白 濱 ，何蘇琴 ，于安芬 ，荊卓瓊 ，李瑞琴 ，徐 瑞 ，柳利龍

（1.甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜草與綠色農(nóng)業(yè)研究所，甘肅 蘭州 730070；2.甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所，甘肅 蘭州 730070；3.農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室（蘭州），甘肅蘭州 730070；4.甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，甘肅 蘭州 730070；5.農(nóng)業(yè)部天水作物有害生物科學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)站，甘肅 天水 741200）

蘭州百合［Lilium davidii var.willmottiae（E.H.Wilson）Raffill］是川百合的一個(gè)變種［1］，具有食用、藥用、保健和觀賞價(jià)值。蘭州百合不僅是中國(guó)百合中的上品，而且是中國(guó)唯一的甜百合，享有“蘭州百合甲天下”的美譽(yù)。蘭州栽培百合的歷史已有400多年，作為蘭州市最具特色的農(nóng)產(chǎn)品之一，歷經(jīng)數(shù)百年的發(fā)展，蘭州百合已經(jīng)成為產(chǎn)區(qū)農(nóng)民擺脫貧困、增加收入的支柱產(chǎn)業(yè)［2-5］。目前，蘭州百合種植面積在6 667 hm2以上，年產(chǎn)量3 000 萬(wàn)～4 000 萬(wàn) kg［6］。

蘭州百合的種植區(qū)域集中且生產(chǎn)周期較長(zhǎng)（從母籽培育到形成商品百合一般需要5～6 a），輪作倒茬困難，隨著種植面積的擴(kuò)大和種植年限的延長(zhǎng)，百合根和鱗莖褐腐病日趨嚴(yán)重，嚴(yán)重影響了蘭州百合的產(chǎn)量和質(zhì)量。由于受侵染部位不同，可產(chǎn)生根腐、根盤(pán)腐爛和鱗片腐爛等多種癥狀：鱗片上單個(gè)病斑圓形、黃褐色至黑褐色，稍隆起至明顯凹陷，一些病斑在鱗片上形成穿孔，病斑直徑1～5mm，可相連成片，嚴(yán)重時(shí)外面的1～2層鱗片完全變黑腐爛；根盤(pán)受害呈黃褐色至黑褐色；病根呈污黃、黃褐或黑褐色（見(jiàn)封三圖1）。

由于百合種類(lèi)、種植區(qū)域、栽培方式及生態(tài)條件的不同，百合根和鱗莖褐腐（斑）病的病原種類(lèi)也存在較大差異。在北美和加拿大，Colletotrichum dematium、Fusarium oxysporum f.sp.lilii和Cylindrocarpon radicicola是引起百合鱗莖腐爛的主要病原［7-9］；在荷蘭，Bollen［10］于 1971—1975年對(duì)采自23塊百合田塊的病害標(biāo)樣進(jìn)行了分離，Cylindrocarpon sp.的分離頻率在50.3%～51.0%，F(xiàn)usarium oxysporum的分離頻率在35.1%～38.7%，Penicillium corymbiferum的分離頻率在4.3%～19.7%，Sistotrema sp.的分離頻率在6.6%～18.4%，且Penicillium corymbiferum和Sistotrema sp.在地下莖和鱗片上的分離頻率明顯不同；在西班牙，F(xiàn)usarium oxysporum f.sp.lilii和Fusarium proliferatum可引起百合葉片黃化和落葉，根和鱗莖產(chǎn)生壞死斑，甚至植株矮化和死亡［11］；在以色列，引起百合根腐和鱗莖腐爛的病原包括Rhizoctonia AG-A，Rhizoctonia solani， Pythium oligandrum， Fusarium proliferatum和F.oxysporum［12］。我國(guó)報(bào)道的可引起百合生長(zhǎng)期根和鱗莖腐爛的病原菌有Botrytis elliptica， Colletotrichum liliacearum， Fusarium moniliform，F(xiàn)usarium oxysporum，F(xiàn)usarium solani，F(xiàn)usarium tricinctum，Penicillium cyclopium，Phytophthora parasitica， Pythium sp.， Rhizoctonia solani，Sclerotium rolfsii等［13-22］。

