球?yàn)V過屏障[1]。腎小管在2 dpf(days post fertilization)時(shí)即發(fā)育成熟。與哺乳動(dòng)物類似，斑馬魚腎小管也是由不同節(jié)段組成，包括近曲小管(proximal convoluted tubule, PCT)、近端小管(proximal straight tubule, PST)、遠(yuǎn)端早期小管(distal early, DE)、遠(yuǎn)端晚期小管(distal late, DL)和前腎導(dǎo)管(pronephric duct, PD)[3]。近端小管有刷狀緣，細(xì)胞和細(xì)胞之間形成復(fù)雜連接并具有明顯的極性，分布著多種跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，發(fā)揮調(diào)節(jié)水鹽平衡的作用[1]。對(duì)高等動(dòng)物腎臟發(fā)育起重要調(diào)控作用的基因同樣在斑馬魚前腎發(fā)育過程中表達(dá)。如在斑馬魚足細(xì)胞系發(fā)育過程中， 其前體細(xì)胞表達(dá)與人相同的轉(zhuǎn)錄因子，包括wt1a,pax2a[1]，隨著足細(xì)胞分化，開始表達(dá)裂孔隔膜相關(guān)蛋白如Nephrin, Podocin等[4]。因此，斑馬魚和人類腎臟在結(jié)構(gòu)、功能還是分子組成等方面均高度保守，故利用斑馬魚模型研究人類的腎臟疾病、篩選腎保護(hù)性藥物是十分合適的。

1.2 斑馬魚轉(zhuǎn)基因和基因突變技術(shù)

斑馬魚疾病模型的建立依賴于轉(zhuǎn)基因和基因突變技術(shù)。近年來，以Tol2轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)為載體的轉(zhuǎn)基因技術(shù)被廣泛用于構(gòu)建轉(zhuǎn)基因模型。將Tol2轉(zhuǎn)座子供體質(zhì)粒和Tol2 mRNA共注射入斑馬魚受精卵內(nèi)，mRNA可翻譯成轉(zhuǎn)座酶，該酶可催化轉(zhuǎn)座子結(jié)構(gòu)的切除并引導(dǎo)質(zhì)粒中的外源基因與宿主基因組整合。該方法獲得轉(zhuǎn)基因斑馬魚的頻率可達(dá)到50%，且操作簡(jiǎn)單[5]。在此基礎(chǔ)上，利用Tol2轉(zhuǎn)座系統(tǒng)和multi-site gateway技術(shù)[6]構(gòu)建出斑馬魚組織特異性表達(dá)轉(zhuǎn)基因載體，并且商業(yè)化的Tol2試劑盒[7]以及便攜的在線Tol2-kit信息資源(http://tol2kit.genetics.utah.edu/index.php/Main_Page)使得Tol2轉(zhuǎn)座系統(tǒng)逐漸成為日常的基因工程工具。此外，誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)可允許轉(zhuǎn)基因在斑馬魚特定組織中表達(dá)，方法包括熱休克[8]、Cre-loxP[9], Gal4-UAS[10], Tet-on[11]及Tet-off[12]等。在誘導(dǎo)基因突變體系方面，反向遺傳學(xué)方法嗎啉代反義寡核苷酸(morpholinors，MOs)是人工合成的一段針對(duì)目的基因mRNA的反義核苷酸序列，MO顯微注射進(jìn)斑馬魚胚胎后可與目的基因mRNA結(jié)合，從而阻斷靶基因的翻譯過程或引起目的mRNA的異常剪接[13]。然而MOs的基因沉默效應(yīng)會(huì)隨著斑馬魚胚胎的發(fā)育逐漸被稀釋和降解[14]，且注射MOs會(huì)導(dǎo)致非特異性的p53激活從而誘導(dǎo)脫靶效應(yīng)[15]。因此MOs提供的是一個(gè)短暫的、功能性的基因沉默而非完全性的基因破壞。近年來，靶向基因編輯技術(shù)逐步發(fā)展，可快速建立永久的、穩(wěn)定的斑馬魚突變體系，包括鋅指核酸酶(zinc finger nucleases, ZFNs)技術(shù)[16]、轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物核酸酶(transcription activator-like effector nucleases, TALENs)技術(shù)[17]以及CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas9核酸酶技術(shù)[18]。尤其是CRISPR/Cas9系統(tǒng)的建立，極大地拓寬了基因編輯技術(shù)在各種生物學(xué)研究中的應(yīng)用。其原理為位點(diǎn)特異性的核酸酶能在DNA靶位點(diǎn)誘導(dǎo)DNA雙鏈斷裂(double strand breaks, DSBs)，誘發(fā)細(xì)胞內(nèi)源性修復(fù)機(jī)制，激活體內(nèi)非同源性末端連接(non-homologous end joining，NHEJ)修復(fù)或同源重組修復(fù)(homologous recombination, HR)，從而實(shí)現(xiàn)定點(diǎn)敲除、插入、堿基替換等[19]。ZFN和TALEN 是以二聚體的形式發(fā)揮作用，故其靶點(diǎn)設(shè)計(jì)更加復(fù)雜和繁瑣，制約了其應(yīng)用。CRISPR/Cas9系統(tǒng)是一種由單導(dǎo)向RNA(single guide RNA，sgRNA)介導(dǎo)的定向基因編輯技術(shù)，它由單體發(fā)揮作用，只需要一個(gè)靶點(diǎn)，更加簡(jiǎn)單、價(jià)廉、高效，很快替代了ZFN/TALEN技術(shù)。Hwang等[18]首次將針對(duì)靶基因特異性的不同濃度的gRNA和Cas9 mRNA共同顯微注射進(jìn)單細(xì)胞期斑馬魚受精卵內(nèi)，發(fā)現(xiàn)所有濃度的RNAs均能在特定基因位點(diǎn)內(nèi)誘導(dǎo)出明顯的插入或者堿基缺失的突變。Anderson等[20]將apol1-gRNA 和 Cas9共注射入斑馬魚胚胎后成功敲除apol1外顯子3，胚胎出現(xiàn)心包和卵黃囊水腫、蛋白漏出及廣泛的足突融合，這是第一次將CRISPR/Cas9應(yīng)用于斑馬魚腎領(lǐng)域的研究。隨著轉(zhuǎn)基因和誘導(dǎo)突變體系技術(shù)的飛速發(fā)展，大量的基因功能得到體內(nèi)證實(shí)，同時(shí)多種疾病模型逐漸建立，使得基于疾病模型的藥物篩選也逐步發(fā)展開來。

