張家寧 周偉平

膽管細(xì)胞癌(cholangiocarcinoma，CCA)是來源于肝臟的原發(fā)性腫瘤，其惡性程度高、隱匿性強(qiáng)，多數(shù)病人發(fā)現(xiàn)時(shí)已經(jīng)是中晚期，不再適合手術(shù)治療[1]?；瘜W(xué)治療(化療)是膽管細(xì)胞癌治療的重要方式，目前主要化療藥物是以吉西他濱為主，而一部分病人在接受化療后出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象[2]，因此探究吉西他濱在治療膽管細(xì)胞癌過程中的耐藥機(jī)制，有利于解決臨床上遇到的問題。

一、非編碼RNA介導(dǎo)的耐藥機(jī)制

常見的非編碼RNA(ncRNAs)包含microRNAs(miRNAs)以及長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)等，它們作為一種多功能調(diào)節(jié)因子在癌癥進(jìn)程中行使重要功能，在很多腫瘤細(xì)胞的耐藥機(jī)制中也發(fā)揮重要作用[3]。而使用吉西他濱作為化療藥的腫瘤，其耐藥過程中非編碼RNA涉及的調(diào)控也較為常見，已經(jīng)有很多研究發(fā)現(xiàn)包括膽管細(xì)胞癌在內(nèi)的很多腫瘤類型，mirRNA在這些腫瘤耐藥形成過程扮演著重要角色[4-5]。Asukai等[6]在CCLP-1和MzChA-1這兩種膽管癌細(xì)胞株研究中發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)miR-130a-3p后，其通過作用于PPARG(miR-130a-3p的靶基因)，使得癌細(xì)胞對(duì)于吉西他濱的耐藥性增加。Silakit等[7]發(fā)現(xiàn)，MicroRNA-210(miR-210)的過表達(dá)可以間接降低膽管癌細(xì)胞對(duì)吉西他濱的敏感性，其機(jī)制是MicroRNA-21通過抑制缺氧誘導(dǎo)因子(hypoxia inducible factor，HIF)3α以維持HIF-1α的活性，而HIF-1α使得細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性產(chǎn)生了影響從而導(dǎo)致了耐藥的發(fā)生。以上證實(shí)了一些mirRNA在癌細(xì)胞的耐藥過程中起了促進(jìn)作用。而有一些mirRNA行使了相反的功能，Okamoto等[8]發(fā)現(xiàn)在HuH28細(xì)胞株中，miR-29b、miR-205以及miR-221可以在膽管癌細(xì)胞中提高吉西他濱的藥物敏感性。以上證實(shí)了mirRNA在膽管癌細(xì)胞的耐藥中，發(fā)揮著巨大價(jià)值，這也為減少耐藥現(xiàn)象的產(chǎn)生提供了新的治療思路。隨著新的mirRNA分子不斷被挖掘，其作用的直接分子靶點(diǎn)被探明后，針對(duì)耐藥病人的個(gè)性化治療將是未來研究的方向。除了miRNA在吉西他濱的耐藥機(jī)制中發(fā)揮作用，Parasramka等[9]發(fā)現(xiàn)lncRNA在耐藥過程中也有參與，NEAT-1(一種lncRNA)可作為BAP1基因下游的調(diào)節(jié)因子，NEAT-1依賴于BAP1表達(dá)的變化而改變，對(duì)吉西他濱的耐藥性進(jìn)行調(diào)節(jié)。隨著人們對(duì)非編碼RNA的研究不斷深入，發(fā)現(xiàn)它們?cè)谀[瘤中起著越來越重要的作用，而一些較新的非編碼RNA如circRNA在膽管癌細(xì)胞中耐藥機(jī)制的探究還相對(duì)較少，可能會(huì)成為今后研究的重要方向。

