衛(wèi)瑞陽 白杰 徐彬 席燕燕 王琳燚 王改利付趁 魏鳳仙 李紹鈺

（1. 河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，鄭州 450002；2. 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，鄭州 450002；3. 河南省飼料與養(yǎng)殖環(huán)境控制工程技術(shù)研究中心 河南省畜禽繁育與營養(yǎng)調(diào)控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，鄭州 450002）

凝集素（Lectin）的生物學(xué)功能多樣，是一種可以與糖發(fā)生特定的和可逆結(jié)合的蛋白質(zhì)［1］。目前大量研究表明，Lectin能起到抗菌和消炎的作用［2-4］，并且Lectin和抗菌肽都被定性為免疫因子［5］。Lectin的數(shù)量龐大，結(jié)構(gòu)多樣，被發(fā)現(xiàn)在許多生物體內(nèi)，包括微生物，植物和動物［6］。根據(jù)其結(jié)構(gòu)和功能特征可以把凝集素分為R 型、L 型、P 型、C 型、I 型和 S 型等多種類型［7］。

C型凝集素（C-type lectin）代表一個識別碳水化合物配體依賴于鈣離子（Ca2+）參與的糖原結(jié)合蛋白家族，含有一個或多個一級結(jié)構(gòu)和二級結(jié)構(gòu)同源的碳水化合物識別結(jié)構(gòu)域［8-9］，是內(nèi)吞作用的受體，主要表達(dá)在巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞。C-type lectin能識別大量的糖基質(zhì)配體，其在細(xì)菌，真菌，病毒感染的細(xì)胞，和寄生蟲里都有發(fā)現(xiàn)［10］。同時C-type lectin在免疫方面也發(fā)揮重要的作用，如C-type lectin能識別多種致病菌并且誘導(dǎo)細(xì)胞因子的分泌［11］。目前，已經(jīng)有 1 000 多個C-type lectin被相繼鑒定。

家蠅（Musca domestica L.）普遍存在并且攜帶至少100種人類和動物疾?。?2］，然而他們能快速繁殖生長且自身不會引起疾病感染，所以家蠅必定具有完善而高效的免疫防御機(jī)制，是人們研究天然抗炎物質(zhì)的重要資源。家蠅Lsa（NCBI序列號：XP_00-5178145）（lectin subunit alpha）蛋白，有181個氨基酸，其中29到146位編碼C-type lectin（CTL）/C-type lectin-like（CTLD）。然而，目前國內(nèi)外對于家蠅Lsa蛋白抗炎活性及其細(xì)胞通路的研究還較少。

試驗(yàn)旨在研究家蠅Lsa蛋白在金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）刺激下的抗炎活性。首先擴(kuò)增Lsa基因，構(gòu)建在pLEX載體上，制備成慢病毒后，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染到RAW264.7細(xì)胞中，并通過轉(zhuǎn)染PLEX載體作為陰性對照，通過S. aureus刺激細(xì)胞后，收集不同時間點(diǎn)細(xì)胞及其上清，對不同時間點(diǎn)細(xì)胞提取RNA，反轉(zhuǎn)錄后用實(shí)時定量PCR的方法檢測 TNF-α、IL-1β、NF-κB-1、NF-κB-2 的 mRNA 相對轉(zhuǎn)錄水平，通過ELISA檢測細(xì)胞上清中的TNF-α和IL-1β，通過與陰性對照細(xì)胞相比，分析家蠅Lsa蛋白的抗炎活性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 載體、菌種及細(xì)胞 家蠅幼蟲由河南省疾病控制中心提供；pMD20-T 載體購自 TaKaRa 公司；pLEX慢病毒表達(dá)載體及其包裝質(zhì)粒（psPAX2）和包膜質(zhì)粒（pMD2.G）購自 GE公司；DH5α 感受態(tài)細(xì)胞購自北京天根公司；用于生產(chǎn)慢病毒的293T細(xì)胞和RAW264.7細(xì)胞購自ATCC公司；ELISA試劑盒購自達(dá)科為公司；S. aureus ATCC 25923購自ATCC公司。

