劉營(yíng)營(yíng)，岳治光，王學(xué)良，張素梅，菅復(fù)春，張龍現(xiàn)，王榮軍，孫　珂，寧長(zhǎng)申*(.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 牧醫(yī)工程學(xué)院，河南 鄭州 45000； .河南安進(jìn)生物技術(shù)股份有限公司，河南 鄭州 45000)

伊維菌素是阿維菌素類催化加氫的產(chǎn)物[1-2]，也是目前世界上使用最廣泛的獸用抗寄生蟲(chóng)藥物之一。與阿維菌素相比，伊維菌素具有驅(qū)蟲(chóng)效果更好、穩(wěn)定性更強(qiáng)、毒副作用更低、安全性更高的特點(diǎn)，在組織、血液濃度較低時(shí)即可殺滅各種線蟲(chóng)和蜱、螨等各種體外寄生蟲(chóng)[3-5]。因此，伊維菌素一經(jīng)出現(xiàn)，便迅速受到廣大養(yǎng)殖戶的歡迎[6]，并被廣泛應(yīng)用于各種線蟲(chóng)和蜱、螨等各種體外寄生蟲(chóng)的預(yù)防和治療[7-9]。伊維菌素現(xiàn)已被制成口服劑、注射劑、膠囊劑、透皮劑、軟膏、搽劑、長(zhǎng)效控釋及緩釋劑等多種劑型藥[10-13]。藥物經(jīng)皮膚進(jìn)入體內(nèi)時(shí)速度相對(duì)緩慢，避免肝臟的首過(guò)效應(yīng)，持效時(shí)間長(zhǎng)且可提高進(jìn)入機(jī)體后的利用率；而且透皮給藥方便，對(duì)各種家畜給藥都簡(jiǎn)單易行，可以減少動(dòng)物的應(yīng)激[14-17]。但目前市場(chǎng)上的透皮劑類藥物持效時(shí)間短、需反復(fù)多次用藥，為此，研制伊維菌素長(zhǎng)效透皮吸收制劑，以期為獸醫(yī)臨床防控動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)病和線蟲(chóng)病奠定基礎(chǔ)。

1　材料和方法

1.1　試驗(yàn)材料

UV 3000型高效液相色譜儀(北京創(chuàng)新通恒科技有限公司)、AUW-120 D型電子分析天平(日本島津公司)、ZSD-2自動(dòng)水分滴定儀(上海市安亭電子儀器廠)等。

1.2　試驗(yàn)方法

1.2.1配方依據(jù)依據(jù)伊維菌素的理化性質(zhì)，選取無(wú)水乙醇、N,N-二甲基甲酰胺、丙二醇為伊維菌素溶劑，氮酮為透皮促滲劑，大分子物質(zhì)α-吡咯烷酮

為長(zhǎng)效穩(wěn)定劑。

1.2.2配方篩選

1.2.2.1伊維菌素透皮劑的溶劑配方篩選分別選用無(wú)水乙醇、N,N-二甲基甲酰胺、丙二醇、氮酮并按一定比例設(shè)計(jì)6個(gè)伊維菌素透皮劑溶劑配方(表1)；6個(gè)配方分別配制含伊維菌素0.5%、1.0%、1.5%的3種伊維菌素透皮劑；通過(guò)室溫試驗(yàn)、高溫試驗(yàn)、冷凍試驗(yàn)觀察藥物溶解度、澄清透明度、穩(wěn)定性等，以篩選最優(yōu)伊維菌素透皮劑的溶劑配方和伊維菌素透皮劑配方。

1.2.2.2伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑的溶劑配方篩選參考最優(yōu)伊維菌素透皮劑配方篩選結(jié)果和獸藥典規(guī)定，加入一定比例長(zhǎng)效劑α-吡咯烷酮設(shè)計(jì)A1、A2、A3伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑溶劑配方(表2)，并依據(jù)3個(gè)溶劑配方分別制備含伊維菌素0.5%、1.0%、1.5%的伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑，參照1.2.2.1中方法檢測(cè)其穩(wěn)定性并篩選最優(yōu)配方；用篩選的最優(yōu)配方的3種伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑分別罐裝、密封后于水浴鍋中煮沸20 min滅菌，然后各均分為3份并將其分別置-20、4、40 ℃條件下，進(jìn)一步觀察其穩(wěn)定性。

