1例國內(nèi)罕見的輸入性卵形瘧的實(shí)驗室檢測

師永霞，黃吉城，蘇錦坤，等

摘要：目的：卵形瘧原蟲感染經(jīng)常發(fā)生在中東、西非和印度尼西亞等地，我國本土瘧疾無卵形瘧報告病例，使用傳統(tǒng)的吉姆薩染色觀察法進(jìn)行瘧原蟲鏡檢時易對卵形瘧原蟲漏檢或誤檢。本文將傳統(tǒng)鏡檢法與巢式 PCR、實(shí)時熒光PCR等分子生物學(xué)檢測技術(shù)相結(jié)合，對1例國內(nèi)罕見的赤道幾內(nèi)亞輸入性卵形瘧原蟲感染進(jìn)行了實(shí)驗室檢測。方法：對白云機(jī)場入境的發(fā)熱病例進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，并采集病例抗凝血送至實(shí)驗室進(jìn)行檢測。制備疑似瘧疾患者血樣的血涂片，吉姆薩染色后進(jìn)行瘧原蟲的初次鏡檢觀察。根據(jù)瘧原蟲的小亞單位核糖體核糖核酸基因序列，實(shí)驗室自行設(shè)計瘧原蟲屬特異性（通用型）和4種瘧原蟲種特異性引物和探針，建立瘧疾巢式PCR和實(shí)時熒光PCR檢測及分型方法，并對該血樣進(jìn)行瘧疾檢測及分型。將PCR擴(kuò)增片段進(jìn)行序列測定，將序列遞交到GenBank數(shù)據(jù)庫，并與GenBank上已有的瘧原蟲序列進(jìn)行BLAST比對分析。結(jié)合血樣的分子生物學(xué)檢測和BLAST分析結(jié)果，重新對鏡檢結(jié)果進(jìn)行復(fù)核。結(jié)果：口岸發(fā)現(xiàn)的該發(fā)熱病例入境查體溫度為 38.3℃，曾在赤道幾內(nèi)亞國家工作兩年，期間染瘧疾，曾多次反復(fù)發(fā)作。實(shí)驗室對血樣的初次鏡檢為瘧疾陰性，但使用瘧原蟲巢式PCR通用引物對血樣的DNA進(jìn)行PCR檢測，擴(kuò)增出了預(yù)期大小約240 bp的條帶，表明瘧原蟲核酸陽性；巢式PCR分型檢測表明，血樣僅擴(kuò)增出預(yù)期大小約450 bp的卵形瘧條帶，無對應(yīng)大小的惡性瘧、間日瘧和三日瘧擴(kuò)增條帶產(chǎn)生，初步判定該病例為卵形瘧感染。實(shí)時熒光PCR檢測進(jìn)一步確認(rèn)了卵形瘧原蟲陽性結(jié)果，血樣的瘧原蟲通用型檢測為瘧原蟲核酸陽性，有典型的 S形陽性曲線；利用染料摻入法進(jìn)行卵形瘧的特異性實(shí)時熒光PCR檢測，檢測結(jié)果為卵形瘧陽性，擴(kuò)增片段特異性強(qiáng)，熔解曲線的Tm值為72.5℃，惡性瘧、間日瘧和三日瘧無擴(kuò)增曲線，說明該病例無惡性瘧、間日瘧或三日瘧混合感染。序列分析表明，卵形瘧擴(kuò)增片段長度為434 bp，將該序列遞交到 GenBank上，GenBank登錄號為JF505386。blast比對發(fā)現(xiàn)去除引物后的 393個堿基與GenBank DQ845247等卵形瘧的SSU rRNA對應(yīng)部分的基因序列同源性為100%。重新對血涂片進(jìn)行鏡檢復(fù)核，結(jié)果在薄血膜中發(fā)現(xiàn)了卵形瘧的環(huán)狀滋養(yǎng)體，被寄生的紅細(xì)胞為橢圓形，邊緣呈傘矢狀。結(jié)論：使用巢式PCR、實(shí)時熒光 PCR、序列分析和鏡檢等方法，證實(shí)該例輸入性的疑似瘧疾患者為卵形瘧原蟲感染。提醒出境人員出行前應(yīng)了解前往國家或地區(qū)的瘧疾流行情況和瘧疾預(yù)防措施，加強(qiáng)個人防蚊措施，必要時攜帶防蚊用品和抗瘧藥品。建議國境口岸、疾病預(yù)防控制及醫(yī)療部門應(yīng)加強(qiáng)國內(nèi)少見分布的卵形瘧病例的技術(shù)儲備，做好入境人員的輸入性瘧疾篩查、檢測和診治工作，做到早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。

