黃慧艷 梅金紅 王志勇

【摘要】 目的：觀察和檢測(cè)Sox2蛋白在結(jié)直腸管狀腺瘤及腺癌中的表達(dá)情況及臨床意義。方法：選取本院收治的結(jié)直腸管狀腺瘤50例及腺癌50例為研究對(duì)象。根據(jù)不典型增生程度將結(jié)直腸管狀腺瘤分為低級(jí)別管狀腺瘤組（n=30）和高級(jí)別管狀腺瘤組（n=20）；根據(jù)分化程度將腺癌分為高分化腺癌組（n=8）、中分化腺癌組（n=26）、低分化腺癌組（n=16）。采用免疫組化的方法，探討Sox2蛋白在結(jié)直腸管狀腺瘤及腺癌中的不同表達(dá)情況及臨床意義。結(jié)果：低級(jí)別管狀腺瘤組Sox2的表達(dá)陽性率為10.00%（3/30），低于高級(jí)別管狀腺瘤組的40.00%（8/20），比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；不同分化程度腺癌中Sox2的表達(dá)陽性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=22.563，P=0.010）。結(jié)論：Sox2蛋白表達(dá)水平在結(jié)直腸管狀腺瘤不典型增生的不同程度及腺癌的不同分化程度中均有不同程度的表達(dá)，檢測(cè)Sox2蛋白對(duì)了解結(jié)直腸管狀腺瘤及結(jié)直腸癌的生物學(xué)行為和評(píng)估預(yù)后具有一定的臨床價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】 Sox2蛋白； 結(jié)直腸管狀腺瘤； 腺癌

【Abstract】 Objective：To observe and detect the expression and clinical significance of Sox2 protein in colorectal tubular adenoma and adenocarcinoma.Method：A total of 50 patients with colorectal tubular adenoma and 50 patients with adenocarcinoma treated in our hospital were selected.According to the degree of atypical hyperplasia，the patients with colorectal tubular adenoma were divided into low grade tubular adenoma group（n=30） and high grade tubular adenoma group（n=20）.According to the degree of differentiation，the patients with adenocarcinoma were divided into high differentiated adenocarcinoma group（n=8），middle differentiated adenocarcinoma group（n=26） and low differentiated adenocarcinoma group（n=16）.To investigated the expression and clinical significance of Sox2 protein in colorectal tubular adenoma and adenocarcinoma by immunohistochemical method.Result：The positive rate of Sox2 expression in low grade tubular adenoma group was 10.00%（3/30），which was lower than that 40.00%（8/20） of high grade tubular adenoma group（P<0.05）.The positive rate of Sox2 expression in different differentiated adenocarcinoma was statistically significant（ 字2=22.563，P=0.010）.Conclusion：The expression of Sox2 protein was expressed in different degrees in atypical hyperplasia of colorectal tubular adenoma and differentiation of adenocarcinoma，the detection of Sox2 protein has a certain clinical value in understanding the biological behavior and evaluating the prognosis of colorectal tubular adenoma and colorectal cancer.

【Key words】 Sox2 protein； Colorectal tubular adenoma； Adenocarcinoma

First-authors address：First Affiliated Hospital of Nanchang University，Nanchang 330000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.04.002

