趙 翠 趙福廣 黃利亞

(吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，長春 130118)

1 前言

HP是一種螺旋形，寄居于人胃黏膜上的一種革蘭氏陰性微需氧菌，對生長條件要求十分苛刻。HP不依賴組織入侵的方式定植于胃上皮黏膜，這在很大程度上有利于逃避宿主免疫機制，同時，HP有整合環(huán)境DNA的能力，這種能力增加了HP在變化的環(huán)境中得以生存的機會[1]。HP感染后的臨床表現(xiàn)多樣性提示了HP致病機制的復(fù)雜性。在與疾病的相關(guān)性方面，HP是慢性胃炎、十二指腸潰瘍等的主要致病菌，且與胃癌、胃黏膜相關(guān)淋巴組織(Mucosa associated lymphoid tissue,MATL)惡性淋巴瘤的發(fā)生有密切聯(lián)系。最近的研究表明[2]，HP與神經(jīng)退行性疾病的關(guān)聯(lián)性呈上升趨勢，此外在多發(fā)性硬化患者中HP檢出率極低，推測HP可能是發(fā)展多發(fā)性硬化的保護因子[3]。在對HP疫苗的探究過程中，圍繞全菌體抗原進行的攻毒試驗獲得了較為理想的免疫保護率，但因其成分復(fù)雜，安全性差等缺點，將其作為疫苗應(yīng)用于人體，還需進一步研究。因此，研制一種經(jīng)濟、高效、安全的治療性疫苗是防治HP感染的有效途徑，而篩選高效抗原又是疫苗研制工作的重中之重，本文就HP疫苗的候選抗原的研究近況及發(fā)展前景作一綜述。

2 抗原研究進展

2.1尿素酶 尿素酶(Urase)位于細菌表面，包括UreA和UreB兩個結(jié)構(gòu)基因，其豐富的蛋白含量約占全菌蛋白的5%～10%。在HP的致病機制方面，尿素酶主要通過水解尿素產(chǎn)生氨和二氧化碳，調(diào)節(jié)細菌細胞周圍的pH值，是HP在高強度胃酸中得以生存和定植的關(guān)鍵[4]，同時尿素酶是HP重要的定植因子和毒力因子，因此，“無酸無潰瘍”的傳統(tǒng)觀點已經(jīng)被打破。

目前，對尿素酶的研究比較廣泛，秦玉紅等[5]將純化的rUreB蛋白加弗氏佐劑經(jīng)腹腔注射免疫小鼠，可誘導(dǎo)產(chǎn)生高水平的特異性抗體，測得小鼠血清中的IgG抗體水平較對照組相比顯著增加，同樣的結(jié)果體現(xiàn)在Zhang等[6]的研究中。隨著研究的深入，研究者們發(fā)現(xiàn)將尿素酶和其他能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生免疫保護作用的抗原聯(lián)合制成二價或多價疫苗，可能會進一步增強疫苗的免疫效果。林煥建等[7]通過UreB和過氧化氫酶加免疫佐劑CT制成二價口服疫苗，獲得了近83.4%的免疫保護率，與單價疫苗組即過氧化氫酶加CT組的41.7%和UreB加CT組的54.2%相比獲得了較為理想的免疫效果，且二價疫苗組中小鼠胃黏膜中HP的定植密度也明顯降低。更多可喜的研究結(jié)果體現(xiàn)在Zhou等[8,9]的研究中。

雖然不同地區(qū)的HP菌株具有多樣性和易變異等特點，但不同HP菌株間UreB的核酸序列具有高度的保守性和同源性，且分子量大，特異性強，能有效地誘導(dǎo)機體產(chǎn)生穩(wěn)定的免疫保護作用，與UreA相比，UreB具有更好的免疫保護作用[10]。因此，UreB被列為最有前景的候選抗原之一。

