朱立新 許瑞軍

不規(guī)則抗體是引起臨床輸血反應(yīng)的主要原因之一［1-2］。為確保臨床輸血安全，要求對既往有輸血、妊娠、血液病史［3-4］的所有受血者和供血者等都常規(guī)檢測不完全抗體以及受血者和供血者交叉配血是否相容［5］。1984年Yves lapierre博士發(fā)明了微柱凝膠技術(shù)，1988年瑞士達(dá)亞美公司將專利產(chǎn)品推向市場。這一技術(shù)是基于游離紅細(xì)胞和聚集紅細(xì)胞能否通過具有分子篩作用的凝膠顆粒構(gòu)成的膠體介質(zhì)的原理，從而使不同狀態(tài)的紅細(xì)胞得以分離，是一種在微柱管中用凝膠介質(zhì)進(jìn)行的凝集反應(yīng)。微柱凝膠廣譜抗人球蛋白試劑檢測卡是微柱凝膠技術(shù)和抗人球蛋白試驗方法相結(jié)合的新型產(chǎn)品，近年來在國內(nèi)外得到廣泛應(yīng)用。在日常工作中，對用于交叉配血的紅細(xì)胞懸液或不規(guī)則抗體篩選譜的紅細(xì)胞懸液，是用生理鹽水還是低離子強(qiáng)度鹽溶液配制的問題，似乎并未引起多數(shù)業(yè)務(wù)人員的足夠重視，而其對微柱凝集法試驗結(jié)果的影響，也未有太多報道。對此，本研究收集本院3 125例受血者交叉配血及不規(guī)則抗體篩選標(biāo)本和3 125例供血者的血液標(biāo)本，分別用生理鹽水、低離子強(qiáng)度鹽溶液配制的紅細(xì)胞懸液進(jìn)行微柱凝集法交叉配血和抗篩試驗，探討兩種紅細(xì)胞配制方法在微柱凝集法交叉配血試驗和不規(guī)則抗體檢測中的影響。

1 材料與方法

1.1 檢測對象 收集2015年10月—2016年12月本院3 125例門診與住院申請輸血和手術(shù)備血患者（受血者）的交叉配血標(biāo)本和紅細(xì)胞不規(guī)則抗體檢測標(biāo)本，以及3 125例供血者的血液標(biāo)本，其中受血者血樣于輸血前3 d內(nèi)采集。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 微柱凝集卡（IgG+C3d檢測卡）和2號稀釋液（ID-Diluent 2）為瑞士達(dá)亞美公司產(chǎn)品；低離子強(qiáng)度鹽溶液和抗人球蛋白檢測卡為長春博迅生物技術(shù)公司產(chǎn)品；生理鹽水為四川科倫藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品。儀器為瑞士達(dá)亞美公司微柱凝膠卡專用孵育器及離心機(jī)、長春博研醫(yī)用離心機(jī)。

1.2.2 低離子強(qiáng)度鹽溶液的配制 將NaCl、甘氨酸、葡萄糖和磷酸鹽按設(shè)定的比例混合，加入防腐劑后，調(diào)整pH至6.6～6.8。

1.2.3 交叉配血試驗 用EDTA-K2抗凝管采集患者血液2.0～3.0 mL，以3 000 r/min（離心半徑為12 cm），離心5 min后分離血漿。取受血者與供血者紅細(xì)胞，分別用生理鹽水、低離子強(qiáng)度鹽溶液配成0.8%的紅細(xì)胞懸液?？谷饲虻鞍讬z測卡主側(cè)管加入受血者血漿50 μL和供血者0.8%的紅細(xì)胞懸液50 μL，次側(cè)管中加入供血者血漿50 μL和受血者0.8%的紅細(xì)胞懸液50 μL，置37 ℃孵育15 min，用長春博研醫(yī)用離心機(jī)離心5 min，觀察結(jié)果。用達(dá)亞美2號稀釋液配制的0.8%紅細(xì)胞懸液，達(dá)亞美微柱凝膠卡主側(cè)管加入受血者血漿25 μL和供血者的0.8%紅細(xì)胞懸液50 μL，次側(cè)管中加入供血者的血漿25 μL和受血者的0.8%紅細(xì)胞懸液50 μL，置37 ℃孵育15 min，達(dá)亞美專用離心機(jī)離心10 min，觀察并記錄交叉配血結(jié)果。