為了探明蘭州百合褐腐病相關(guān)真菌和卵菌種類(lèi)，給病害科學(xué)防治提供技術(shù)支撐，我們于2013年秋季在蘭州百合主產(chǎn)區(qū)采集標(biāo)樣，對(duì)蘭州百合褐腐病罹病根、根盤(pán)和鱗片組織進(jìn)行了組織分離，對(duì)分出真菌和卵菌的優(yōu)勢(shì)種群進(jìn)行了分析，并對(duì)部分菌株的致病性進(jìn)行了測(cè)定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)樣采集

于2013年9月在蘭州百合主產(chǎn)區(qū)的5個(gè)樣點(diǎn)采集罹病百合標(biāo)樣。標(biāo)樣標(biāo)記后置于保鮮袋中，帶回實(shí)驗(yàn)室后立即攤晾開(kāi)，在48 h之內(nèi)對(duì)標(biāo)樣進(jìn)行組織分離。標(biāo)樣采集明細(xì)見(jiàn)表1。

1.2 培養(yǎng)基

培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA），配方為馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂12 g，水1 000mL，pH自然。

1.3 真菌和卵菌的分離、純化及保藏

采用常規(guī)的真菌組織分離法進(jìn)行分離［23］。將罹病鱗片和根盤(pán)組織剪成0.5cm×0.5cm的小塊，根剪成長(zhǎng)1cm左右的小段，用70%乙醇表面消毒5～10 s，再用滅菌水沖洗4～5次，置PDA平板上，20～22℃黑暗培養(yǎng)，長(zhǎng)出的真菌及時(shí)純化保藏。

1.4 真菌和卵菌的鑒定

采用傳統(tǒng)的形態(tài)分類(lèi)鑒定方法，依據(jù)分出真菌和卵菌的培養(yǎng)特征和顯微形態(tài)特征，鑒定到屬。分類(lèi)鑒定參考的主要文獻(xiàn)包括《真菌鑒定手冊(cè)》［24］，Illustrated genera of imperfect fungi［25］，Delimitation ofNeonectria and Cylindrocarpon （Nectriaceae，Hypocreales， Ascomycota） and related genera with Cylindrocarpon-like anamorphs等［26］。

1.5 分離結(jié)果統(tǒng)計(jì)

以分出率衡量罹病組織中真菌和卵菌的豐富程度及每個(gè)組織塊受多重侵染的發(fā)生頻率。分出率（isolation rate）為分離到的某一類(lèi)型真菌和卵菌的菌株數(shù)占分離樣品組織塊總數(shù)的百分率，以分離頻率比較判斷優(yōu)勢(shì)菌群。分離頻率（isolation frequency）為分離到的某一類(lèi)型真菌和卵菌的菌株數(shù)占分離總的真菌和卵菌菌株數(shù)的百分率［27］。

表1 罹病百合標(biāo)樣采集明細(xì)

1.6 部分菌株的致病性測(cè)定

在分出真菌的3個(gè)優(yōu)勢(shì)菌群中，選擇代表性的9個(gè)菌株為測(cè)試菌株。待測(cè)絲核菌屬（Rhizoctonia）菌株在PDA平板上20℃黑暗培養(yǎng)3 d，在菌落邊緣取直徑5mm菌絲塊，接種于健康的蘭州百合鱗片和小鱗莖上，每菌株接種10枚百合鱗片和6枚小鱗莖，每枚鱗片接種1塊菌絲塊，在每枚小鱗莖的根盤(pán)和根部接種2～3塊菌絲塊，以不接菌的蘭州百合鱗片和小鱗莖為對(duì)照，放置在直徑20cm的培養(yǎng)皿內(nèi)、室溫（20℃）下保濕培養(yǎng)。土赤殼屬（Ilyonectria）和鐮刀菌屬（Fusarium）待測(cè)菌株在PDA平板上20℃黑暗培養(yǎng)7～10 d，在菌落邊緣取直徑5mm的菌絲塊，接種于健康的蘭州百合鱗片上，每菌株接種10枚百合鱗片，每枚鱗片接種1塊菌絲塊，以不接菌的蘭州百合鱗片為對(duì)照，置直徑20cm培養(yǎng)皿內(nèi)、室溫（20℃）下保濕培養(yǎng)。小鱗莖接種后7 d、鱗片接種后35 d統(tǒng)計(jì)發(fā)病率，對(duì)發(fā)病的百合組織進(jìn)行病原菌重分離。