2.2空泡毒素和細胞毒素

2.2.1空泡毒素 空泡毒素相關(guān)基因A (Vacuolat-ing cytotoxin gen A，VacA)編碼的VacA蛋白是HP中重要的毒力因子和致病因子。有研究表明，VacA和CagA基因的可變序列可能是HP菌株多樣性和易變異的主要原因。目前，根據(jù)VacA和CagA的表達情況，可將HP分為兩類：Ⅰ型(CagA+VacA+)和Ⅱ型(CagA-VacA-)。

VacA是一種約含有860個氨基酸殘基的多功能蛋白，該毒素通過在靶細胞膜上形成小孔，導(dǎo)致細胞中離子和小分子物質(zhì)泄漏。VacA最重要的生物學(xué)作用是誘導(dǎo)宿主細胞的細胞膜孔隙與空泡的形成，誘導(dǎo)上皮細胞空泡樣損傷[11]。Chiozzi等[12]研究表明：VacA可誘發(fā)炎癥反應(yīng)，而VacA與氯化銨聯(lián)合作用，在誘發(fā)炎癥反應(yīng)的同時，還可使人胃上皮細胞加速凋亡。Hasanzadeh等[13]將VacA的抗原區(qū)克隆到載體PET32a中，并在大腸桿菌BL21中表達目的蛋白，結(jié)果表明VacA蛋白不但具有抗原性，且重組VacA蛋白能夠與HP患者血清中IgG特異性識別。由以上結(jié)果不難看出VacA作為HP疫苗候選抗原的潛力，并推測VacA可以用于HP診斷試劑和HP疫苗的發(fā)展，但VacA單獨作為抗原對小鼠進行攻毒試驗并評價免疫效果的研究很少，一般是與細胞毒素相關(guān)基因A或其他抗原聯(lián)合應(yīng)用。

2.2.2細胞毒素 細胞毒素相關(guān)基因A(Cytotoxin-associated gen A，CagA)的表達產(chǎn)物CagA蛋白是一種免疫原性較強，存在于菌體表面的外膜蛋白。CagA基因5′端高度保守，不同毒力菌株之間的同源性高達80%以上，可以作為候選抗原刺激機體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，與此相反的CagA基因3′端相對多變，含有不同數(shù)量的重復(fù)序列。CagA是HP中能增強胃炎、消化性潰瘍的一種重要的毒力因子，還可能是胃上皮細胞癌變的關(guān)鍵因素[14]。據(jù)早些年研究表明[15]，CagA陽性菌株常見于炎癥較為嚴重或胃癌患者中，這些患者胃上皮細胞中的AP-1和NFKB等轉(zhuǎn)錄因子活性升高，其激活可導(dǎo)致多種炎癥因子如IFN-γ、IL-2等的表達，從而加劇胃黏膜損傷。再者，T細胞的FasL基因啟動子區(qū)域有2個NF-κB和3個AP-1結(jié)合位點，CagA可能通過激活轉(zhuǎn)錄因子增強T細胞FasL基因的表達，損害Fas陽性上皮細胞，促進T細胞間“相互殘殺”。因此以上研究并不支持CagA用于候選抗原的應(yīng)用。但隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)CagA基因完整的DNA序列因其含有非必需表位和較高分子質(zhì)量，不易克隆和表達。因此，研究者們選擇將CagA部分基因序列與其他抗原聯(lián)合，制備二價甚至多價疫苗，并在動物模型中取得了較為可喜的成果，同時開啟了由HP單價疫苗轉(zhuǎn)向多價疫苗的時代[16,17]。

近些年來，對VacA和CagA的研究僅限于動物模型，鮮有VacA和CagA疫苗進入臨床試驗的相關(guān)報道，但對二者的研究熱度并沒有因此而減少。由于多抗原融合疫苗參與發(fā)病的不同階段，因而獲得了較為理想的免疫效果，為HP多價疫苗的發(fā)展提供一定的理論支持，HP多價疫苗可能是攻克HP感染道路上的成功一步。