1.1.2 主要試劑和培養(yǎng)基 限制酶Xho I和Age I購自Thermo公司，Trizol 試劑和 LipofectamineTM2000試劑購自 Invitrogen 公司，聚凝胺（Polybrene）和嘌呤霉素（Puromycin）試劑購自SIGMA公司，DMEM培養(yǎng)基和Opti-MEM?培養(yǎng)基購自Gibco公司，胎牛血清購自SeraPro公司，HA 抗體購自北京天根公司，熒光二抗購自 LI-COR 公司，SYBR Premix Ex Taq購自TaKaRa 公司，其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1 RNA提取及cDNA合成 家蠅三齡幼蟲充分研磨后，參照Invitrogen公司的TRIzol?Reagent（Cat.No：15596-018）說明書并做適當(dāng)改進(jìn)操作。隨后取2 μL進(jìn)行1%凝膠電泳檢測RNA的完整性，隨后用核酸定量儀分別測定樣品在260 nm，280 nm波長上的光密度，初步估算RNA的純度和濃度。檢測結(jié)果良好后，取1 μg 總RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。

1.2.2 Lectin subunit alpha基因表達(dá)載體的克隆與構(gòu)建 根據(jù)家蠅Lsa基因的mRNA序列信息（XM_005178088.3），設(shè)計(jì)基因引物，引物分別引入Xho I和Age I酶切位點(diǎn)，下劃線部分為 HA 標(biāo)簽序列（表1）。以家蠅幼蟲cDNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR反應(yīng)條件為：95℃ 預(yù)變性 5 min；95℃變性 30 s，65℃（降低 2℃/2循環(huán)）退火 40 s 以及72℃延伸 100 s，共 16 個循環(huán)；然后 95℃變性 30 s，51℃退火 40 s 以及72℃延伸 100 s 共 19 個循環(huán)；最后 72℃延伸5 min，瓊脂糖凝膠電泳檢測。PCR產(chǎn)物和pLEX載體用Xho I和Age I雙酶切，連接轉(zhuǎn)化到DH5α感受態(tài)細(xì)胞中。酶切和測序驗(yàn)證正確的重組質(zhì)粒命名為pLEX-Lsa。

1.2.3 Lsa重組慢病毒的制備 使用LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染pLEX-Lsa到293T細(xì)胞中。接種293T細(xì)胞于10-cm細(xì)胞培養(yǎng)皿中，并且在含10% 胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，直到細(xì)胞生長到匯合度達(dá)到 70%-80%。稀釋 12 μg pLEX-Lsa，9 μg的包裝質(zhì)粒（psPAX2）和3.5 μg的包膜質(zhì)粒（pMD2.G）在1.5 mL Opti-MEM?培養(yǎng)基中，輕輕混勻。LipofectamineTM2000在使用前混勻，然后添加50 μL LipofectamineTM2000到1.5 mL Opti-MEM?培養(yǎng)基中。室溫孵育5 min后，混勻含pLEX-Lsa培養(yǎng)基和含LipofectamineTM2000培養(yǎng)基（總體積 3 mL），之后室溫孵育20 min。添加到293T細(xì)胞中，4 h更換新鮮培養(yǎng)基，24 h 后收獲含病毒的細(xì)胞培養(yǎng)上清，分裝保存于-70℃?zhèn)溆?。以上述同樣的方法生產(chǎn)包含空pLEX載體的慢病毒。1.2.4 重組慢病毒轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞 在六孔板

中培養(yǎng)RAW264.7 細(xì)胞，在感染日達(dá)到60-70% 的匯合度。重組慢病毒與新鮮培養(yǎng)基各1 mL，同時加入聚凝胺（Polybrene）2 μg，到RAW264.7 細(xì)胞中。24 h后更換新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24 h。添加嘌呤霉素（Puromycin）到RAW264.7 細(xì)胞中，通過不同濃度的不斷篩選，且終濃度為4 μg/mL，獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的包含pLEX-Lsa的RAW264.7 細(xì)胞，被命名為RAW-pLEX-Lsa；包含空pLEX載體的RAW264.7 細(xì)胞，被命名為RAW-pLEX，作為陰性對照。