結(jié)直腸癌是常見的消化道惡性腫瘤，在我國(guó)其發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)，多數(shù)患者死于腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，故對(duì)結(jié)直腸癌的早期診斷及預(yù)后評(píng)估是結(jié)直腸癌研究的熱點(diǎn)[1-2]。不同程度的上皮內(nèi)瘤變（異型增生）腺瘤對(duì)結(jié)直腸癌的發(fā)生呈現(xiàn)不同的惡性潛能，其強(qiáng)調(diào)在不同的階段有不同的基因變化參與[3]，對(duì)這些基因進(jìn)行檢測(cè)可以反映腫瘤的特性，對(duì)診斷、治療及預(yù)后具有重要意義[4]。選取2013年10月-2015年10月在于都縣人民醫(yī)院行腸鏡下息肉切除、外科手術(shù)、病理活檢取下的標(biāo)本100例，采用免疫組化法檢測(cè)Sox2蛋白在標(biāo)本中表達(dá)的情況，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年10月-2015年10月于都縣人民醫(yī)院行腸鏡下息肉切除、外科手術(shù)、病理活檢取下的標(biāo)本100例，其中結(jié)直腸管狀腺瘤50例，年齡27～90歲，平均年齡59歲；腺癌50例，年齡27～91歲，平均年齡60歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：診斷明確患者；無其他方面的腫瘤性疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：臨床病理資料不完整者；術(shù)前行放療、化療及中藥抗腫瘤等治療者。根據(jù)不典型增生程度將結(jié)直腸管狀腺瘤分為低級(jí)別管狀腺瘤組（n=30）和高級(jí)別管狀腺瘤組（n=20）；根據(jù)分化程度將腺癌分為高分化腺癌組（n=8），中分化腺癌組（n=26），低分化腺癌組（n=16）?；颊呒凹覍倬鶎?duì)本研究知情并簽署知情同意書，且本研究已經(jīng)由本院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 脫蠟至水 （1）在玻璃架上放置組織切片，用電吹風(fēng)吹烤直至石蠟熔融完全；（2）二甲苯中放置充分吹烤切片，浸泡約10 min；取出并在第二缸二甲苯中浸泡10 min；（3）切片從二甲苯中取出后放置在無水乙醇中，浸泡時(shí)間控制在3～5 min，取出并放置在第二缸無水乙醇中，浸泡3～5 min，取出并依次放入70%、80%、90%的酒精水中進(jìn)行梯度水化，浸泡3～5 min。

1.2.2 抗原修復(fù) CBS pH值6.0，用蒸餾水潤(rùn)洗切片表面2～3次，盡可能地保證酒精不殘留；CBS緩沖液在電飯煲中充分預(yù)熱，并將切片放置其中，持續(xù)20 min水浴煮沸，切換至保溫檔后，維持10 min；修復(fù)盒取出之后，使其自然冷卻，直至達(dá)到室溫。

1.2.3 過氧化氫滴加 （1）切片組織用PBS緩沖液連續(xù)浸泡3次，3 min/次。（2）從玻片架中取出切片，用手甩去切片上的PBS緩沖液，組織外的緩沖液用吸水紙吸去，在濕盒上放置切片，滴加3%過氧化氫溶液1～2滴，室溫下孵育10～15 min。

1.2.4 一抗滴加 在玻片架上放置切片，用pH 值7.2～7.4的PBS緩沖液浸浸泡3次，3 min/次；從玻片架上取出切片，用手甩去PBS緩沖，組織外的緩沖液用吸水紙吸去，在濕盒上放置切片，滴加一抗50～60 μL，37 ℃的環(huán)境下孵育60 min。

1.2.5 二抗滴加 在玻片架上放置切片，用pH 值7.2～7.4的PBS緩沖液浸浸泡3次，3 min/次；從玻片架上取出切片，用手甩去PBS緩沖，組織外的緩沖液用吸水紙吸去，在濕盒上放置切片，滴加二抗50～60 μL，室溫環(huán)境下孵育30 min。

1.2.6 DAB顯色 （1）在玻片架上放置切片，用pH值 7.2～7.4的PBS緩沖液浸浸泡3次，3 min/次；（2）DAB顯色液配制：蒸餾水∶c液∶b液∶a液=20∶1∶1∶1；（3）從玻片架上取出切片，用手甩去PBS緩沖，組織外的緩沖液用吸水紙吸去；（4）在白紙上放置切片，滴加DAB 50～60 μL，室溫下鏡檢顯色。

1.2.7 復(fù)染蘇木素 （1）在玻片架上放置切片，切片表面的DAB溶液用自來水潤(rùn)洗2～3次；（2）蘇木素染色缸中放置切片，浸泡時(shí)間控制在3 min左右，取出并將表面殘留的蘇木素用自來水洗去；（3）將切片浸入1%鹽酸酒精中分化，立刻取出，在自來水中放置、潤(rùn)洗2～3次，棄去洗液，切片組織用自來水流水沖洗10 min，返藍(lán)。

