劉艷娟，吳玉輝，郭賀賀，劉奕晨，孫志強(qiáng)

(1貴州醫(yī)科大學(xué)，貴陽(yáng)550000；2南方醫(yī)科大學(xué)深圳醫(yī)院)

多發(fā)性骨髓瘤(MM)是一種發(fā)生于B淋巴細(xì)胞的惡性漿細(xì)胞疾病，是血液腫瘤中最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在惡性血液疾病中約占13%[1]。目前，MM的發(fā)病機(jī)制尚未清楚，既往研究認(rèn)為電離輻射、病毒感染、基因遺傳都有可能引發(fā)該病。近年研究報(bào)道，MM的發(fā)生可能與慢性炎癥[2,3]有關(guān)。高遷移率族蛋白B1(HMGB1)是一種重要的炎癥細(xì)胞因子，在多種惡性腫瘤呈高表達(dá)狀態(tài)。目前，國(guó)內(nèi)關(guān)于HMGB1在MM發(fā)病中的作用研究相對(duì)較少。本研究通過(guò)檢測(cè)MM患者血清HMGB1水平，分析其與反映MM疾病進(jìn)展和腫瘤負(fù)荷的β2微球蛋白(β2-MG)、乳酸脫氫酶(LDH)的相關(guān)性，了解HMGB1與MM發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，旨在為MM的診斷和治療提供新的靶點(diǎn)。

1　資料與方法

1.1　臨床資料

選擇2015年10月～2017年1月我院收治的MM患者65例(觀察組)，男51例、女14例，年齡45～88歲、平均53.1歲。均符合《中國(guó)多發(fā)性骨髓瘤診治指南》2015年修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)33例患者采取BDT方案(硼替佐米+地塞米松+來(lái)那度胺)化療，根據(jù)中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)血液分會(huì)多發(fā)性骨髓瘤工作組制定的療效標(biāo)準(zhǔn)，將33例患者分為完全緩解20例、緩解后復(fù)發(fā)13例。其余32例為初診未治患者，依據(jù)MM DS分期系統(tǒng)，Ⅰ期10例、Ⅱ期6例、Ⅲ期16例。排除嚴(yán)重肝功能異常、動(dòng)脈粥樣硬化等慢性炎癥疾病患者，化療前或化療過(guò)程中出現(xiàn)感染者。另選擇性別、年齡匹配的健康體檢者65例(對(duì)照組)，男51例、女14例，年齡40～76歲、平均50.2歲。本研究通過(guò)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有受試者均簽署知情同意書(shū)。

1.2　血清HMGB1檢測(cè)

采集受試者清晨空腹外周靜脈血5 mL，置于促凝管中，室溫放置2 h后離心，吸上清液，-80 ℃保存。采用ELISA法檢測(cè)血清HMGB1水平，嚴(yán)格按照ELISA試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3　血清β2-MG、LDH檢測(cè)

采集患者清晨空腹外周靜脈血5 mL，離心取血清，采用ELISA法檢測(cè)β2-MG、LDH水平，按照ELISA試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2　結(jié)果

2.1　兩組血清HMGB1水平比較

觀察組和對(duì)照組的血清HMGB1水平分別為(339.582±225.018)、(50.437±45.935)pg/mL，觀察組高于對(duì)照組(P<0.01)。

2.2　不同預(yù)后MM患者血清HMGB1、β2-MG、LDH水平比較

初診未治者血清HMGB1、β2-MG、LDH水平均高于完全緩解者(P均<0.01)。緩解后復(fù)發(fā)者血清HMGB1、β2-MG水平高于未治者，LDH低于未治者，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。緩解后復(fù)發(fā)者血清HMGB1、β2-MG、LDH水平均高于完全緩解者(P均<0.01)。見(jiàn)表1。

表1　　　　不同預(yù)后MM患者血清HMGB1、β2-MG、LDH水平比較

注：與完全緩解比較，*P<0.01；與緩解后復(fù)發(fā)比較，△P<0.01。

2.3　初診未治不同分期患者血清HMGB1、β2-MG、LDH水平比較

Ⅱ期患者血清HMGB1、β2-MG、LDH水平高于Ⅰ期，Ⅲ期患者血清HMGB1、β2-MG、LDH水平高于Ⅱ期(P均<0.01)。見(jiàn)表2。

表2　　　　初診未治不同分期患者血清HMGB1、β2-MG、LDH水平比較

注：與Ⅱ期比較，*P<0.01。

2.4　MM患者血清HMGB1水平與β2-MG、LDH水平的相關(guān)性

Pearson相關(guān)性分析顯示，MM患者血清HMGB1水平與β2-MG、LDH水平均呈正相關(guān)(r=0.949，P=0.002；r=0.879，P=0.003)。

