牛緒東,馮學(xué)俊,任 禾,張元瑞,李 根,劉建柱,,

1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院,山東 泰安 271018;2.中國動物疫病預(yù)防控制中心,北京 大興 100125;3.山東省動物生物工程與疾病防治重點實驗室,山東 泰安 271018;4.山東省畜禽疫病防制工程技術(shù)研究中心,山東 泰安 271018

羔羊大腸桿菌病是由腸桿菌科、埃希菌屬、大腸埃希菌(俗稱大腸桿菌)的某些致病性血清型引起羔羊的一種以劇烈腹瀉和敗血癥為特征的急性傳染病。本病主要發(fā)生于1～8周齡乃至13周齡的羔羊,有些地方也可發(fā)生于3～8月齡的綿羊和山羊,1周歲以上很少發(fā)生。筆者于2017年5月25日,在山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物保健醫(yī)院接診了來自山東省萊蕪市呂某某帶來的3月齡左右的2只病羊(綿羊和山羊)及1只病死綿羊,經(jīng)問診病情并結(jié)合病理剖檢變化和實驗室檢驗,確診為羔羊大腸桿菌病。該病例的診斷過程介紹如下。

1 發(fā)病情況

該養(yǎng)羊戶共飼養(yǎng)6月齡以內(nèi)的羔羊150只,其中綿羊120只、山羊30只,綿羊和山羊均有發(fā)病死亡,不分品種。綿羊發(fā)病36只,死亡9只;山羊發(fā)病7只,死亡2只。據(jù)統(tǒng)計,綿羊羔發(fā)病率30.00%,死亡率 7.50%,病死率 25.00%;山羊羔發(fā)病率23.33%,死亡率6.67%,病死率28.57%。該羊場總發(fā)病率27.33%,死亡率7.33%,病死率26.83%。本次病情主要發(fā)生于2～5月齡的羔羊。

2 臨床癥狀

表現(xiàn)為先咳嗽,后出現(xiàn)呼吸困難、嚴重氣喘,體溫多在41.5℃左右。隨后采食量減少至絕食,有的病羊出現(xiàn)結(jié)膜炎,多數(shù)呈現(xiàn)拉稀、脫水,站立不穩(wěn)、行走搖擺、起立困難,隨后臥地不起、頭頸歪向一側(cè)。個別病羊羔出現(xiàn)抽風(fēng)的腦神經(jīng)癥狀。經(jīng)過3～5 d的病程,最后因脫水、衰竭及自體中毒而死亡。

3 病理剖檢

尸體脫水、消瘦;瘤胃無明顯變化,網(wǎng)胃和辦胃輕度水腫,真胃嚴重水腫(見圖1),可見真胃漿膜與肌層之間出現(xiàn)一層明顯的膠胨狀水腫物(見圖2);十二指腸靠近真胃處也有輕度水腫;氣管黏膜出血,氣管與支氣管交界處有少量泡沫狀液體,肺臟淤血、出血、水腫(見圖3);心包內(nèi)有少量積液,心冠處明顯水腫,心外膜充血(見圖4);肝臟腫大、出血(見圖5),膽囊壁增厚(見圖6);脾臟輕度腫大和出血,其被膜增厚(見圖7);腎臟輕度腫大和出血(見圖8);腸系膜淋巴結(jié)腫大,切面多汁。