1.3 斑馬魚腎小球和腎小管功能檢測(cè)方法

腎小球?yàn)V過和腎小管重吸收是腎維持正常生理功能的兩個(gè)重要過程。檢測(cè)藥物對(duì)腎小球和/或腎小管功能的影響是判斷藥物療效的必要條件。隨著研究的深入，目前已建立起相對(duì)完善的檢測(cè)斑馬魚蛋白尿、濾過屏障完整性以及腎小管重吸收功能的方法。Tg(pod:GFP)轉(zhuǎn)基因斑馬魚在podocin啟動(dòng)子作用下足細(xì)胞被GFP標(biāo)記，可在顯微鏡下直接觀察和分離足細(xì)胞，GFP信號(hào)強(qiáng)弱還可以直接反應(yīng)足細(xì)胞的發(fā)育異?；驌p傷[2]。為了檢測(cè)腎小球裂孔隔膜的完整性，Hentschel等[21]誘導(dǎo)斑馬魚足細(xì)胞損傷后向胚胎心腔靜脈內(nèi)顯微注射70-kDa FITC標(biāo)記的右旋糖苷，觀察眼球血管內(nèi)和心臟最大熒光強(qiáng)度隨時(shí)間的變化并定量，發(fā)現(xiàn)胚胎其眼球血管內(nèi)及心臟的熒光強(qiáng)度均隨時(shí)間的增加而明顯減弱，表明經(jīng)腎小球漏出的FITC標(biāo)記的右旋糖苷增加。但是這種方法耗時(shí)、費(fèi)力，且不能應(yīng)用于成魚。Zhou等[22]建立的l-fabp: VDBP- EGFP轉(zhuǎn)基因斑馬魚不但能克服這個(gè)局限性，還可以準(zhǔn)確客觀地檢測(cè)蛋白尿的水平。VDBP-EGFP分子量為79.6×103，與哺乳動(dòng)物的白蛋白大小相近，在肝臟特異性脂肪酸結(jié)合蛋白(l-fabp)啟動(dòng)子的作用下，肝產(chǎn)生GFP標(biāo)記的VDBP，并分泌到血液循環(huán)中。雙轉(zhuǎn)基因斑馬魚pod:NTR-mCherry/l-fabp:VDBP-GFP在MTZ誘導(dǎo)下?lián)p傷足細(xì)胞，可見近端小管內(nèi)有GFP熒光累積，表明VDBP經(jīng)腎小球漏出并被腎小管重吸收。利用ELISA試劑盒檢測(cè)水中GFP含量可直接反應(yīng)蛋白尿水平。在腎小管方面，與哺乳動(dòng)物一樣，斑馬魚腎小管也可進(jìn)行HE、PAS染色以及銀染，且可通過觀察刷狀緣來直接區(qū)分近端和遠(yuǎn)端小管。此外，蓮花翅莢豌豆凝集素(lotus tetragonolobus lectin，LTL)、扁豆凝集素(dolichos bifows agglu-tinin，DBA)和肌球蛋白 VI免疫熒光染色可分別用來識(shí)別近端、遠(yuǎn)端小管和集合管。堿性磷酸酶ELF-97染色可用于標(biāo)記整個(gè)近端小管，包括PCT和PST[23]。TUNEL可用于檢測(cè)腎小管上皮細(xì)胞凋亡，PCNA或BrdU標(biāo)記可用于發(fā)現(xiàn)增殖細(xì)胞[23]。為分析腎小管的重吸收功能，McCampbell等[23-24]向斑馬魚腹腔內(nèi)注射熒光素標(biāo)記的小分子右旋糖苷，正常斑馬魚近端腎小管可重吸收染料，而慶大霉素誘導(dǎo)損傷的斑馬魚近端腎小管無染料累積，表明近端小管重吸收功能障礙。這些方法學(xué)的不斷建立和完善方便了人們?cè)趯淼难芯恐锌梢詼?zhǔn)確評(píng)價(jià)藥物療效。