表1　伊維菌素透皮劑的溶劑配方　%

表2　伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑的溶劑配方　%

1.2.3伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑中伊維菌素含量測(cè)定采用高效液相色譜法：應(yīng)用150 mm× 2.1 mm×5 μm Waters surfire C18色譜柱，流動(dòng)相為乙腈︰甲醇︰水=56∶38∶6，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量20 μL。

1.2.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精確稱取伊維菌素標(biāo)準(zhǔn)品20. 86 mg，置200 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得100 μg/mL對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。用甲醇稀釋為10、20、40、50、100 μg/mL的系列溶液，以伊維菌素標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.3.2精密度試驗(yàn)取含伊維菌素0.5%、1.0%、1.5%的伊維菌素透長(zhǎng)效皮劑供試品溶液，在1.2.3.1條件下分別進(jìn)樣20 μL，分別于1、3、5 d測(cè)定伊維菌素含量，每天測(cè)定5次，計(jì)算日內(nèi)和日間精密度。

1.2.3.3回收率試驗(yàn)分別將0.5%、1.0%、1.5%的伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑制備成伊維菌素質(zhì)量濃度為37.5、50.0 μg/mL的2種溶液，分別加入不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液并進(jìn)樣測(cè)定伊維菌素含量，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算含量和回收率。

1.2.3.4伊維菌素含量測(cè)定制備3批次0.5%、1.0%、1.5%的伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑，分別測(cè)定伊維菌素含量，記錄不同批次間的含量變化。

1.2.3.5含水量測(cè)定用自動(dòng)水分滴定儀測(cè)定伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑的含水量。

2　結(jié)果與分析

2.1　伊維菌素溶劑配方篩選結(jié)果

以不同成分按一定比例制備的6個(gè)伊維菌素透皮劑的溶劑配方穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明(表3)，配方2(30%無(wú)水乙醇、2%氮酮、68%丙二醇)和配方6(2%氮酮、50% N,N-二甲基甲酰胺、48%丙二醇)較好，溶液澄清透明且在不同溫度條件下比較穩(wěn)定。以6個(gè)伊維菌素透皮劑的溶劑配方分別配制的0.5%、1.0%、1.5%伊維菌素透皮劑，穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明，溶劑配方2和配方6制備的1%伊維菌素透皮劑藥物溶解度和制劑穩(wěn)定性較好。

表3　伊維菌素透皮劑的溶劑配方穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.2　伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑溶劑及配方篩選結(jié)果

2.2.1長(zhǎng)效透皮劑的溶劑最優(yōu)配方室溫和凍融試驗(yàn)結(jié)果表明，以不同成分按一定比例制備的A1、A2、A3伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑溶劑配方中，配方A3(18%無(wú)水乙醇、2%氮酮、50%的N,N-二甲基甲酰胺、30% α-吡咯烷酮)制成的伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑溶劑的穩(wěn)定性最好(表4)。

2.2.2長(zhǎng)效透皮劑最優(yōu)配方室溫和凍融試驗(yàn)結(jié)果表明，以溶劑A3制備的0.5%、1.0%、1.5%伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑穩(wěn)定性均良好，室溫和凍融后均無(wú)析出(表4)。

從表5可以看出，以A3溶劑配方3種含量伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑分別于4 、40 ℃條件下放置7 d,，每天觀察，期間均無(wú)藥品析出。-20 ℃條件下，每天取出觀察時(shí)均有少量析出，但0.5%、1.0%制劑在室溫15 min左右即可恢復(fù)正常，1.5%制劑需25 min可恢復(fù)。

表4　不同溶劑不同含量伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

表5　A3溶劑配方3種含量伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.3　伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑中伊維菌素含量測(cè)定結(jié)果

2.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線由所測(cè)數(shù)據(jù)可知，伊維菌素在10～100 μg/mL時(shí)呈良好的線性關(guān)系。以伊維菌素標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。如圖1所示，標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y=31 172x+137 536，R2=0.999 6，r=0.999 8，結(jié)果符合要求。

圖1　伊維菌素標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3.2精密度測(cè)定3個(gè)樣品的日內(nèi)精密度和日間精密度均小于1%，表明樣品精密度良好(表6)。

2.3.3回收率經(jīng)測(cè)定含伊維菌素0.5%、1.0%、1.5% 的透皮劑的回收率為90%左右(85.94%～95.50%)，均在80%～120%(表7)。

表6　3個(gè)樣品的日內(nèi)精密度和日間精密度　%

表7　樣品的及含量與回收率

2.3.4不同批次間伊維菌素含量將3個(gè)批次0.5%、1.0%、1.5% 的伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑依次標(biāo)記為樣1、樣2、樣3，每個(gè)樣品重復(fù)2次，測(cè)定其伊維菌素含量，結(jié)果顯示，除20160401批次伊維菌素含量為122.48%外，其他含量在99.23%～108.02%，符合獸藥典所規(guī)定范圍在90%～110%的要求(表8)。