二、特定編碼基因介導(dǎo)的耐藥機(jī)制

除了非編碼RNA在癌細(xì)胞的耐藥機(jī)制中發(fā)揮著調(diào)控作用，很多編碼基因產(chǎn)生的酶或蛋白產(chǎn)物也對(duì)腫瘤細(xì)胞的耐藥產(chǎn)生影響。Ohtaka等[10]通過不同的膽管癌細(xì)胞株進(jìn)行驗(yàn)證，通過對(duì)G-415(膽管癌細(xì)胞株)中核糖核苷酸還原酶M1(rrm1)基因進(jìn)行敲減，導(dǎo)致rrm1的表達(dá)水平下降，而癌細(xì)胞對(duì)于吉西他濱的敏感性卻顯著升高，由此推測(cè)rrm1與癌細(xì)胞的藥物敏感性有著密切關(guān)聯(lián)，提示在晚期膽管癌病人化療的耐藥機(jī)制中rrm1基因可作為一個(gè)關(guān)鍵基因進(jìn)行深入研究。Tsukagoshi等[11]發(fā)現(xiàn)Karyopherin-α2基因可通過運(yùn)輸DNA修復(fù)元件進(jìn)入細(xì)胞核，通過介導(dǎo)核質(zhì)運(yùn)輸進(jìn)而對(duì)吉西他濱在膽管癌細(xì)胞中敏感性產(chǎn)生影響。

Zeekpudsa等[12]發(fā)現(xiàn)在其他癌癥中，醌氧化還原酶-1(NQO1)在化療藥物的耐藥現(xiàn)象中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，因此他們利用KKU-100和KKU-M214兩種膽管癌細(xì)胞株進(jìn)行驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)在NQQ1基因水平高表達(dá)的KKU-100細(xì)胞株里，敲減NQQ1基因后其對(duì)于吉西他濱的藥物敏感性增加。而在NQQ1基因水平低表達(dá)的KKU-M214細(xì)胞株里對(duì)NQQ1基因進(jìn)行過表達(dá)實(shí)驗(yàn)，其對(duì)吉西他濱的藥物敏感性降低，這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)充分說明了細(xì)胞中NQQ1基因的水平與化療藥的耐藥性呈負(fù)相關(guān)。Kittirat等[13]發(fā)現(xiàn)在膽管癌細(xì)胞中14-3-3ζ蛋白起著重要的調(diào)節(jié)作用，它可通過磷酸化-AKT(PAKT)的激活對(duì)膽管癌細(xì)胞的增殖產(chǎn)生促進(jìn)作用，而通過降低癌細(xì)胞中14-3-3ζ蛋白的水平，可提高癌細(xì)胞對(duì)吉西他濱的敏感性，從而提示針對(duì)編碼基因14-3-3ζ異常表達(dá)的膽管癌病人，可進(jìn)行特異性靶向藥物，這也成為今后對(duì)膽管癌病人個(gè)性化治療的新策略。Quintavalle等[14]發(fā)現(xiàn)高遷移率族蛋白A1(Hmga1)在膽管癌細(xì)胞中高表達(dá)，通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)其編碼基因Hmga1的過表達(dá)可引起癌細(xì)胞的增殖并且產(chǎn)生了對(duì)化療藥物抵抗的現(xiàn)象。

三、信號(hào)通路異常介導(dǎo)的耐藥機(jī)制

細(xì)胞之間的信息交流是依賴于信號(hào)通路的作用，而信號(hào)通路的異常會(huì)導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[15-16]。信號(hào)通路的異常也會(huì)對(duì)腫瘤細(xì)胞的耐藥性產(chǎn)生影響[17-18]。