1.2.4 不規(guī)則抗體篩檢 用無添加劑的普通管采集受血者血液3.0～4.0 mL，以3 000 r/min（離心半徑為12 cm），離心5 min后分離血清，將篩選譜紅細(xì)胞分別用生理鹽水、低離子強(qiáng)度鹽溶液配成0.8%的紅細(xì)胞懸液。分別在標(biāo)記好的抗人球蛋白檢測卡微管中加入篩選譜紅細(xì)胞各1滴（或50 μL），后立即加入被檢者血清 1 滴（或 50 μL），置 37 ℃孵育 15 min，用長春博研醫(yī)用離心機(jī)離心5 min，觀察結(jié)果。用達(dá)亞美2號稀釋液將譜紅細(xì)胞配制成0.8%的紅細(xì)胞懸液，分別在標(biāo)記好的達(dá)亞美微柱凝膠卡微管中加入篩選譜紅細(xì)胞各1滴（或50 μL），之后立即加入被檢者血清25 μL，置37 ℃孵育15 min，用達(dá)亞美專用離心機(jī)離心10 min，觀察并記錄抗篩結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料以率或百分比表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種介質(zhì)紅細(xì)胞懸液交叉配血和抗體篩檢結(jié)果陽性率比較 6 250份交叉配血標(biāo)本用低離子強(qiáng)度鹽溶液配制紅細(xì)胞懸液，微柱凝集法交叉配血，檢測出現(xiàn)58例陽性反應(yīng)；用生理鹽水配制的紅細(xì)胞懸液檢測出現(xiàn)33例陽性反應(yīng)。6 250份紅細(xì)胞不規(guī)則抗體檢測標(biāo)本（含3 125份供血者血樣）用低離子強(qiáng)度鹽溶液配制紅細(xì)胞懸液，微柱凝集法進(jìn)行抗體篩檢，檢測出現(xiàn)62例陽性反應(yīng)；用生理鹽水配制的紅細(xì)胞懸液檢測出現(xiàn)42 例陽性反應(yīng)。兩種介質(zhì)紅細(xì)胞懸液交叉配血、抗體篩檢結(jié)果陽性率比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。見表1和表2。

2.2 兩種介質(zhì)紅細(xì)胞懸液交叉配血和抗體篩檢反應(yīng)強(qiáng)度比較 在微柱凝膠卡的反應(yīng)凝集強(qiáng)度用生理鹽水配制的紅細(xì)胞懸液較低離子強(qiáng)度鹽溶液配制的紅細(xì)胞懸液敏感性明顯降低，尤其在（3+）～（4+）的凝集反應(yīng)強(qiáng)度下，低離子強(qiáng)度鹽溶液法較生理鹽水法檢測敏感性明顯升高，提高了反應(yīng)強(qiáng)度，增加了檢測的準(zhǔn)確性。兩種介質(zhì)紅細(xì)胞懸液交叉配血、抗篩檢測反應(yīng)強(qiáng)度比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。見表3和表4。

表1 生理鹽水和低離子強(qiáng)度鹽溶液兩種介質(zhì)紅細(xì)胞懸液交叉配血試驗結(jié)果比較

表2 生理鹽水和低離子強(qiáng)度鹽溶液兩種介質(zhì)紅細(xì)胞懸液不規(guī)則抗體篩查結(jié)果比較

表3 生理鹽水和低離子強(qiáng)度鹽溶液兩種介質(zhì)紅細(xì)胞懸液交叉配血試驗反應(yīng)強(qiáng)度比較

表4 生理鹽水和低離子強(qiáng)度鹽溶液兩種介質(zhì)紅細(xì)胞懸液不規(guī)則抗體篩查反應(yīng)強(qiáng)度比較

3 討論

低離子強(qiáng)度鹽溶液主要由葡萄糖，NaCl，甘氨酸及防腐劑等組成。由于低離子強(qiáng)度鹽溶液可降低介質(zhì)的離子強(qiáng)度，且降低紅細(xì)胞的Zeta電位可增加抗原抗體結(jié)合［6-7］，從而使原來在鹽水介質(zhì)中不能凝集紅細(xì)胞的抗體發(fā)生凝集。交叉配血試驗和不規(guī)則抗體篩檢試驗的陽性檢測率在低離子強(qiáng)度鹽溶液介質(zhì)中均顯著增加，檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性明顯提高。

本研究的檢測結(jié)果說明，用低離子強(qiáng)度鹽溶液稀釋紅細(xì)胞時，其檢測靈敏度明顯高于用生理鹽水。我們認(rèn)為，低離子強(qiáng)度鹽溶液用于微柱凝集法交叉配血試驗和不規(guī)則抗體篩檢有很多優(yōu)點： ① 使用低離子強(qiáng)度鹽溶液稀釋紅細(xì)胞，可使抗原抗體的結(jié)合能力增強(qiáng)，大大減少了孵育時間，使輸血相關(guān)試驗的檢測效率增加［8］； ② 增加了不規(guī)則抗體的檢出率，尤其是弱抗體或低濃度抗體的檢出率，提高了輸血安全性； ③ 提高了微柱凝集法交叉配血和抗篩檢測試驗的敏感性，且結(jié)果穩(wěn)定［2，9-10］。值得注意的是，低離子強(qiáng)度鹽溶液并不適合用作紅細(xì)胞儲存溶液，紅細(xì)胞在低離子強(qiáng)度鹽溶液的儲存時間超過12 h后，會耗損部分抗原。在配制紅細(xì)胞懸液時尚需注意紅細(xì)胞的稀釋濃度，以便獲得最佳離子強(qiáng)度，而改變紅細(xì)胞濃度可能會影響間接抗人球蛋白試驗的特異性或敏感性［11］。采取適當(dāng)?shù)姆椒ū４娴碗x子強(qiáng)度鹽溶液，也是確保交叉配血試驗結(jié)果可靠性的重要手段［12］?？傊?，在實際臨床輸血過程中，影響因素很多且無法避免［13-15］。首先應(yīng)嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行試驗操作，以確保試驗的準(zhǔn)確性；同時應(yīng)運用微柱凝集法、凝聚胺法和生理鹽水法等多種方法聯(lián)合配血，有助于最大限度地減少輸血事故的發(fā)生，保證臨床輸血安全。

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