來源出版物：中國人獸共患病學(xué)報, 2011, 27(10): 914-917

入選年份：2016

全國血吸蟲病疫情資料回顧性調(diào)查Ⅲ傳播控制和傳播阻斷后疫情回升地區(qū)疫情變化分析

許靜，林丹丹，吳曉華，等

摘要：目的：我國部分血吸蟲病流行區(qū)達(dá)到傳播控制和傳播阻斷標(biāo)準(zhǔn)的地區(qū)，由于防治經(jīng)費(fèi)不足、防治力度下降，或者受釘螺面積回升以及外來傳染源輸入等因素的影響，存在血吸蟲病重新流行的威脅。本文對已達(dá)到傳播控制和傳播阻斷后疫情回升地區(qū)的疫情變化情況進(jìn)行分析，以為修訂血吸蟲病控制和消滅標(biāo)準(zhǔn)、鞏固達(dá)標(biāo)地區(qū)防治成果提供參考。方法：選擇全國 7個血吸蟲病流行省中的 12個疫情回升縣（市、區(qū)），采用回顧性調(diào)查法，收集各縣達(dá)傳播控制前 10年和以后各年（至 2008年或 2009）的疫情數(shù)據(jù)及相關(guān)資料，分析其疫情變化情況及達(dá)標(biāo)后疫情回升因素。疫情回升情況按《血吸蟲病傳阻和傳控地區(qū)疫情回升評估與處理方案（試行）》相關(guān)規(guī)定判定。所有調(diào)查數(shù)據(jù)均錄入計算機(jī)，應(yīng)用 Microsoft Excel 建立數(shù)據(jù)庫，并用 SPSS 13.0、SAS 9.1.3和GraphPad Prism 5.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計分析和制圖。結(jié)果：12個調(diào)查縣（市、區(qū)）中，湖沼型、山丘型、水網(wǎng)型流行區(qū)分別為4個、7個、1個，于1970—1997年間先后達(dá)到傳播控制階段。其中 4個縣（市、區(qū)）仍處于傳播控制階段，其他8個縣市區(qū)于1983—2000年間先后達(dá)到傳播阻斷，從傳播控制到傳播阻斷歷時6～30年。共有 8個縣（市、區(qū)）分別在達(dá)傳播控制后的第 1～12年出現(xiàn)疫情回升，平均年限為5±3年，各地符合疫情回升判定標(biāo)準(zhǔn)的指標(biāo)較單一：5個縣（市、區(qū)）為“出現(xiàn)當(dāng)?shù)丶毙匝x感染”，2個縣（市、區(qū)）為“現(xiàn)有釘螺達(dá)歷史釘螺面積的10%以上”，1個縣在達(dá)傳控后1年居民或家畜感染率即＞1%，釘螺面積超過歷史累計的10%。山丘型和湖沼型流行區(qū)釘螺面積分別在達(dá)標(biāo)后第 7年和第12年回升至歷史累計有螺面積的10%以上，水網(wǎng)型流行區(qū)釘螺面積相對穩(wěn)定在較低水平；感染性釘螺密度的回升時間與活螺密度的回升高峰基本一致；湖沼型流行區(qū)在達(dá)傳控后2年居民感染率即回升至＞10%。8個傳阻縣（市、區(qū)）分別在達(dá)傳阻后的第 3～13年出現(xiàn)疫情回升，平均時間為7±4年。傳阻縣（市、區(qū)）達(dá)標(biāo)后疫情回升情況相對復(fù)雜，有 6個縣（市、區(qū)）釘螺面積回升至歷史累計有螺面積的2%以上，4個縣發(fā)現(xiàn)了當(dāng)?shù)匦赂腥镜牟∪嘶虿⌒螅?個縣查獲了感染性釘螺，其中4個縣同時出現(xiàn)了2～3項疫情指標(biāo)的回升。達(dá)傳阻后湖沼型、水網(wǎng)型和山丘型流行區(qū)的人群感染率均穩(wěn)定在較低水平，但釘螺面積在達(dá)傳阻后的3～6年先后回升至歷史累計有螺面積的2%以上，而活螺密度和感染性釘螺密度則在釘螺面積回升的當(dāng)年或隨后2～3年相繼出現(xiàn)回升。結(jié)論：受生物、自然、社會等諸多因素的影響，傳控和傳阻達(dá)標(biāo)地區(qū)疫情回升主要表現(xiàn)為螺情回升。建議修訂我國血吸蟲病控制和消滅標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)綜合考慮不同類型流行區(qū)的螺情變化規(guī)律、釘螺面積或感染性釘螺密度等因素對疫情的影響。傳控和傳阻地區(qū)應(yīng)建立敏感而有效的監(jiān)測預(yù)警體系，加強(qiáng)達(dá)標(biāo)后的疫情監(jiān)測和鞏固工作。

來源出版物：中國血吸蟲病防治雜志, 2011, 23(4):350-357

入選年份：2016