周春寧，溫長康

（江蘇省疾病預防控制中心總務科，江蘇 南京 210009）

疫苗熱敏標簽（簡稱VVM）采用新型溫度監(jiān)測技術，使疫苗接種管理人員無需借助其他工具即可判斷疫苗有效性［1］，在高溫暴露等突發(fā)事件發(fā)生后直接將失效疫苗從有效疫苗中分離出去，減少有效疫苗報廢情形，節(jié)約接種成本［2，3］。目前，某國產公司可根據(jù)不同類型疫苗耐熱穩(wěn)定性針對性地研制對應VVM，提高VVM冷鏈監(jiān)測的精準性。本文旨在研究37℃恒溫狀態(tài)下OPV、滅活甲肝、減毒乙腦等第一類疫苗與對應VVM失效變化情況，評價上述VVM的可靠性。

1 材料與方法

1.1 樣品

VVM由蘇州華實熱敏科技有限公司生產提供，型號分別為QM5D37A（OPV疫苗）、QM9D37CA（滅活甲肝疫苗）、QM9D37CA（減毒乙腦疫苗），樣本份數(shù)80份，采用隨機數(shù)字表法從不同批次中抽樣得到。VVM對應疫苗由國產疫苗企業(yè)生產提供，樣本份數(shù)80份，用隨機數(shù)字表法從不同批次中抽樣得到。

VVM主要包含參照圓圈和活性區(qū)域。參照圓圈顏色固定不變，為活性區(qū)域提供參照；活性區(qū)域起始為白色，顏色隨高溫暴露不可逆地逐漸加深。當活性區(qū)域顏色加深至參照圓圈顏色時，VVM提示疫苗失效。

1.2 熱敏標簽顏色變化測量方法

采用隨機數(shù)字表法，將VVM置于水浴恒溫箱中，定期測量活性區(qū)域顏色。該顏色采用CIELAB色彩空間描述［4］，空間坐標包含L*（代表亮度，L*=0生成黑色而L*=100指示白色），a*（代表色度，a*負值指示綠色而正值指示品紅）和b*（代表色度，b*負值指示藍色而正值指示黃色），把活性區(qū)域顏色與參照圓圈顏色分別處理為L*a*b*三維空間的兩個點，并計算在它們之間的歐幾里得距離ΔE。當ΔE=0時，活性區(qū)域顏色與參照圓圈顏色相同，標簽提示失效。

1.3 疫苗有效性測量方法

1.3.1 OPV滴度變化測量方法。以人喉癌細胞（Hep-2細胞）作為病毒生長的細胞基質，將OPV作10倍系列稀釋，并接種人喉癌細胞，置二氧化碳培養(yǎng)箱35～36℃培養(yǎng)7天，觀察和記錄細胞病變，以發(fā)生50%細胞病變的最高稀釋度為滴定終點，按Kar?ber法計算結果。進行分型病毒滴定時脊髓灰質炎抗血清完全中和其中一型，用微量法滴定第二型。

1.3.2 滅活甲肝疫苗有效性測量方法。采用體外相對效力檢查法，即以酶聯(lián)免疫法測試供試品甲肝病毒抗原含量，并以參比疫苗為標準，計算樣本疫苗的相對效力，應不低于0.75。

1.3.3 減毒乙腦疫苗滴度變化測量方法。取樣本作10倍系列稀釋，至少取3個稀釋度的病毒液，分別接種BHK21細胞，用蝕斑法進行滴定，疫苗病毒滴度應不低于應5.7 LgPFU/ml，病毒滴度下降應不高于1.0 Lg PFU/ml。

1.4 VVM可靠性評價

根據(jù)實驗數(shù)據(jù)繪制VVM顏色和對應疫苗有效性變化擬合曲線圖與統(tǒng)計表，橫坐標為測量時間，縱坐標為失效VVM與疫苗例數(shù)。根據(jù)擬合曲線圖計算VVM和對應疫苗失效時間范圍，如VVM最晚失效時間早于疫苗最早失效時間，標簽具有可靠性。兩者時間越接近，VVM可靠性越高。

2 結果

37℃下疫苗滴度變化情況及對應樣本標簽失效情況：（1）OPV失效時間范圍為4～5.5 d，對應標簽失效時間范圍為3.1～4 d（詳見表1）；（2）滅活甲肝疫苗失效的時間范圍為15～29 d，對應標簽失效時間范圍為10～12 d（詳見表2）；（3）減毒乙腦疫苗失效的時間范圍為14～26 d，對應標簽失效時間范圍為10～12 d（詳見表3）。綜上，所有標簽最晚失效時間均早于疫苗最早失效時間，均具有可靠性。

表1 37℃下OPV樣本疫苗與QM5D37A樣本標簽失效情況表

表2 37℃下滅活甲肝樣本疫苗與對應樣本標簽失效情況表

表3 37℃下減毒乙腦樣本疫苗與對應樣本標簽失效表

3 討 論

疫苗失效時，標簽是否已失效是評價VVM可靠性的方法。疫苗失效而標簽未失效，VVM不可靠。VVM與對應疫苗失效速率不可能完全相同，VVM失效時間均須短于對應疫苗失效時間，才能確保標簽可靠。由于VVM之間、疫苗之間失效速率均存在一定誤差，兩者失效時間有一定范圍。因此，只有VVM最小失效速率（標簽最晚失效時間）大于疫苗最大失效速率（疫苗最早失效時間），VVM才完全具備可靠性，兩者時間越接近，可靠性越高。

所有疫苗的效價都會隨著時間衰減，溫度升高會加速效價的衰減。不同的疫苗品種對于溫度的敏感性不同，不同廠家生產的產品也有著不同的熱穩(wěn)定性。OPV疫苗、減毒乙腦等減毒類疫苗熱穩(wěn)定性與選育的菌毒種類型、原液與半成品病毒滴度、儲存溫度、制造水平等因素有關，滅活甲肝等滅活類疫苗熱穩(wěn)定性與抗原類型、純化工藝、實際抗原含量、儲存溫度等因素有關［5，6］。根據(jù)疫苗熱穩(wěn)定實驗得知，37℃下OPV、滅活甲肝、減毒乙腦疫苗最早失效時間分別為4、15、14天，熱穩(wěn)定性遠高于國家藥典標準。根據(jù)VVM熱穩(wěn)定實驗得知，37℃對應樣本標簽最晚失效時間分別為4、12、12天，標簽均于疫苗失效前到達終點，具有可靠性；OPV熱敏標簽與疫苗失效時間最接近，可靠性最高；減毒乙腦熱敏標簽與疫苗失效時間相差2天，可靠性較高；滅活甲肝熱敏標簽與疫苗失效時間相差3天，可靠性最低。

目前，國家通過條例政策鼓勵疫苗產品使用熱敏標簽，VVM的普及是當前疫苗冷鏈管理工作的一大趨勢，VVM的正確應用將有助于提高大規(guī)模疫苗接種的安全性［7-9］。

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