表8　不同批次藥品含量的測(cè)定結(jié)果　%

2.3.5含水量將 0.5%、1.0%、1.5% 的伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑依次標(biāo)記為樣品1、樣品2、樣品3，每個(gè)樣品重復(fù)3次，測(cè)定其含水量，結(jié)果0.5%制劑的3次測(cè)定和平均含水量均大于1%，而1.0%、1.5%制劑的3次測(cè)定和平均含水量均在1%以內(nèi)，符合要求(表9)。

表9　伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑中的水分測(cè)定　%

3　結(jié)論與討論

依據(jù)伊維菌素不溶于水，易溶于有機(jī)溶劑的特性，選用無(wú)水乙醇、丙二醇、N,N-二甲基甲酰胺為溶劑，并加入適量的透皮吸收劑氮酮制備出伊維菌素透皮劑，通過(guò)穩(wěn)定性試驗(yàn)證明本溶劑配方能夠使伊維菌素完全溶解且無(wú)析出。依據(jù)前期篩選出的伊維菌素溶劑配方，加入適量α-吡咯烷酮制備伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑，并制備含伊維菌素分別為0.5%、1.0%、1.5%的伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑，通過(guò)常溫觀察、高溫試驗(yàn)、冷凍試驗(yàn)、藥物析出度試驗(yàn)等穩(wěn)定性試驗(yàn)，研制、篩選出穩(wěn)定性最優(yōu)的伊維菌素長(zhǎng)效透皮制劑。

在廣東理工學(xué)院擔(dān)任《中級(jí)財(cái)務(wù)會(huì)計(jì)》課程的這幾年教學(xué)實(shí)踐中進(jìn)行了一些嘗試，對(duì)于學(xué)生主體與老師主導(dǎo)的關(guān)系，組織教學(xué)形式多樣、教學(xué)過(guò)程及教學(xué)內(nèi)容三個(gè)方面做了一些探索，這些方法的確可以調(diào)動(dòng)學(xué)生自主學(xué)習(xí)的積極性。前提必須要保證《中級(jí)財(cái)務(wù)會(huì)計(jì)》課程的教學(xué)模式改革方向應(yīng)該和本單位的人才培養(yǎng)方案一致，同時(shí)需要我校領(lǐng)導(dǎo)、教師和學(xué)生一起共同努力才能完成，所以教學(xué)改革是一項(xiàng)長(zhǎng)期的，艱巨的道路。

本研究研制的伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑符合國(guó)家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)且工藝安全、制備方便、穩(wěn)定性好。用高效液相色譜法檢測(cè)研制的0.5%、1.0%、1.5%伊維菌素長(zhǎng)效透皮吸收劑精密度試驗(yàn)結(jié)果表明，日內(nèi)精密度和日間精密度均小于1%；回收率試驗(yàn)結(jié)果表明，伊維菌素回收率均在90%左右；不同批次間伊維菌素含量測(cè)定結(jié)果表明，除20160401批次(1.5%伊維菌素長(zhǎng)效透皮劑)伊維菌素含量過(guò)高，其他批次的伊維菌素含量在99.23%～108.02%；含水量測(cè)定結(jié)果表明，除0.5%制劑外，1.0%、1.5%制劑的含水量均在1%以下，符合中國(guó)獸藥典(2015版)伊維菌素含水量不超過(guò)1%的規(guī)定。

長(zhǎng)效伊維菌素透皮劑主要是根據(jù)藥劑學(xué)的理論進(jìn)行配方設(shè)計(jì)，選取大分子物質(zhì)α-吡咯烷酮為長(zhǎng)效劑，由于其獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，在透皮溶液中不僅起到較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)持續(xù)釋放藥物的特點(diǎn)，還避免藥物的水解和降解，提高了藥物的穩(wěn)定性。配方設(shè)計(jì)前的基礎(chǔ)工作，如測(cè)定藥物的理化性質(zhì)等，做到了程序化、規(guī)范化，為最終配方的確定提供了有力的依據(jù)。綜上，本研究研制的工藝簡(jiǎn)單、安全，可望為獸醫(yī)臨床防控動(dòng)物體外寄生蟲(chóng)病和線蟲(chóng)病提供更為方便有效的伊維菌素制劑。

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