1.2.5 Western blot分析 分別收集RAW-pLEX-Lsa和RAW-pLEX細(xì)胞，裂解后取40 μg的總蛋白按文獻(xiàn)［13］進(jìn)行 Western blotting 分析。40 μg總蛋白被分離通過SDS-PAGE電泳，然后被轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜（NC膜），并將其與電轉(zhuǎn)裝置配套的海綿墊放到轉(zhuǎn)移緩沖液中平衡10 min。NC膜被封閉液封閉2 h，一抗為小鼠源Anti-HA antibody，在室溫下孵育1-2 h，二抗為熒光素標(biāo)記羊抗鼠IgG，室溫下孵育1 h。

1.2.6 S. aureus刺激RAW-pLEX-Lsa和RAW-pLEX細(xì)胞 在六孔板中分別培養(yǎng)RAW-pLEX-Lsa和RAW-pLEX細(xì)胞。在37℃的LB中孵育S. aureus，生長到對數(shù)期收集菌液。通過梯度稀釋和平板涂布的方法檢測S. aureus的活菌數(shù)。S. aureus刺激RAW-pLEX-Lsa和RAW-pLEX細(xì)胞，MOI為10∶1（細(xì)菌：細(xì)胞）。分別收集未刺激和刺激3 h，6 h，12 h 和24 h細(xì)胞，且收集未刺激和刺激6 h細(xì)胞上清，在每個時間點(diǎn)分別設(shè)置兩個平行樣品。

1.2.7 RT-PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 使用絕對定量法構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線，對S. aureus刺激的RAW-pLEX-Lsa和RAW-pLEX細(xì)胞的基因mRNA表達(dá)水平進(jìn)行定量分析。根據(jù)小鼠（Mus musculus）NCBI序列信息，分別設(shè)計(jì)相應(yīng)的跨內(nèi)含子引物。小鼠TNF-α基因有兩個轉(zhuǎn)錄剪接體，分別設(shè)計(jì)引物，命名為TNF-α-tv-1（NCBI序列號：NM_013693.3）和 TNF-α-tv-2（NCBI序列號：NM_001278601.1）。小鼠IL-1β基因有兩個轉(zhuǎn)錄剪接體，分別是IL-1β和IL-1β-X1，分別設(shè)計(jì)兩個引物，其中一個能體現(xiàn)兩個轉(zhuǎn)錄剪接體總的mRNA表達(dá)水平，另外一個是IL-1β轉(zhuǎn)錄剪接體的引物，分別命名為 IL-1β-T（NCBI序列號：XM_006498795.3）和IL-1β（NCBI序列號 ：NM_008361.4）。小鼠 NFκB-1（NCBI序列號 ：NM_008689），NFκB-2（NCBI序列號：XM_006526743.3）和 GAPDH（NCBI序列號：NM_008084.3）基因，分別設(shè)計(jì)引物。所有引物序列見表1。

表1 基因克隆及定量RT-PCR檢測的引物序列

1.2.8 RNA的提取及實(shí)時定量RT-PCR 用Trizol提取RAW-pLEX-Lsa和RAW-pLEX細(xì)胞總mRNA，取1 μg 總 RNA 反轉(zhuǎn)錄合成 cDNA，取 2 μL cDNA 進(jìn)行實(shí)時定量RT-PCR，GAPDH基因?yàn)閮?nèi)參基因。反應(yīng)體系 ：cDNA 2 μL；SYBR Premix Ex Taq 5 μL；上下游引物（10 pmol/L）各1 μL；無 RNA 酶超純水 補(bǔ)至 10 μL。反應(yīng)程序?yàn)?：95℃ 10 min，45 個循環(huán) ：95℃ 10 s，58℃ 30 s，72℃ 30 s。溶解曲線 ：95℃10 s，65℃ 60 s，97℃ 1 s，降溫至 37℃ 30 s。每個樣本重復(fù) 3 次。

1.2.9 ELISA檢測細(xì)胞炎性細(xì)胞因子的蛋白水平 分別用TNF-α和IL-1β的ELISA試劑盒，檢測未刺激和S. aureus刺激6 h后細(xì)胞上清中TNF-α和IL-1β的蛋白水平，用酶標(biāo)儀讀取數(shù)值。