2.3黏附素 黏附素(Helicobacter pylori adhesin A，Hpa A)是由Hpa A基因編碼的脂蛋白，不同HP菌株間高度保守，迄今為止，并沒有發(fā)現(xiàn)Hpa A陰性菌株。Hpa A介導(dǎo)HP的黏附與定植，具有較好的免疫原性和免疫反應(yīng)性，但發(fā)揮免疫保護作用的關(guān)鍵表位和分子機制尚不明確。有研究表明，Hpa A由胞內(nèi)區(qū)、跨膜區(qū)、胞外區(qū)三個部分組成，其中跨膜區(qū)和胞外區(qū)發(fā)揮免疫保護作用[18]，因此，F(xiàn)lach等[19]利用截短形式的HpaA聯(lián)合UreB免疫C57BL/6小鼠，與對照組全長的Hpa A聯(lián)合UreB相比較，HP特異性抗體IgG的滴度顯著升高。近期，Tobias等[20]構(gòu)建重組無毒的霍亂弧菌，將Hpa A和產(chǎn)腸毒素大腸桿菌定植因子(CFA/I)共表達(VC-HpaA-CFA/I)，發(fā)現(xiàn)與VC-HpaA相比，Hpa A水平在重組菌株VC-HpaA-CFA/I中的表達量更高，理論上，此種疫苗可以對抗包括大腸桿菌、幽門螺旋桿菌、霍亂弧菌在內(nèi)的三種病原體，可能成為抗HP感染的潛在候選疫苗，為今后研制對抗多種病原體疫苗提供更多的理論支持，但此疫苗的安全性有待進一步評估。

2.4過氧化氫酶 過氧化氫酶(Catalase，KatA)是一種高度保守，暴露于菌體表面的蛋白酶，約占HP菌體蛋白的1.5%左右。在功能上KatA與Urase似乎有著異曲同工之妙，KatA通過將有毒的代謝產(chǎn)物轉(zhuǎn)化成水，保證代謝平衡的同時，保護HP免受中性粒細胞殺傷，是HP逃避宿主免疫的重要組成部分。同時KatA在pH<3的環(huán)境中仍可保持活性，是HP在胃黏膜極酸環(huán)境中得以定植和生存的關(guān)鍵。近些年，關(guān)于KatA表位疫苗的研究較多，并證實含有較少氨基酸序列的KatA表位疫苗等同甚至優(yōu)于KatA全序列疫苗[21,22]。隨著研究的深入，KatA抗原與疾病的關(guān)聯(lián)程度備受關(guān)注，尤其是在胃癌中。有研究表明[23]，較高的KatA抗體滴度在一定程度上可以預(yù)防胃癌的發(fā)生，并可以作為胃癌篩選的生物標志物。經(jīng)查閱文獻可以看出，在2010年甚至更早以前涌現(xiàn)了大量關(guān)于證實KatA免疫原性的研究[24,25]，為KatA作為HP疫苗候選抗原、KatA聯(lián)合其他抗原、KatA表位疫苗的發(fā)展提供理論依據(jù)。雖然表位疫苗的表位識別和正確組裝技術(shù)尚不成熟，表位之間的相互影響仍需探索，但KatA表位疫苗已經(jīng)展現(xiàn)了不俗的發(fā)展前景，這為探究HP疫苗的大方向奠定基礎(chǔ)。

2.5膜炎性蛋白 膜炎性蛋白(Outer inflammatory protrin,OipA)由hopH基因編碼，相對分子質(zhì)量約34 kD。關(guān)于OipA與臨床疾病的關(guān)系尚無統(tǒng)一定論，有研究發(fā)現(xiàn)，在胃潰瘍患者中OipA+HP的總檢出率高達100%，顯著高于胃炎患者26.2%的檢出率。相似的結(jié)果也體現(xiàn)在Markovska等[26]的研究中，OipA幾乎表達于從消化性潰瘍患者分離的所有菌株中(97%)，在胃炎患者中分離的菌株中較少(66%)。但在最近的研究卻展現(xiàn)相反的結(jié)果，OipA與胃部疾病無關(guān)聯(lián)，不能作為預(yù)測診斷胃腸疾病的標志[27]。