2 結(jié)果與分析

2.1 分出真菌和卵菌的組成

從表2可以看出，從5個(gè)樣點(diǎn)采集的罹病百合標(biāo)樣中共分離得到真菌和卵菌574株，鑒定后歸于6個(gè)屬，少數(shù)不產(chǎn)孢真菌或疑難菌暫歸為其他。在屬的水平上，以土赤殼屬（Ilyonectria）、鐮刀菌屬（Fusarium）和絲核菌屬（Rhizoctonia）為優(yōu)勢(shì)菌群，分別占總菌株數(shù)的46.86%、32.23%、17.07%。病組織塊的真菌和卵菌分出率為100.00%～134.78%，從1塊病組織上分出1種以上菌類(lèi)的現(xiàn)象普遍。

2.2 優(yōu)勢(shì)菌群在不同地塊間的差異

從表3可以看出，3個(gè)優(yōu)勢(shì)菌群在不同地塊的差異明顯。不同地塊間土赤殼屬（Ilyonectria）的分離頻率為18.92%～85.85%，分出率為19.44%～91.00%；鐮刀菌屬（Fusarium）的分離頻率為1.75%～58.02%，分出率為1.83%～66.67%；絲核菌屬（Rhizoctonia）的分離頻率為2.83%～45.61%，分出率為3.00%～47.71%。3個(gè)優(yōu)勢(shì)菌群在不同地塊分出真菌和卵菌中的占比差異與采樣地塊的土壤含水量間無(wú)線性關(guān)系。

2.3 優(yōu)勢(shì)菌群在不同分離部位的差異

從表4可以看出，3個(gè)優(yōu)勢(shì)菌群在罹病百合不同部位分出真菌和卵菌中的占比差異明顯，土赤殼屬（Ilyonectria）在鱗片和根上的分出率和分離頻率較高，鐮刀菌屬（Fusarium）在根盤(pán)上的分出率和分離頻率最高，而絲核菌屬（Rhizoctonia）的在根盤(pán)和根上的分出率和分離頻率明顯高于鱗片。

表2 百合褐腐病分出真菌和卵菌的類(lèi)群組成①Bot、Ily、Fus、Pen、Pyt、Rhi分別為Botrytis、Ilyonectria、Fusarium、Penicillium、Pythium、Rhizoctonia的縮寫(xiě)，下同。

表3 不同地塊百合褐腐病分出真菌和卵菌優(yōu)勢(shì)菌群的差異

表4 百合褐腐病不同部位分出真菌和卵菌優(yōu)勢(shì)菌群的差異

2.4 試驗(yàn)菌株對(duì)蘭州百合的致病性

測(cè)試的9個(gè)菌株中有7個(gè)菌株對(duì)蘭州百合具有致病性。對(duì)發(fā)病的百合組織進(jìn)行病原菌的重分離，原接種菌的分出率達(dá)100%（見(jiàn)表5、封三圖2）。

表5 試驗(yàn)菌株對(duì)蘭州百合的致病性

3 小結(jié)與討論

百合屬植物大約有115種，主要分布于北半球的溫帶和高山地區(qū)，特別是東亞地區(qū)，我國(guó)有55種［1］。關(guān)于蘭州百合的學(xué)名，除Lilium davidii var.willmottiae（E.H.Wilson）Raffill外［1］，使用較多的還有 Lilium davidii var.unicolor Cotton［25］，Lilium davidii var.unicolor Salisb 等［29-30］，這些名稱間的關(guān)系如何，期待相關(guān)的植物分類(lèi)學(xué)工作者進(jìn)行梳理和規(guī)范使用。