1.2.10 統(tǒng)計(jì)分析 使用SPSS 22軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA）和鄧肯檢驗(yàn)（Duncana test）。

2 結(jié)果

2.1 Western blotting的檢測結(jié)果

通過HA 抗體進(jìn)行Western blotting分析，檢測Lsa在RAW264.7細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果（圖1）顯示，有特異性條帶在21 kD標(biāo)準(zhǔn)分子量附近，表明Lsa在RAW264.7細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)。

圖1 Western blotting檢測蛋白Lsa的表達(dá)

2.2 S. aureus刺激前后TNF-α-tv-1和TNF-α-tv-2的相對轉(zhuǎn)錄水平

在S. aureus 刺激后，RAW-pLEX-Lsa和RAW-pLEX細(xì)胞中，TNF-α-tv-1和TNF-α-tv-2基因的相對轉(zhuǎn)錄水平均迅速升高，6 h達(dá)到最高峰，隨后下降。RAW-pLEX-Lsa細(xì)胞中TNF-α-tv-1基因的相對轉(zhuǎn)錄水平在6 h相比RAW-pLEX細(xì)胞顯著下調(diào)（P＜0.05）。RAW-pLEX-Lsa細(xì)胞中TNF-α-tv-1基因的相對轉(zhuǎn)錄水平在12 h相比RAW-pLEX細(xì)胞明顯低于RAW-pLEX細(xì)胞（P＞0.05）。RAW-pLEX-Lsa細(xì)胞中TNF-α-tv-2基因的相對轉(zhuǎn)錄水平在6 h和12 h相比RAW-pLEX細(xì)胞顯著下調(diào)（P＜0.05）。隨著時間點(diǎn)的變化，RAW-pLEX-Lsa和 RAW-pLEX細(xì) 胞 中 TNF-αtv-1和TNF-α-tv-2基因的相對轉(zhuǎn)錄水平趨勢都基本一致。在RAW-pLEX細(xì)胞中，TNF-α-tv-1基因的相對轉(zhuǎn)錄水平在6 h是TNF-α-tv-2基因的相對轉(zhuǎn)錄水平的45倍，此時與其他各個時間點(diǎn)相對轉(zhuǎn)錄水平相比，TNF-α-tv-1基因的相對轉(zhuǎn)錄水平是TNF-α-tv-2基因的相對轉(zhuǎn)錄水平的最小倍數(shù)。在RAW-pLEXLsa細(xì)胞中，TNF-α-tv-1基因的相對轉(zhuǎn)錄水平在3 h是TNF-α-tv-2基因的相對轉(zhuǎn)錄水平的57倍，此時與其他各個時間點(diǎn)相對轉(zhuǎn)錄水平相比，TNF-α-tv-1基因的相對轉(zhuǎn)錄水平是TNF-α-tv-2基因的相對轉(zhuǎn)錄水平最小倍數(shù)（圖2-A、B）。在S. aureus 刺激6 h后，ELISA檢測細(xì)胞上清中TNF-α蛋白水平，RAW-pLEX-Lsa細(xì)胞上清中的TNF-α蛋白水平顯著低于RAW-pLEX細(xì)胞上清中的TNF-α蛋白水平（P＜0.05）（圖2-C）。

圖2 S. aureus刺激前后RAW-pLEX-Lsa和RAW-pLEX細(xì)胞中 TNF-α-tv-1（A）和 TNF-α-tv-2（B）的mRNA的表達(dá)量和TNF-α（C）的產(chǎn)量