圖1 瘤胃無明顯變化,網(wǎng)胃和辦胃輕度水腫,真胃嚴重水腫

圖2 真胃漿膜與肌層之間有一層膠胨狀水腫

圖3 氣管黏膜出血,氣管下部有少量泡沫狀液體,肺臟淤血、出血、水腫

圖5 肝臟腫大、出血

圖6 膽囊壁增厚且輕度擴張

4 實驗室診斷

無菌取肝臟組織,于鮮血瓊脂上進行劃線接種,放在37℃條件下培養(yǎng)24 h,發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基上長出灰白色、半透明的圓形凸起,表面光滑、濕潤且不能夠溶血的菌落(見圖9)。挑取單個菌落涂片,首先用瑞氏、姬姆薩染色,鏡檢發(fā)現(xiàn)有藍色且兩端略深染的菌體(見圖10);隨之又挑取單個菌落涂片用革蘭染色,鏡檢發(fā)現(xiàn)有兩端鈍圓、散在或成對的紅色菌體(見圖11)。最后,無菌挑取7株單菌落,經(jīng)細菌16S rDNA通用引物PCR擴增,產(chǎn)物膠回收測序,測序結(jié)果經(jīng)NCBI進行BLAST,BLAST結(jié)果顯示7株分離菌中有5株為大腸桿菌,1株為巨球菌,另1株為地衣型芽孢桿菌。而巨球菌為非致病菌,地衣型芽孢桿菌為益生菌。

5 診斷結(jié)果

根據(jù)發(fā)病情況、流行病學(xué)、臨床癥狀及病理剖檢變化,初步診斷為羔羊大腸桿菌病或巴氏桿菌感染。作者又進行了實驗室檢驗,PCR檢測,本次病例最后確診為羔羊大腸桿菌病。

6 治療

藥物防治：作者參考蔣培紅等(2016)[1]所做的藥敏試驗,對6月齡以內(nèi)相對健康的羔羊,預(yù)防性肌肉注射丁胺卡那霉素,每日2次,連續(xù)3 d;對發(fā)病的羔羊除了注射丁胺卡那霉素以外,同時肌肉注射乳酸環(huán)丙沙星;對臥地不起或有腦神經(jīng)癥狀的病重羔羊,進行強心補液(5%葡萄糖氯化鈉注射液、復(fù)方氯化鈉注射液和樟腦磺酸鈉注射液)、解除自體中毒(25%葡萄糖注射液、維生素C注射液和地塞米松磷酸鈉注射液)。

疫苗免疫：應(yīng)用羊大腸桿菌滅活疫苗。為了防止本病的復(fù)發(fā),對6月齡以內(nèi)的羔羊普遍免疫注射1次;為了防止新生羔羊發(fā)病,對產(chǎn)前30～50 d的懷孕母羊及時進行免疫接種。

圖7 脾臟被膜增厚且輕度腫大、出血

圖8 腎臟輕度腫大、出血

圖9 病料劃線于鮮血瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)

圖10 單個菌落涂片瑞氏染色

回訪結(jié)果：作者1月后回訪,畜主按照上述處理方案操作,病羊3 d后好轉(zhuǎn),7 d后基本痊愈,沒有再出現(xiàn)病死羊,也沒有再出現(xiàn)新的病例。

圖11 單個菌落涂片革蘭染色

7 小結(jié)

羔羊大腸桿菌病的臨床診斷要點：精神沉郁、咳嗽、氣喘、拉稀;剖檢特點：真胃壁水腫(應(yīng)是本病的特征性變化),肺臟淤血、出血、水腫及腸系膜淋巴結(jié)腫大、切面多汁;實驗室診斷方法有細菌分離培養(yǎng),大腸桿菌染色鏡檢,有條件時可進一步進行PCR檢測等進行確診。

確診本病后,作者根據(jù)文獻資料立即給畜主制定出防治方案,選用丁胺卡那霉素和環(huán)丙沙星聯(lián)合給藥,病重者結(jié)合強心補液解毒的方法,確實取得了滿意的療效。有條件的應(yīng)該自己做藥敏試驗,方為最妥。

對于防制羔羊大腸桿菌病應(yīng)以免疫接種為主,主要選用生物制品廠生產(chǎn)的羊大腸桿菌滅活疫苗,最好使用從本場自然死亡的患病羔羊體內(nèi)分離到的大腸桿菌制備的滅活疫苗(自家苗)。懷孕母羊產(chǎn)前30～50 d進行免疫接種,使新生羔羊出生后就能獲得有效保護[2];3月齡以上的羔羊群應(yīng)進行免疫接種,保護期可持續(xù)5個月[3]。