本研究中，土赤殼屬［Ilyonectria（Cylindrocarpon-like anamorphs）］、鐮刀菌屬（Fusarium）和絲核菌屬（Rhizoctonia）3類(lèi)菌的分出頻率分別為46.86%、32.23%和17.07%，總的分出頻率達(dá)96.17%，與李誠(chéng)［14］1990—1993年對(duì)采自蘭州市和平?jīng)鍪械奶m州百合的分離結(jié)果（Fusarium oxysporum，F(xiàn)usarium solani和Fusarium moniliform 3種鐮刀菌總的分離比率達(dá)84%）相比較，差異較大；與 Bollen［10］1971—1975 年對(duì)采自荷蘭的 23 塊百合田塊的病害標(biāo)樣的分離結(jié)果（Cylindrocarpon sp.的分離頻率達(dá)50.3%～51.0%）有部分相似。

土赤殼屬（Ilyonectria）大多數(shù)種類(lèi)為植物病原菌，可引起植物根腐病和黑腐病等［31］，其無(wú)性型柱孢屬（Cylindrocarpon Wollenw.）真菌是人參、西洋參和三七等藥用植物根腐（銹腐）病的主要病原菌［32-36］。

本研究中，土赤殼屬［Ilyonectria（Cylindrocarpon-like anamorphs）］的3個(gè)菌株、鐮刀菌屬（Fusarium）的2個(gè)菌株和絲核菌屬（Rhizoctonia）的2個(gè)菌株對(duì)蘭州百合的致病性得到確認(rèn)，但由于不同種類(lèi)病菌的致病條件存在差異，在同一條件下對(duì)試驗(yàn)菌株致病性的測(cè)定結(jié)果并不能完全反映其致病力強(qiáng)弱。分出真菌和卵菌的種的鑒定，在不同溫濕度條件下和對(duì)寄主不同組織部位的致病性，以及非致病種類(lèi)與致病菌的關(guān)系等，都有待于進(jìn)一步開(kāi)展細(xì)致的研究工作。

［1］LIANG S J，TAMURA MN，LILIUM LINNAEUS.Flora of China［EB/OL］.（2000-12-20）［2016-09-09］.http：//flora.huh.harvard.edu/china/PDF/PDF24/lilium.pdf.

［2］周清泉.蘭州百合產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀及對(duì)策［J］.甘肅農(nóng)業(yè)科技，2016（1）：64-66.

［3］周清泉.二陰地區(qū)蘭州百合無(wú)公害栽培關(guān)鍵技術(shù)［J］.甘肅農(nóng)業(yè)科技，2016（4）：74-75.

［4］石有太，林育紅，崔文娟.蘭州百合高效配方施肥技術(shù)［J］. 甘肅農(nóng)業(yè)科技，2013（7）：61-62.

［5］蘭州百合基礎(chǔ)知識(shí)［J］.甘肅農(nóng)業(yè)，2015（11）：25-26.

［6］佘佳蔓.蘭州百合產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀與發(fā)展新思路［J］.園藝與種苗，2012（5）：42-45.

［7］SMITH J D，MAGINNES E A.Scale rot test for hybrid lilies［J］.Canadian Plant Disease Survey， 1966， 46（3）：92-94.

［8］SMITH J D，MAGINNES E A.Scale rot test of hardy hybrid lilies［J］.Canadian Plant Disease Survey，1969，49（2）：43-45.

［9］BALD J G，LENZ J V，PAULUS A O，et al.Multicomponent preplanting dips for easter lily bulbs［J］.Plant Disease，1982，66（5）：399-401.

［10］BOLLEN G J.Pathoganicity of fungi isolated from stems and bulbs of lilies and their sensitivity to benomyl［J］.Netherlands Journal of Plant Pathology，1977，83：317-329.

［11］PRADOS-LIGERO A M，BASALLOTE-UREBA M J，MELERO-VARA J M.First report of Fusarium oxysporum f.sp lilii and F.proliferatum affecting Lilium crops in Spain［J］.Tropical Plant Pathology，2008，33（3）：235-236.

［12］LEBIUSH-MORDECHAIL S，ERLICHL O，MAYMON M，et al.Bulb and root rot in lily（Lilium longiflorum）and onion（Allium cepa）in Israel［J］.Journal of Phytopathology，2014，162： 466-471.

［13］王拱辰，壽紹賢，鮑建榮.百合鱗莖斑點(diǎn)病病原菌鑒定［J］. 植物病理學(xué)報(bào)，1994，24（3）：212-217.