目前，對于OipA能否直接影響促炎性信號還存在爭議，有研究表明，功能性的hopH基因失活導(dǎo)致IL-8分泌減少50%左右，因此功能性的OipA在IL-8的誘導(dǎo)中起著重要作用。與此相反，在Dossumbekova等[28]的研究中發(fā)現(xiàn)hopH基因表達與IL-8分泌并沒有相關(guān)性。出現(xiàn)上述兩種結(jié)果的原因可能是菌種的區(qū)域性差異，因此，不同地理區(qū)域的臨床報告預(yù)測毒力因子與疾病的發(fā)生結(jié)果是有爭議的。

2.6十二指腸潰瘍促進因子 DupA(Duodenal ulcer promoting gene，DupA)被稱為十二指腸潰瘍促進因子，因常見于十二指腸潰瘍患者中而得名。DupA是近些年研究的熱門，因此，圍繞DupA的相關(guān)研究并不完善，研究結(jié)果不盡相同甚至相反。有研究表明[29]，不同區(qū)域DupA陽性檢出率不同，且與臨床疾病無顯著相關(guān)性，該研究還發(fā)現(xiàn)，DupA的存在與否與HP的其他毒力因子無關(guān)。同年Shiota等[30]表明，DupA與十二指腸潰瘍密切相關(guān)，但與胃癌的關(guān)系尚不明確。近年來Souod等[27]通過研究DupA、OipA與胃部疾病的關(guān)系中指出，DupA可以作為預(yù)測十二指腸潰瘍的標志物和胃癌的抑制因子，同時發(fā)現(xiàn)HP中的一些毒力因子并不單獨存在，而是與其他毒力因子聯(lián)合形成“協(xié)同活性”，此研究結(jié)果與Shiota等[30]完全相反。最近，在探索HP中毒力因子與胃部疾病的關(guān)聯(lián)性發(fā)現(xiàn)，HP中的毒力因子之間存在關(guān)聯(lián)性(VacA、CagA、DupA、OipA)，這種關(guān)聯(lián)性與胃部疾病聯(lián)系緊密，特別是胃炎[31]。以上種種結(jié)果不難看出，雖然圍繞DupA的相關(guān)研究日漸廣泛，但關(guān)于DupA與臨床疾病的關(guān)聯(lián)性尚無統(tǒng)一定論，且目前并沒有關(guān)于DupA作為候選抗原制成HP疫苗的相關(guān)報道。

2.7脂多糖 脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)是重要的毒力因子，被認為是引起黏膜炎癥反應(yīng)的一種強效內(nèi)毒素，介導(dǎo)多種細胞因子和趨化因子的釋放，從而誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的發(fā)生[32]。LPS主要表達LewisX和LewisY抗原決定簇，HP患者產(chǎn)生Lewis抗原決定簇抗體并通過自身免疫反應(yīng)造成胃黏膜損傷和潰瘍創(chuàng)面形成[33]。此外LPS促進Th1型免疫應(yīng)答反應(yīng)，并在受試小鼠體內(nèi)檢測到細胞因子IFN-γ增加，這可能是消除HP感染的關(guān)鍵[34]。在對此種抗原的學(xué)習(xí)和查閱文獻中發(fā)現(xiàn)，LPS的研究現(xiàn)狀處于探究其生物活性，評價免疫原性階段，且對其引起免疫應(yīng)答的類型處于研究探索中，因此，尚且沒有LPS作為抗原或與其他抗原聯(lián)合制備HP疫苗的相關(guān)報道。