1.2.8 封片脫水。

1.3 結(jié)果判定 顯微鏡下觀察，Sox2主要表達(dá)于腺體的細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞出現(xiàn)明顯的棕黃色顆粒即可判定為陽性細(xì)胞，每張切片的高倍鏡視野應(yīng)該在3個(gè)以上，每個(gè)視野有100個(gè)細(xì)胞，對(duì)平均陽性細(xì)胞率進(jìn)行計(jì)算。根據(jù)平均陽性細(xì)胞比率進(jìn)行分類：≤10%（-）為陰性，11%～25%（+）為弱陽性，26%～50%（++）為中等陽性，>50%（+++）為強(qiáng)陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 17.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同級(jí)別管狀腺瘤中Sox2的表達(dá)陽性率比較 低級(jí)別管狀腺瘤組Sox2的表達(dá)陽性率為10.00%（3/30），低于高級(jí)別管狀腺瘤組的40.00%（8/20），比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=4.670，P=0.031），見表1，見圖1、2。

2.2 不同分化程度腺癌中Sox2的表達(dá)陽性率比較 不同分化程度腺癌中Sox2的表達(dá)陽性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=22.563，P=0.010）；低分化腺癌組Sox2表達(dá)陽性率明顯高于中分化腺癌組及高分化腺癌組，但比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=0.740、2.521，P=0.485、0.167）；中分化腺癌組Sox2表達(dá)陽性率高于高分化腺癌組，但比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=0.991，P=0.410）。見表2，圖3～5。

3 討論

Sox屬于Y染色體性別決定區(qū)相關(guān)基因家族之一，參與到了細(xì)胞分子調(diào)控與胚胎發(fā)育中[5-7]。Sox2屬于Sox，通過HMG結(jié)構(gòu)域?qū)Π谢蜻M(jìn)行識(shí)別，與DNA序列特異性的結(jié)合，在保持不分化狀態(tài)、維持干細(xì)胞全能性、決定細(xì)胞分化方向、調(diào)控組織的增殖發(fā)育方面具有重要價(jià)值[8-11]。Sox2廣泛性的參與到了細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子的發(fā)育調(diào)節(jié)中，同時(shí)對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展等方面具有至關(guān)重要的作用[11-13]。如Sox2蛋白在惡性膠質(zhì)瘤中的表達(dá)性較高，可在腦組織中正常發(fā)育，Sox2表達(dá)沉默或者下調(diào)均可使得膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖能力明顯降低[14-16]。文獻(xiàn)[17]報(bào)道Sox2高表達(dá)于肺鱗癌，Sox2的高表達(dá)使得肺的支氣管上皮失去了分化成熟的能力，同時(shí)促進(jìn)了肺腫瘤的異型上皮細(xì)胞增殖分裂，表現(xiàn)出高度惡性的生物學(xué)特性[18-20]。

本研究結(jié)果顯示，低級(jí)別管狀腺瘤組Sox2的表達(dá)陽性率為10.00%（3/30），低于高級(jí)別管狀腺瘤組的40.00%（8/20），比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；不同分化程度腺癌中Sox2的表達(dá)陽性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示Sox2的在結(jié)直腸腺癌中的表達(dá)陽性率與結(jié)直腸腺癌的分化程度有關(guān)；低分化腺癌組Sox2表達(dá)陽性率明顯高于中分化腺癌組及高分化腺癌組，但比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；在中分化腺癌組Sox2表達(dá)陽性率高于高分化腺癌組，但比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），可能與數(shù)據(jù)量較少有關(guān)。

綜上所述，Sox2蛋白在結(jié)直腸管狀腺瘤及腺癌有不同程度的表達(dá)，檢測(cè)Sox2蛋白對(duì)了解結(jié)直腸管狀腺瘤及結(jié)直腸癌的生物學(xué)行為和評(píng)估預(yù)后具有一定的臨床價(jià)值[21-22]，Sox2能否作為結(jié)直腸腫瘤治療中的新靶向位點(diǎn)值得臨床進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2017-10-27） （本文編輯：董悅）