［14］李 誠(chéng).百合鱗莖帶菌及種球消毒試驗(yàn)［J］.植物保護(hù)，1994，20（4）：24-25.

［15］唐祥寧，游春平，劉福秀，等.江西百合病害調(diào)查與鑒定［J］. 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，1997，9（4）：1-8.

［16］梁巧蘭，徐秉良，劉艷梅.觀賞百合根腐病病原鑒定及藥劑篩選［J］.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，39（1）：25-28.

［17］馮翠萍，李艷瓊，納玲潔，等.玉溪市百合病害種類(lèi)的調(diào)查與鑒定［J］. 福建林業(yè)科技，2007，34（1）：126-127.

［18］毛軍需，李 有.豫西百合病害種類(lèi)的調(diào)查與分析［J］. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2007，26（3）：302-305.

［19］安智慧，石延霞，劉永春，等.百合根腐病病原鑒定及防治方法［J］.中國(guó)蔬菜， 2010（3）：23-24.

［20］朱海燕，夏 花，高必達(dá).湖南省食用百合生長(zhǎng)期鱗莖腐爛病的病原鑒定［J］.植物病理學(xué)報(bào)，2012，42（5）：525-527.

［21］LI Y Y，WANG Y J，XIE Z K，et al.First report of lily blight and wilt Caused by Fusarium tricinctum in China［J］.Plant Disease，2013，97（7）：993.

［22］SHANG Q H，ZHAO X，LI Y Y，et al.First report of Fusarium tricinctum causing stem and root rot on Lanzhou lily（Lilium davidii var.unicolor）in China［J］.Plant Disease，2014，98（7）：999.

［23］方中達(dá).植病研究方法［M］.4版.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1998：122-126.

［24］魏景超.真菌鑒定手冊(cè)［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1979：1-780.

［25］BARNETT H L，HUNTER B B.Illustrated genera of imperfect fungi（4th edition）［M］.Minnesota： APS Press，1998：1-218.

［26］CHAVERRI P，SALGADO C，HIROOKA Y，et al.Delimitation of Neonectria and Cylindrocarpon（Nectriaceae， Hypocreales， Ascomycota） and related genera with Cylindrocarpon-like anamorphs［J］.Studies in Mycology，2011，68：57-78.

［27］杜少康，陳雙林，林 岱，等.銀杏葉部?jī)?nèi)生真菌多樣性的研究［J］. 菌物學(xué)報(bào)，2009，28（4）：504-511.

［28］黃彥瑋，師桂英，李謀強(qiáng)，等.外源GA3、ABA對(duì)低溫冷藏蘭州百合種球萌發(fā)的促抑效應(yīng)及種球碳水化合物變化研究［J］.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，51（1）：55-61.

［29］馬君義，趙小亮，張 繼，等.蘭州百合的研究進(jìn)展［J］. 塔里木農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，17（4）：53-56；76.

［30］李玉帆，明 軍，劉新艷，等.15個(gè)百合種和品種的食用性比較研究［J］.園藝學(xué)報(bào)，2013，40（增刊）：2693.

［31］王玉君，張麗春，郭順星.土赤殼屬三個(gè)中國(guó)新記錄種［J］. 菌物學(xué)報(bào)，2015，34（6）：1209-1214.

［32］張?zhí)煊睿罟?，陳偉群，?西洋參銹腐病病原研究［J］. 西北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1991，19（1）：43-48.

［33］嚴(yán)雪瑞，傅俊范.柱孢屬（Cylindrocarpon）真菌和參類(lèi)銹腐病的研究歷史與現(xiàn)狀［J］.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，33（1）：71-75.

［34］繆作清，李世東，劉杏忠，等.三七根腐病病原研究［J］. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006，39（7）：1371-1378.

［35］王 琴，金若忠，云麗麗，等.人參銹腐病發(fā)生情況和病原研究［J］.遼寧林業(yè)科技，2014（3）：15-17.

［36］龍?jiān)戮?，毛忠順，朱?shū)生，等.三七銹斑病的病原菌［J］. 菌物學(xué)報(bào)，2015，34（2）：177-185.