任緒華 蘇婷 姜文月 李亞?wèn)| 崔憲利 于園園 高陸＊

1 長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué) （吉林 長(zhǎng)春 130000）2 吉林省現(xiàn)代中藥工程研究中心有限公司 （吉林 長(zhǎng)春 130000）3 吉林長(zhǎng)白山藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司 （吉林 白山 134300）

精芪雙參膠囊由黃芪、黃精、人參、丹參組成。其中君藥黃芪主要成分黃芪甲苷在本藥物藥效中起到了主要作用。本研究依據(jù)CFDA部頒標(biāo)準(zhǔn)對(duì)精芪雙參膠囊中黃芪甲苷進(jìn)行含量測(cè)定并與聲光可調(diào)-近紅外光譜技術(shù)（AOTFNIR）相關(guān)聯(lián)，建立一種快速無(wú)損測(cè)定黃芪甲苷含量的新方法。

1.材料

1.1 儀器

Luminar-5030聲光可調(diào)近紅外光譜分析儀（BRIMROSE公司），L-3000高效液相色譜-蒸發(fā)光檢測(cè)儀（RIGOL公司）。

1.2 試劑

黃芪甲苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110781-201515，純度93%）；乙腈（Fisher）；高純氮?dú)?；超純水?/p>

1.3 藥物

由于建立模型所用樣品含量范圍和分布情況直接影響校正模型的預(yù)測(cè)性能[1]，本研究收集不同時(shí)期生產(chǎn)的不同批次的精芪雙參膠囊樣品80批（校正集樣品70批、驗(yàn)證集樣品10批）。

2.方法與結(jié)果

2.1 光譜采集

取校正集樣品，倒入光譜采集槽中，在1100～2300nm掃描，掃描間隔2.0nm，掃描次數(shù)300次[2,3]。每批次樣品掃描3次，得到校正集樣品光譜圖。驗(yàn)證集10批樣品與校正集樣品操作一致，見(jiàn)圖1～2。

圖1. NIR校正集原始光譜

圖2. NIR驗(yàn)正集原始光譜

2.2 指標(biāo)檢測(cè)

上述80批樣品黃芪甲苷含量測(cè)定依照CFDA部頒標(biāo)準(zhǔn)WS-5136（B-0136）-2014Z檢查項(xiàng)下方法進(jìn)行檢測(cè)。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水（36﹕64）為流動(dòng)相；流速0.8mL/min；柱溫40?C；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，氣體流速2.7L/min。理論塔板數(shù)按黃芪甲苷峰計(jì)算應(yīng)不低于6000。

對(duì)照品溶液的制備：取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每0.45mg/mL的溶液，即得。

供試品溶液的制備：取約本品內(nèi)容物2.5g，用2%氫氧化鉀的甲醇溶液加熱回流2次，分別為1h、0.5h，每次加溶液50mL，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜崴?0mL使溶解，以三氯甲烷-正丁醇（2﹕1）的混合溶劑萃取4次，每次30mL，分取下層溶液，蒸干，加甲醇使殘?jiān)芙獠⒍ㄈ葜?mL量瓶中，搖勻，即得。

測(cè)定法：分別精密吸取5μL、20μL對(duì)照品溶液，10μL供試品溶液，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，以外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算對(duì)數(shù)方程，即得。測(cè)定色譜圖見(jiàn)圖3～4。

圖3. 對(duì)照品黃芪甲苷HPLC-ELSD圖

圖4. 樣品黃芪甲苷HPLC-ELSD圖

2.3 NIR定量校正模型建立與驗(yàn)證

為消除噪音和基線漂移等影響，用prospect軟件對(duì)原始光譜進(jìn)行一階導(dǎo)數(shù)九點(diǎn)平滑預(yù)處理[3]。采用PLS法將測(cè)定結(jié)果與經(jīng)過(guò)預(yù)處理光譜進(jìn)行關(guān)聯(lián)，用CAMO化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件建立模型，以交叉-驗(yàn)證法建立各指標(biāo)校正模型[4]。經(jīng)篩選優(yōu)化，得到黃芪甲苷PLS模型。見(jiàn)圖5。利用驗(yàn)正集樣品對(duì)已建立的校正模型進(jìn)行預(yù)測(cè)分析，預(yù)測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

圖5. 黃芪甲苷PLS模型

表1. 黃芪甲苷的預(yù)測(cè)結(jié)果(%)

黃芪甲苷校正模型顯示，所建立模型R2=0.9533，RMSEC=0.0066，RMSEP=0.0163，性能較好。驗(yàn)證集樣品驗(yàn)證結(jié)果顯示，黃芪甲苷的實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值偏差為2.02%，精芪雙參膠囊中黃芪甲苷采用常規(guī)檢測(cè)方法測(cè)定的實(shí)測(cè)值與NIR校正模型預(yù)側(cè)值之間相關(guān)性良好，測(cè)定準(zhǔn)確性較高。

3.討論

本研究利用AOTF-NIR技術(shù)，建立黃芪甲苷校正模型后，無(wú)需長(zhǎng)時(shí)間樣品處理，便可快速、無(wú)損預(yù)測(cè)精芪雙參膠囊中黃芪甲苷的含量，預(yù)測(cè)結(jié)果較為準(zhǔn)確，且能夠滿足生產(chǎn)中精芪雙參膠囊中黃芪甲苷的檢測(cè)需求。本研究不僅縮短了精芪雙參膠囊的檢測(cè)周期、減少耗材使用、降低檢測(cè)成本，而且能夠?qū)崿F(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)分析和在線應(yīng)用[5]。若進(jìn)一步增加樣本數(shù)量，擴(kuò)大樣本的覆蓋范圍，可以建立更加穩(wěn)定的模型，為精芪雙參膠囊質(zhì)量控制提供快速、高效的檢測(cè)方法。

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