失巢凋亡是細(xì)胞一種特異的凋亡程序[19]，可防止細(xì)胞種植在不適宜的地方。而當(dāng)抗失巢凋亡現(xiàn)象產(chǎn)生時(shí)，正常細(xì)胞則易向癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化[20]。Huyen等[21]發(fā)現(xiàn)在HuCCT1和Huh28兩種膽管癌癌細(xì)胞株中，通過條件誘導(dǎo)引起抗失巢凋亡現(xiàn)象后，STAT3信號(hào)通路會(huì)變得異常，而此時(shí)癌細(xì)胞對(duì)于吉西他濱的耐藥性增加，因此推測(cè)STAT3信號(hào)通路的異常很可能與癌細(xì)胞的耐藥關(guān)系相關(guān)，而針對(duì)STAT3信號(hào)通路的靶向治療也可能成為今后耐藥研究的新方向。Matsumoto等[22]發(fā)現(xiàn)吉西他濱作用于膽管癌細(xì)胞株(HuCCT-1)后，可在G1期引起細(xì)胞周期阻滯，但是未觀察到細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，并發(fā)現(xiàn)吉西他濱可激活膽管癌細(xì)胞檢查點(diǎn)激酶CHK1以及胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)，而通過MEK抑制劑抑制ERK/CHK/1信號(hào)通路后，可以觀察到癌細(xì)胞死亡的現(xiàn)象，因此推測(cè)吉西他濱的耐藥和ERK/CHK/1信號(hào)通路有密切關(guān)聯(lián)。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在細(xì)胞的增殖、分化、凋亡、免疫調(diào)節(jié)等過程都有所參與，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的異常也因此和癌癥的形成密切相關(guān)[15,23]。以上研究說明，與其他腫瘤類似，在膽管癌細(xì)胞的形成過程中，信號(hào)通路的異常也起到了關(guān)鍵作用，但是至今關(guān)于膽管癌細(xì)胞中異常的信號(hào)通路的發(fā)現(xiàn)還是相對(duì)比較少，在今后的研究中，隨著介導(dǎo)膽管細(xì)胞癌的信號(hào)通路新成員被不斷發(fā)現(xiàn)，其分子機(jī)制被研究透徹后，可能將有更多針對(duì)異常信號(hào)通路的特異性分子藥物被篩選出來，當(dāng)發(fā)生耐藥現(xiàn)象時(shí)，針對(duì)不同病人的個(gè)體化治療方案將大大改善耐藥后療效不佳的情況。

四、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化介導(dǎo)的耐藥機(jī)制

眾所周知，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transformation mediated, EMT)與癌細(xì)胞的進(jìn)展、轉(zhuǎn)移等有著密切關(guān)聯(lián)，而在腫瘤細(xì)胞耐藥方面，EMT也發(fā)揮著重要作用[24]。

Lu等[25]在膽管細(xì)胞癌的細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)，在吉西他濱聯(lián)合肝素結(jié)合細(xì)胞因子作用于膽管癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)組，對(duì)比吉西他濱單藥作用的膽管癌細(xì)胞對(duì)照組，有肝素細(xì)胞結(jié)合因子的實(shí)驗(yàn)組促進(jìn)了膽管癌細(xì)胞的EMT，并且引起了耐藥現(xiàn)象，而當(dāng)通過干預(yù)試驗(yàn)阻斷EMT的進(jìn)程時(shí)，其耐藥現(xiàn)象也不再發(fā)生，由此推測(cè)癌細(xì)胞的EMT在吉西他濱的耐藥過程發(fā)揮重要作用。Yamada等[26]也發(fā)現(xiàn)通過白細(xì)胞介素6和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1之間的相互作用可以影響EMT的發(fā)生，進(jìn)而在癌細(xì)胞耐藥中產(chǎn)生影響。

五、總結(jié)和展望

本文分別從非編碼RNA、編碼基因、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路以及EMT等方面對(duì)吉西他濱在膽管癌細(xì)胞中的耐藥機(jī)制進(jìn)行了闡述，目前吉西他濱仍然作為膽管癌病人的一線化療的主要藥物，而在出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象后并沒有特別好的治療辦法。因此，對(duì)于膽管癌病人接受吉西他濱治療后出現(xiàn)的耐藥機(jī)制的深入探究，有助于發(fā)現(xiàn)更多的耐藥分子以及特異性靶點(diǎn)，對(duì)于特異位點(diǎn)或通路的靶向治療可能將成為今后耐藥性研究的主要方向[27]，而這也符合對(duì)于不同病人的個(gè)性化及精準(zhǔn)化治療原則。隨著吉西他濱在其他癌癥(例如胰腺癌)中耐藥現(xiàn)象不斷被發(fā)現(xiàn)[28]，其耐藥機(jī)制與膽管癌是否存在互通點(diǎn)和相似性，即不同腫瘤之間的交互對(duì)話，為今后耐藥研究提供了新思路?？傊魉麨I在膽管細(xì)胞癌中耐藥的確切機(jī)制值得更深入研究，這有助于發(fā)現(xiàn)新的藥物甚至攻克膽管細(xì)胞癌。