2.3 S. aureus刺激前后IL-1βT和IL-1β的相對轉(zhuǎn)錄水平

在S. aureus 刺激后，RAW-pLEX-Lsa和RAW-pLEX細(xì)胞中IL-1βT 和 IL-1β基因的相對轉(zhuǎn)錄水平均迅速升高，6 h達(dá)到最高峰，隨后下降。RAW-pLEX-Lsa細(xì)胞中IL-1βT基因的相對轉(zhuǎn)錄水平在3 h，6 h和12 h相比RAW-pLEX細(xì)胞顯著下調(diào)（P＜0.05）。RAW-pLEX-Lsa細(xì)胞中IL-1β基因的相對轉(zhuǎn)錄水平在3 h和6 h相比RAW-pLEX細(xì)胞顯著降低（P＜0.05）。隨著時間點(diǎn)的變化，RAW-pLEX-Lsa和RAW-pLEX細(xì)胞中 IL-1βT 和 IL-1β基因的相對轉(zhuǎn)錄水平趨勢都基本一致。在RAW-pLEX細(xì)胞中，IL-1βT基因的相對轉(zhuǎn)錄水平在3 h，6 h和12 h分別是IL-1β基因的相對轉(zhuǎn)錄水平的19，20，57倍。在RAW-pLEX-Lsa細(xì)胞中，IL-1βT基因的相對轉(zhuǎn)錄水平在3 h，6 h和12 h分別是IL-1β基因的相對轉(zhuǎn)錄水平的22，18，23倍（圖3）。ELISA檢測細(xì)胞上清中IL-1β的蛋白水平，在RAW-pLEX細(xì)胞上清中，S. aureus刺激6 h后，上清中IL-1β的蛋白水平為46 pg/mL，未刺激的細(xì)胞上清中IL-1β的蛋白水平未檢測到；RAW-pLEX-Lsa細(xì)胞上清中，IL-1β的蛋白水平在刺激前和刺激后均未檢測到。

圖3 S. aureus刺激前后RAW-pLEX-Lsa和RAW-pLEX細(xì)胞中IL-1βT和IL-1β的mRNA的表達(dá)量

2.4 S. aureus刺激前后NFκB-1和NFκB-2的相對轉(zhuǎn)錄水平

在S. aureus 刺激后，RAW-pLEX-Lsa和RAW-pLEX細(xì)胞中NFκB-1基因的相對轉(zhuǎn)錄水平均迅速升高，6 h達(dá)到最高峰，隨后下降。RAW-pLEX-Lsa細(xì)胞中NFκB-1基因的相對轉(zhuǎn)錄水平在各個時間點(diǎn)與RAW-pLEX細(xì)胞相比無顯著差別（圖4）。

圖4 S. aureus刺激前后RAW-pLEX-Lsa和RAW-pLEX細(xì)胞中NFκB-1的mRNA的表達(dá)量

在S. aureus 刺激后，RAW-pLEX-Lsa和RAW-pLEX細(xì)胞中NFκB-2基因的相對轉(zhuǎn)錄水平均迅速升高，3 h達(dá)到最高峰，隨后下降。RAW-pLEX-Lsa細(xì)胞中NFκB-2基因的相對轉(zhuǎn)錄水平在3 h與RAW-pLEX細(xì)胞相比顯著升高（P＜0.05）（圖5）。

3 討論

Dr. Alexander Ogston 發(fā)現(xiàn)S. aureus是重要的革蘭氏陽性菌［14］，并且能引起許多疾病。例如，皮膚及軟組織感染（SSTIs），肺炎，菌血癥，乳腺炎等［15-16］。另外S. aureus感染還會導(dǎo)致嚴(yán)重和持久的宿主炎癥反應(yīng)［17-20］。S. aureus刺激巨噬細(xì)胞會引起炎性細(xì)胞因子的分泌（包括TNF-a和IL-1β）［21-23］，而在免疫效應(yīng)細(xì)胞消除感染的第一階段炎性細(xì)胞因子有利于消除感染［24-25］，并且S. aureus刺激巨噬細(xì)胞能激活 NF-κB 信號通路［26］。