2 足細(xì)胞損傷模型的建立及相關(guān)藥物的發(fā)現(xiàn)

足細(xì)胞損傷會(huì)導(dǎo)致足突融合，是許多腎小球疾病發(fā)生的早期表現(xiàn)。足細(xì)胞持續(xù)損傷會(huì)引起足細(xì)胞脫落，最終發(fā)生腎小球硬化。因此，尋找直接靶向作用于足細(xì)胞、阻止足突融合的藥物是治療抗腎小球疾病的重要途徑[25]。目前，已誘導(dǎo)出多種斑馬魚足細(xì)胞損傷的模型，并被廣泛用于足細(xì)胞損傷的機(jī)制研究。Kramer等[4]用nephrin和podocinMO分別阻斷斑馬魚前腎nephrin和podocin表達(dá)，導(dǎo)致足突融合和腎小球?yàn)V過屏障完整性被破壞。構(gòu)建可誘導(dǎo)的靶向足細(xì)胞損傷的轉(zhuǎn)基因斑馬魚Tg(pod:NTR-mCherry)是目前比較常用的足細(xì)胞損傷模型：在podocin啟動(dòng)子的驅(qū)動(dòng)下，足細(xì)胞特異性地表達(dá)細(xì)菌的硝基還原酶(NTR)與mCherry融合蛋白，加入甲硝唑(MTZ)誘導(dǎo)后，NTR可將MTZ轉(zhuǎn)化為毒性前體物質(zhì)從而導(dǎo)致足細(xì)胞凋亡而不損傷其他細(xì)胞[22]。最近，一種更新的利用UAS/GAL4系統(tǒng)構(gòu)建的雙轉(zhuǎn)基因斑馬魚Tg(pod:Gal4;UAS:NTR-mCherry)能明顯增加NTR-mCherry的表達(dá)，從而大大提高足細(xì)胞的損傷效率[26-27]。另外，傳統(tǒng)的化學(xué)藥物誘導(dǎo)方法如嘌呤霉素(PAN)、阿霉素處理同樣可用于誘導(dǎo)斑馬魚足細(xì)胞損傷[21，28]。然而，比較化學(xué)藥物誘導(dǎo)損傷和靶向轉(zhuǎn)基因技術(shù)誘導(dǎo)損傷：前者作用于全身；而轉(zhuǎn)基因斑馬魚的損傷作用直接靶向于足細(xì)胞，對(duì)其他細(xì)胞不受影響，是一個(gè)可誘導(dǎo)的、在時(shí)間和空間上可控制的足細(xì)胞損傷模型，其可靠性更高。