3 前景展望

除上述幾種抗原外，中性粒細胞激活蛋白(Nap)[35,36]、熱休克蛋白(Hsp)[37,38]都有作為候選抗原的相關(guān)報道，在這里不再一一概述。就HP疫苗的研究現(xiàn)狀而言，HP疫苗仍處于實驗階段，現(xiàn)階段的研究成果尚不能完全清除體內(nèi)感染和阻斷HP傳播，且保護率不高的問題在國內(nèi)外一直未有突破。目前為止，尚且沒有HP疫苗進入臨床的相關(guān)報道，因此，現(xiàn)階段的治療方式仍以抗生素治療為主，但抗生素耐藥性(克拉霉素)成為應(yīng)用抗生素治療失敗的主要原因[39]，基于目前理論研究成果，推薦使用益生菌[40,41]和中藥制劑作為輔助治療。

HP疫苗的研究尚存在許多問題，但取得的成果不容忽視，Naz等[42]基于反向疫苗學(xué)方法預(yù)測HP疫苗的潛在候選抗原，并預(yù)測VacA、BabA、Hpa A等是首要候選抗原?，F(xiàn)如今，大部分的臨床研究已經(jīng)運用重組尿素酶作為抗原?；蛟S研究不同抗原組合的多價疫苗、篩選高效抗原并增加抗原的表達量、探索HP表位疫苗中表位結(jié)合的新型方式是HP疫苗未來的發(fā)展方向。隨著生物學(xué)、信息科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，HP疫苗的研制必將取得成功。

參考文獻：

[1] Hanada K,Yamaoka Y.Genetic battle between Helicobacter pylori,and humans.The mechanism underlying homologous recombination in bacteria,which can infect human cells[J].Microbes Infect,2014,16(10):833-839.

[2] Diaconu S,Predescu A,Moldoveanu A,etal.Helicobacter pylori infection:old and new[J].J Med Life,2017,10(2):112-117.

[3] Jaruvongvanich V,Sanguankeo A,Jaruvongvanich S,etal.Association between Helicobacter pylori infection and multiple sclerosis:A systematic review and meta-analysis[J].Mult Scler Relat Dis,2016,7(5):92-97.

[4] Wang B,Pan X,Wang H,etal.Immunological response of recombinant H.pylori multi-epitope vaccine with different vaccination strategies[J].Int J Clin Exp Pathol,2014,7(10):6559-6566.

[5] 秦玉紅，劉昆梅，廖國玲，等.幽門螺旋桿菌重組尿素酶B亞基的純化及其免疫學(xué)性質(zhì)的研究[J].中國生物工程雜志,2014,34(12):23-29.

Qin HY,Liu KM,Liao GL,etal.Purification of recombinant urease B-subunit from Helicobacter pylori and its immunological properties[J].China Biotechnol,2014,34(12): 23-29.

[6] Zhang HX,Qiu YY,Zhao YH,etal.Immunogenicity of oral vaccination with Lactococcus lactis derived vaccine candidate antigen (UreB) of Helicobacter pylori fused with the human interleukin 2 as adjuvant[J].Mol Cell Probe,2014,28(1):25-30.

[7] 林煥建，楊 勤，李 菁，等.過氧化氫酶和尿素酶B亞單位二價疫苗預(yù)防小鼠幽門螺桿菌感染[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2008,28(3):436-437.

Lin HJ,Yang Q ,Li Q ,etal.Prevention of Helicobacter pylori infection in mice by bivalent vaccine of catalase and urease B-subunit [J].J Southern Med Uni,2008,28(3): 436-437.

[8] Zhou Z,Dong H,Huang Y,etal.Recombinant Bacillus subtilis spores expressing cholera toxin B subunit and Helicobacter pylori urease B confer protection against H.pylori in mice[J].J Med Microbiol,2017,66 (1):83-89.

[9] Zhou Z,Gong S,Li XM,etal.Expression of Helicobacter pylori urease B on the surface of Bacillus subtilis spores[J].J Med Microbiol,2015,64(1):104-110.

[10] Corthésy-Theulaz I,Porta N,Glauser M,etal.Oral immunization with Helicobacter pylori,urease B subunit as a treatment against Helicobacter,infection in mice [J].Gastroenterology,1995,109(1):115-121.