圖5 S. aureus刺激前后RAW-pLEX-Lsa和RAW-pLEX細(xì)胞中NFκB-2的mRNA的表達(dá)量

炎癥是臨床常見的病理過程，是機(jī)體對損傷因子的病理性防衛(wèi)反應(yīng)，也是最重要的保護(hù)性反應(yīng)。高表達(dá)量的炎性細(xì)胞因子是炎性病變的重要特征之一［27］。TNF-α參與激活中性粒細(xì)胞，損傷內(nèi)皮細(xì)胞，和加劇炎癥級聯(lián)反應(yīng)［28-29］。根據(jù)NCBI上的小鼠基因序列信息發(fā)現(xiàn)TNF-α有兩個轉(zhuǎn)錄剪接體。轉(zhuǎn)錄剪接體2與轉(zhuǎn)錄剪接體1相比，缺少外顯子3片段，有48個堿基，16個氨基酸。由圖2可知，在S. aureus刺激RAW264.7細(xì)胞引起的炎癥反應(yīng)中，TNF-α-tv-1可能起到更重要的作用。在調(diào)節(jié)S. aureus引起的宿主免疫反應(yīng)中，IL-1β是重要的促炎性細(xì)胞因子［30］。根據(jù)NCBI上的小鼠基因序列信息發(fā)現(xiàn)IL-1β 有轉(zhuǎn)錄剪接體 IL-1β-X1 和 IL-1β。IL-1β 與 IL-1β-X1相比，外顯子缺少1 302個堿基，434個氨基酸。由圖3可知，在S. aureus刺激RAW264.7細(xì)胞引起的炎癥反應(yīng)中，IL-1β-X1可能起到更重要的作用。根據(jù)我們所查文獻(xiàn)，小鼠TNF-α和IL-1β轉(zhuǎn)錄剪接體的生物學(xué)功能，目前還未見報(bào)道。由圖2可知，在S. aureus刺激6 h后，RAW-pLEX-Lsa細(xì)胞上清中，TNF-α的蛋白水平顯著降低。在S. aureus刺激6 h后，ELISA檢測細(xì)胞上清中IL-1β的蛋白水平，在RAW-pLEX細(xì)胞上清中IL-1β的蛋白水平為46 pg/ml，RAW-pLEX-Lsa細(xì)胞上清中，IL-1β的蛋白水平未檢測到。結(jié)果表明，在RAW264.7細(xì)胞中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的家蠅Lsa蛋白能夠抑制TNF-α和IL-1β的轉(zhuǎn)錄和生產(chǎn)。

研究報(bào)道，N-乙酰氨基葡萄糖lectin擁有抗炎活性，能減少由炎癥引起的TNF-α的表達(dá)量［31］。Shan等［32］在 2013年發(fā)現(xiàn)，小腸黏液包含galectin-3，Dectin-1 和 FcgRIIB，可以抑制 NFκB 調(diào)節(jié)的促炎因子基因的表達(dá)。Freitas 等［33］發(fā)現(xiàn)酵母聚糖誘導(dǎo)的顳下頜關(guān)節(jié)組織和三叉神經(jīng)節(jié)中，秋葵（Abelmoschus esculentus）Lectin可以減少TNF-a和IL-1β的表達(dá)量。Jin等［34］發(fā)現(xiàn)一個新型的的肽（GC31），來自血栓調(diào)節(jié)蛋白的C型凝集素樣結(jié)構(gòu)域，在RAW264.7細(xì)胞中發(fā)揮抗炎性能通過阻塞LPS激活的NFκB信號通路，進(jìn)而抑制TNF-a 和 IL-6的表達(dá)。Matsumoto等［35］發(fā)現(xiàn)可溶性唾液酸結(jié)合免疫球蛋白型凝集素9（sSiglec-9）通過抑制NFκB信號通路的活性，進(jìn)而減少促炎性細(xì)胞因子（TNF-a 和IL-6）的表達(dá)。在S. aureus刺激后，RAW-pLEX與RAW-pLEX-Lsa相比，RAW-pLEX-Lsa細(xì)胞中TNF-α和IL-1β基因的相對轉(zhuǎn)錄水平顯著下降，而NFκB-1與NFκB-2基因的相對轉(zhuǎn)錄水平并沒有呈現(xiàn)下降趨勢。因此，我們認(rèn)為在RAW264.7細(xì)胞中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的家蠅Lsa蛋白并不是通過抑制NFκB信號通路的活性，進(jìn)而顯著地抑制TNF-α和IL-1β的轉(zhuǎn)錄和生產(chǎn)，而可能是通過其他通路影響炎性細(xì)胞因子的表達(dá)。

4 結(jié)論

家蠅Lsa蛋白可以有效地發(fā)揮抗炎活性，抑制TNF-α和IL-1β的表達(dá)。

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