斑馬魚足細(xì)胞損傷模型的建立為篩選足細(xì)胞保護(hù)性藥物提供了理想的實(shí)驗(yàn)工具。足細(xì)胞與樹突狀的神經(jīng)元細(xì)胞相似，均是依靠動(dòng)態(tài)的肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)來維持結(jié)構(gòu)和功能。Li等[29]利用阿霉素誘導(dǎo)斑馬魚足細(xì)胞損傷，然后給予腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor, BAND)處理，發(fā)現(xiàn)BAND能明顯改善足突融合程度、維持nephrin和TrkB的表達(dá)、減輕腎小球?yàn)V過屏障損害。發(fā)動(dòng)蛋白(dynamin)作為一個(gè)GTP酶對(duì)維持足細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能具有重要作用[30-31]。發(fā)動(dòng)蛋白寡聚為更高級(jí)的結(jié)構(gòu)后可以促進(jìn)肌動(dòng)蛋白的聚合從而維持足細(xì)胞正常生理功能[32]。Schiffer等[33]用dym2 MO沉默斑馬魚dynamin2的基因表達(dá)，發(fā)現(xiàn)斑馬魚胚胎出現(xiàn)心包水腫、生存率下降、大分子蛋白的漏出以及足突廣泛融合，重新注入人和鼠Dyn1 mRNA以及增強(qiáng)其寡聚化作用的突變體Dyn1E/K可以避免上述表型的出現(xiàn)，表明dynamin寡聚化是維持足細(xì)胞功能所必需的，并可能是CKD治療的潛在靶點(diǎn)。已有研究表明，小分子藥物Bis-T-23可促進(jìn)肌動(dòng)蛋白依賴的dynamin的寡聚化[33]。Schiffer等[33]利用MO分別敲低斑馬魚prkce,cd2ap,inf2,nphs1基因表達(dá)后給予Bis-T-23處理，發(fā)現(xiàn)Bis-T-23可明顯降低其蛋白尿水平。

3 斑馬魚AKI模型的建立及相關(guān)的藥物發(fā)現(xiàn)

AKI是臨床常見病，占住院患者的2%～7%[34]，死亡率高達(dá)50%～80%[35]。嚴(yán)重的AKI通常需要腎臟替代治療。AKI還是進(jìn)展為CKD的危險(xiǎn)因素[36]。然而目前還沒有明確的治療策略可以阻止腎臟的損傷、促進(jìn)腎損傷的恢復(fù)或者降低損傷后腎纖維化的發(fā)生[37]，故需要發(fā)展可靠的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型來發(fā)現(xiàn)有效的治療藥物和生物標(biāo)志物。斑馬魚由于其腎小管結(jié)構(gòu)的保守性[3]和強(qiáng)大的再生能力[38]，使其成為發(fā)現(xiàn)AKI相關(guān)藥物的理想模型。Hentschel等[39]利用腎毒性藥物第一次成功地構(gòu)建了斑馬魚AKI模型：他在50 hpf或者72 hpf的斑馬魚胚胎心臟靜脈竇內(nèi)注射慶大霉素或者順鉑引起嚴(yán)重的腎小管重吸收功能障礙。此外，用鑷子機(jī)械阻斷前腎小管30 s左右，可立刻中斷尿液流動(dòng)并迅速引起腎小管上皮的囊性擴(kuò)張[40-41]。使用激光消除的方法可破壞斑馬魚腎小管特定靶區(qū)域，引起局部腎小管損傷[42]?；贜TR/MTZ損傷原理，構(gòu)建的Tg(enpep:Gal4;UAS:NTR-mCherry)轉(zhuǎn)基因斑馬魚可特異性地誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞損傷[43]。

利用斑馬魚AKI模型，研究者發(fā)現(xiàn)一些小分子藥物并對(duì)其功能進(jìn)行驗(yàn)證。de Groh等[44]用斑馬魚作為篩查工具發(fā)現(xiàn)組蛋白去乙?；敢种苿?histone deacetylase inhibitor，HDAC i)類似物4苯硫基丁酸(4PTBA)可以促進(jìn)腎臟前體細(xì)胞標(biāo)志物如lhx1a,pax2a和pax8的表達(dá)，其作用依賴于視黃酸(retinoic acid， RA)信號(hào)通路。隨后進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，4PTBA另一酯化類似物4甲硫基丁酸(m4PTB)可促進(jìn)慶大霉素誘導(dǎo)的斑馬魚腎小管的損傷后恢復(fù)，包括提高幼魚存活率以及促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞再生[45]。腎損傷分子1(kidney injury molecule 1，KIM-1)是一個(gè)特異的近端小管損傷標(biāo)志物[46]，其過表達(dá)可導(dǎo)致前腎急性腎小管損傷，持續(xù)表達(dá)kim-1可使中腎出現(xiàn)CKD樣改變，損傷機(jī)制與雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)信號(hào)通路激活有關(guān)。在過表達(dá)kim-1的斑馬魚中予以雷帕霉素處理，發(fā)現(xiàn)其心包水腫率以及死亡率明顯降低，并且雷帕霉素可降低Kim-1過表達(dá)小鼠的血肌酐水平、改善其腎纖維化，表明雷帕霉素可緩解KIM-1所誘導(dǎo)的腎小管損傷[47]。

4 多囊腎及其相關(guān)藥物的發(fā)現(xiàn)