[11] Junaid M,Linn AK,Javadi MB,etal.Vacuolating cytotoxin A (VacA)-A multi-talented pore-forming toxin from Helicobacter pylori[J].Toxicon,2016,118:27-35.

[12] Chiozzi V,Mazzini G,Oldani A,etal.Relationship between Vac A toxin and ammonia in Helicobacter pylori-induced apoptosis in human gastric epithelial cells[J].J Physiol Pharmacol,2009,60(3):23-30.

[13] Hasanzadeh L,Ghaznavirad E,Soufian S,etal.Expression and antigenic evaluation of VacA antigenic fragment of helicobacter pylori[J].Iran J Basic Med Sci,2013,16(7):835-840.

[14] Markus S,Paolo R,Rino R,etal.Helicobacter pyloriCagA:from pathogenic mechanisms to its use as an anti-cancer vaccine[J].Front Immunol,2013,4(10):328-329.

[15] Matsui K,Fine A,Zhu B,etal.Identification of two NF-kappa B sites in mouse CD95 ligand (Fas ligand) promoter:Functional analysis in T cell hybridoma[J].J Immunol,1998,161(7):3469-3473.

[16] Liu KY,Shi Y,Luo P,etal.Therapeutic efficacy of oral immunization with attenuated Salmonella typhimurium,expressing Helicobacter pylori,CagA,VacA and UreB fusion proteins in mice model[J].Vaccine,2011,29(38):6679-6685.

[17] Meza B,Ascencio F,Sierrabeltrán AP,etal.A novel design of a multi-antigenic,multistage and multi-epitope vaccine against Helicobacter pylori:An in silico approach[J].Infect Genet Evol,2017,49(4):309-317.

[18] 郭 玲,章金勇,劉 東,等.幽門螺桿菌黏附素HpaA重組蛋白的表達、純化及晶體生長[J].免疫學(xué)雜志,2015,31(11):986-990.

Guo L,Zhang JY,Liu D ,etal.Expression,purification and crystal growth of Helicobacter pylori adhesin HpaA recombinant protein[J].Immunol J , 2015,31(11): 986-990.

[19] Flach CF,Svensson N,Blomquist M,etal.A truncated form of Hpa A is a promising antigen for use in a vaccine against Helicobacter pylori[J].Vaccine,2011,29(6):1235-1241.

[20] Tobias J,Lebens M,Wai SN,etal.Surface expression of Helicobacter pylori Hpa A adhesion antigen on Vibrio cholerae,enhanced by co-expressed enterotoxigenic Escherichia coli fimbrial antigens[J].Microb Pathogenesis,2017,105:177-184.

[21] Ghasemian SH,Faghri J,Moghim S,etal.Production of IFN-γ and IL-4 against intact catalase and constructed catalase epitopes of helicobacter pylori from T-cells[J].Jundishapur J Microb,2015,8(12):24697-24704.

[22] Rashidi N,Moghim S,Fagheri J,etal.Catalase epitopes vaccine design for Helicobacter pylori:A bioinformatics approach[J].Afr J Biotechnol,2011,10(44):8895-8901.

[23] Miyashita M,Joh T,Watanabe K,etal.Immune responses in mice to intranasal and intracutaneous administration of a DNA vaccine encoding Helicobacter pylori-catalase[J].Vaccine,2002,20(17):2336-2342.

[24] Radcliff FJ,Hazell SL,Kolesnikow T,etal.Catalase,a novel antigen for Helicobacter pylori vaccination[J].Infect Immunity,1997,65(11):4668.

[25] Bing Z,Li HL,Fan Q,etal.Serum Helicobacter pylori KatA and AhpC antibodies as novel biomarkers for gastric cancer[J].World J Gastroentero,2016,22(21):5060-5067.

[26] Markovska R,Boyanova L,Yordanov D,etal.Helicobacter pylori oipA,genetic diversity and its associations with both disease and cagA,vacA,s,m,and ialleles among Bulgarian patients[J].Diangn Micr Infec Dis,2011,71(4):335-340.