3　討論

MM的發(fā)病原因和發(fā)病機(jī)制目前尚不明確。人類(lèi)HMGB1基因位于13q12染色體上，包括5個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子[4]。從結(jié)構(gòu)上來(lái)說(shuō)，HMGB1分為3個(gè)功能區(qū)，即HMGB1 A盒、HMGB1 B盒和酸性C末端[5]。A盒和B盒的主要作用是與DNA非特異性結(jié)合，B盒是引起炎癥反應(yīng)的功能結(jié)構(gòu)區(qū)，酸性C末端主要參與調(diào)節(jié)HMGB1與DNA結(jié)合的親和力。正常情況下，HMGB1主要存在于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體中，與DNA相結(jié)合，維持核小體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定并參與基因的重組、復(fù)制等，釋放至細(xì)胞外的HMGB1可通過(guò)多種途徑介導(dǎo)機(jī)體的炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)、組織再生及腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移等。

研究顯示，HMGB1在白血病中呈高表達(dá)狀態(tài)。付娟等[6]檢測(cè)了40例初診未治白血病患者(白血病組)、50例良性血液病患者(良性血液病組)及50例健康志愿者(對(duì)照組)血漿HMGB1水平，發(fā)現(xiàn)白血病組化療前HMGB1水平高于化療后及良性血液病組、對(duì)照組。Jia等[7]比較36例慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)患者(未治22例、經(jīng)治14例)和14例年齡相仿的健康對(duì)照組血漿HMGB1水平,發(fā)現(xiàn)未治療過(guò)的和復(fù)發(fā)患者同健康對(duì)照組相比較，其血漿HMGB1水平明顯增高。Yang等[8]發(fā)現(xiàn)，HMGB1在各種白血病中過(guò)度表達(dá)。本研究結(jié)果顯示，MM患者血清HMGB1水平高于健康對(duì)照者，且隨著MM分期升高，HMGB1水平升高。提示血清HMGB1水平與MM病情有關(guān)，可能是MM發(fā)生發(fā)展的一個(gè)影響因素。

HMGB1參與惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展的通路主要有以下3種[9，10]：①JAK/STAT信號(hào)通路：JAK/STAT信號(hào)通路在腫瘤疾病的進(jìn)展過(guò)程中起重要作用。STAT在多種惡性腫瘤中的表達(dá)水平較正常組織中明顯升高。此外，有試驗(yàn)證實(shí)激活JAK/STAT途徑可活化STAT，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移等。而HMGB1可能影響STAT信號(hào)通路，與腫瘤的發(fā)生存在一定的關(guān)系。②RAGE通路：RAGE作為HMGB1的主要受體，與HMGB1具有高度親和力。有報(bào)道指出，HMGB1和RAGE在腫瘤的侵襲過(guò)程中起協(xié)同作用。釋放到細(xì)胞外的HMGB1可以結(jié)合細(xì)胞表面的RAGE，上調(diào)RAGE，最終促進(jìn)腫瘤的細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。③Toll樣受體(TLR)：除RAGE外，TLR2和TLR4亦可作為HMGB1的受體，并能與其相互作用誘導(dǎo)細(xì)胞活化，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。另有研究報(bào)道，HMGB1可增加化療耐藥性，在治療上使用HMGB1中和抗體可增加惡性血液病對(duì)化療藥物的敏感性[11]。

β2-MG是相對(duì)分子質(zhì)量較低的蛋白，生理代謝過(guò)程活躍的腫瘤細(xì)胞可分泌大量β2-MG[12]。MM患者血清β2-MG表達(dá)水平明顯增高的作用機(jī)制主要為[13]：①骨髓瘤細(xì)胞可大量分泌和合成β2-MG；②骨髓瘤細(xì)胞壞死后可大量釋放β2-MG；③骨髓瘤細(xì)胞引起腎功能損害，使腎小球?yàn)V過(guò)率下降，血清β2-MG表達(dá)水平明顯升高。血清β2-MG升高常常提示疾病進(jìn)展。LDH是機(jī)體糖酵解過(guò)程中重要的代謝酶，當(dāng)患有腫瘤時(shí)，LDH可自細(xì)胞內(nèi)大量釋放至血液中[13]。對(duì)于MM患者，血清LDH表達(dá)水平可明顯升高，與MM預(yù)后密切相關(guān),對(duì)MM的臨床診斷、治療效果和預(yù)后評(píng)估具有重要意義[14]。本研究結(jié)果顯示，Ⅱ期患者外周血中β2-MG和LDH較Ⅰ期升高，Ⅲ期患者較Ⅱ期升高，且HMGB1水平與β2-MG、LDH水平均呈正相關(guān)。說(shuō)明HMGB1在一定程度上可以反映疾病的嚴(yán)重程度及預(yù)后。

綜上所述，MM患者血清HMGB1升高可能影響MM的發(fā)生發(fā)展，還可反映疾病的嚴(yán)重程度。

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