多囊腎(polycystic kidney disease, PKD)，是一種常見的引起終末期腎疾病(end stage renal disease, ESRD)的遺傳性腎疾病。初級(jí)纖毛(primary cilia)缺陷是其重要發(fā)病機(jī)制。斑馬魚因其胚胎透明，便于在顯微鏡下直接觀察囊腫，且基因易操作，使得人們可以利用斑馬魚進(jìn)行大規(guī)模的基因篩查來發(fā)現(xiàn)與腎囊腫形成有關(guān)的突變基因。Sun等[48]采用大范圍反轉(zhuǎn)錄病毒插入突變篩查的方法發(fā)現(xiàn)了12個(gè)與斑馬魚多囊腎形成相關(guān)的突變基因，胚胎主要表現(xiàn)為囊腫形成、左右對(duì)稱改變以及身體軸異常彎曲。Huang等[49]利用MO沉默wnt5a基因表達(dá)后斑馬魚胚胎出現(xiàn)腎囊腫擴(kuò)張和尾巴彎曲，注射鼠wnt5amRNA后能挽救異常表型。poc1b是另一與纖毛發(fā)生相關(guān)的基因，敲低poc1b基因后斑馬魚前腎同樣出現(xiàn)多囊腎及視網(wǎng)膜病變[50]。bicc1基因也被證明與腎囊腫形成相關(guān)，當(dāng)阻斷其基因表達(dá)后也可導(dǎo)致斑馬魚胚胎出現(xiàn)腎囊腫、身體彎曲，而共注射鼠Bicc1 mRNA可挽救該表型[51]。

目前對(duì)于PKD尚缺乏有效的治療藥物。為尋找潛在的治療PKD藥物，Cao等[52]利用斑馬魚pkd2hi4166和ift172hi2211突變體作為PKD模型，以身體彎曲作為觀察指標(biāo)，篩選了115個(gè)化合物，最終發(fā)現(xiàn)組蛋白去乙?；敢种苿?trichostatin A和 valproic acid可以緩解身體彎曲的表型。trichostatin A是一個(gè)泛HDAC抑制劑，研究證明它可以抑制pkd2突變體胚胎的囊腫形成。val-proic acid 是 HDAC1 的特異性抑制劑，它可減慢Pkd1敲除小鼠腎囊腫進(jìn)展。此研究證明HDAC抑制劑可成為治療PKD的候選藥物。嘌呤受體信號(hào)通路是PKD發(fā)生的潛在機(jī)制之一。P2X7嘌呤受體在高濃度ATP激活下可促進(jìn)囊腫的形成與擴(kuò)大[53]。Chang等[54]將pkd2-MO斑馬魚分別暴露于P2X7受體拮抗劑(OxATP)和激動(dòng)劑(BzATP)，結(jié)果顯示與BzATP相比，暴露于OxATP能明顯抑制囊腫的形成，另一P2X7受體特異性拮抗劑A-438079同樣證實(shí)該結(jié)果，證明P2X7拮抗劑可能是治療ADPKD一個(gè)有效藥物。cAMP水平增高被證實(shí)與PKD發(fā)病相關(guān)，磷酸二酯酶(phosphodiesterases, PDEs)可水解cAMP，Sussman等[55]發(fā)現(xiàn)當(dāng)敲除斑馬魚pde1a基因時(shí)可導(dǎo)致前腎囊腫和腦積水，而給予人PDE1AmRNA或蛋白酶A(protein kinase A, PKA)抑制劑時(shí)表型好轉(zhuǎn)，從而證明PDE1A可能是治療PKD一個(gè)可靠的靶點(diǎn)。

5 小結(jié)

斑馬魚提供了一個(gè)簡(jiǎn)單、價(jià)廉、高效的藥物篩選平臺(tái)，盡管已有一些腎臟保護(hù)性藥物被發(fā)現(xiàn)和驗(yàn)證，但是目前在腎臟領(lǐng)域應(yīng)用還相對(duì)較少，具有極大的潛力。利用斑馬魚研究人員可以進(jìn)行藥物靶點(diǎn)的識(shí)別和驗(yàn)證、發(fā)現(xiàn)藥物主要成分、研究結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系以及藥物安全性和毒性評(píng)估等。斑馬魚用于藥物篩選具有其他模式動(dòng)物和體外細(xì)胞培養(yǎng)不可替代的優(yōu)勢(shì)，已有的研究已經(jīng)證明利用斑馬魚進(jìn)行腎方面的藥物實(shí)驗(yàn)是切實(shí)可行的，下一步要做的是如何構(gòu)建更多的疾病模型，尋找更多有益于控制腎疾病的新藥物。