[27] Souod N,Sarshar M,Dabiri H,etal.The study of the oipA and dupA genes in Helicobacter pylori strains and their relationship with different gastroduodenal diseases[J].Gastroenterol Hepatol Bed Bench,2015,8(1):47-53.

[28] Dossumbekova A，Prinz C,Mages J,etal.Helicobacter pylori HopH (OipA) and bacterial pathogenicity:genetic and functional genomic analysis of hoph gene polymorphisms[J].J Infect Dis，2006,194(10):1346-1355.

[29] Hussein NR.The association of dupA and Helicobacter pylori-related gastroduodenal diseases[J].Eur J Clin Microbiol,2010,29(7):817-821.

[30] Shiota S,Matsunari O,Watada M,etal.Systematic review and meta-analysis:the relationship between the Helicobacter pylori dupA gene and clinical outcomes[J].Gut Pathogens,2010,2(1):13-19.

[31] Sallas ML,Melchiades JR,Zabaglia LM,etal.Prevalence of Helicobacter pylori vacA,cagA,dupA and oipA Genotypes in Patients with Gastric Disease[J].Adv Microbiol,2017,7(7)：1-9.

[32] Slomiany BL,Slomiany A.Role of LPS-elicited signaling in triggering gastric mucosal inflammatory responses to H.pylori:modulatory effect of ghrelin[J].Inflammpharmacology,2017,25(4):415-429.

[33] Ramakrishna YG,Savithri K,Kist M,etal.Aegle marmelos fruit extract attenuates Helicobacter pylori Lipopolysaccharide induced oxidative stress in Sprague Dawley rats[J].BMC Complement Altern Med,2015,15(1):375-385.

[34] Davoud E,Mohabati MA,Hatef SA,etal.Bioactivity and immunological evaluation of LPS from different serotypes of Helicobacter pylori[J].Iran J Microbiol,2013,5(2):142-146.

[35] Shuai Z,Huang Y,Liang B,etal.Systemic and mucosal pre-administration of recombinant Helicobacter pylori neutrophil-activating protein prevents ovalbumin-induced allergic asthma in mice[J].Fems Microbiol Lett,2017,364(2):288-295.

[36] Dong H,Huang Y,Yao S,etal.The recombinant fusion protein of cholera toxin B and neutrophil-activating protein expressed on Bacillus subtilis spore surface suppresses allergic inflammation in mice[J].Appl Microbiol Biot,2017,101(3):1-11.

[37] Chionh YT,Arulmuruganar A,Venditti E,etal.Heat shock protein complex vaccination induces protection against Helicobacter pylori without exogenous adjuvant[J].Vaccine,2014,32(20):2350-2358.

[38] 趙慧琳,季曉飛,張艷麗,等.分子伴侶幽門螺桿菌Hsp60與UreB的相互作用分析[J].中國病原生物學(xué)雜志,2016,11(11):977-981.

Zhao HL,Ji XF,Zhang YL,etal.Analysis of interaction between Hsp60 and UreB of Helicobacter pylori[J].J Pathogen Biol,2016,11(11): 977-981.

[39] Daryani NE,Taher M,Shirzad S.Helicobacter pylori infection:a review[J].Iran J Clin Infect Dis,2011,6(1):56-64.

[40] Zhang R,Duan G,Shi Q,etal.Construction of a recombinant Lactococcus lactis strain expressing a fusion protein of Omp22 and Hpa A from Helicobacter pylori for oral vaccine development[J].Biotechnol Lett,2016,38(11):1-6.

[41] Ayala G，Escobedo-Hinojosa WI，Cf CH，etal.Exploring alternative treatments for Helicobacter pylori infection[J].World J Gastroentero，2014，20(6):1450-1469.

[42] Naz A,Awan FM,Obaid A,etal.Identification of putative vaccine candidates against Helicobacter pylori exploiting exoproteome and secretome:a reverse vaccinology based approach[J].Infect Genet Evol,2015,32(6):280-291.