崔 波，王若斕，郝平安，程邵麗，袁秀云，張 燕

(1 鄭州大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院， 鄭州 450001；2 鄭州師范學(xué)院 生物工程研究所， 鄭州 450044；3 河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院， 鄭州 450002)

牡丹(PaeoniasuffruticosaAndr.)是芍藥科(Paeoniaceae)芍藥屬(Paeonia)多年生落葉小灌木，是中國的傳統(tǒng)名花[1]，有著很高的觀賞和營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值。近年來發(fā)現(xiàn)牡丹可作為一種糧油資源進(jìn)行開發(fā)和利用。牡丹籽油中富含不飽和脂肪酸，2011年國家衛(wèi)生部批準(zhǔn)牡丹籽油作為新資源食品，隨著牡丹籽油產(chǎn)業(yè)化的發(fā)展，牡丹的研究與開發(fā)成為油用植物研究的新熱點(diǎn)[2]。

二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶(diacylglycerol acyltransferase, DGAT)與脂肪代謝、脂類在組織中的沉積有很大關(guān)系，它的主要作用機(jī)制是催化三酰甘油TAG合成途徑的最后一步，并且從乙酰輔酶A中轉(zhuǎn)移一個(gè)?；瘓F(tuán)到甘油二酯DAG中，從而形成三酰甘油TAG[3]。三酰甘油TAG是動(dòng)物、植物和真核微生物的主要貯藏脂。在植物中，三酰甘油TAG的合成對(duì)種子油脂的形成十分重要[4]。該酶廣泛存在于植物的不同器官中，如葉片、花瓣、果實(shí)、花粉囊以及正在發(fā)育中的種子中[5]。截至目前，人們共發(fā)現(xiàn)了4種DGAT基因類型，分別是DGAT1、DGAT2、DGAT3和WS/DGAT[6]，其中，DGAT1和DGAT2主要存在于真核生物中，隨著Hobbs等[5]在擬南芥中克隆到DGAT1基因后，DGAT1的同源基因又在油茶[7]、蒺藜苜蓿[8]等其他植物中得到，Jako等[9]在擬南芥中過量表達(dá)DGAT1 基因后發(fā)現(xiàn)，DGAT1表達(dá)量和活性均提高10% ～ 70%，含油率和種子的平均重量也明顯有所增加。DGAT2編碼的蛋白質(zhì)與DGAT1蛋白同源性極低，而且在基因結(jié)構(gòu)、酶學(xué)活性及特異性等方面都存在巨大差異[10]。通過研究DGAT2基因的功能發(fā)現(xiàn)，DGAT2基因具有底物特異性，優(yōu)先利用特殊脂肪酸進(jìn)行三酰甘油合成，DGAT3基因所編碼的蛋白序列與DGAT1和DGAT2亞家族的同源性較低，但仍然具有DGAT蛋白的功能基序[11]，目前該基因已在擬南芥中被鑒定出來[12]。WS/DGAT基因在革蘭氏陰性菌不動(dòng)桿菌屬ADP1中首次被鑒定，發(fā)現(xiàn)當(dāng)其生長(zhǎng)受限時(shí)可以合成蠟酯和甘油三酯[13]，在擬南芥中也被鑒定出WS/DGAT基因可以顯著促進(jìn)蠟酯合成[14]。可見，這4種不同類型的DGAT基因?qū)刂粕矬w內(nèi)的油脂合成發(fā)揮著重要作用。

目前，盡管人們?cè)诤芏嗟闹参镏卸家呀?jīng)克隆得到不同類型的DGAT基因，但是，牡丹DGAT基因的研究還未見報(bào)道。本研究以牡丹種子為試驗(yàn)材料，利用RT-PCR和RACE技術(shù)克隆DGAT基因，并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析，在牡丹種子的不同發(fā)育過程、后熟階段及不同組織器官中，對(duì)該基因的表達(dá)量進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)分析，旨在進(jìn)一步理解DGAT基因在牡丹種子油脂合成中的調(diào)控作用，并為今后利用基因工程手段及在生產(chǎn)實(shí)踐中提高其脂肪酸含量提供理論基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 植物材料

試驗(yàn)材料為牡丹品種“鳳丹”，由鄭州師范學(xué)院生物工程研究所提供。取牡丹花蕾期的葉片、花芽、未發(fā)育子房及嫩莖各組織，用于DGAT基因的組織器官表達(dá)特異性分析；從2017年4月底牡丹花敗后開始采摘直到7月底，選取生長(zhǎng)狀態(tài)一致的牡丹植株，每2周取其種子，用于種子不同發(fā)育過程中DGAT基因的表達(dá)分析；7月底將種子采收并常溫自然保存后，以采收當(dāng)天的種子作為對(duì)照(CK)，每7 d取1次，共取4次，用于牡丹種子后熟階段中DGAT基因的表達(dá)差異性分析。每次取3株上的樣品作為3個(gè)生物學(xué)重復(fù)，液氮速凍后保存于-80 ℃超低溫冰箱中備用。

1.2 方 法

1.2.1總RNA提取和cDNA合成牡丹種子總RNA用多糖多酚植物總RNA提取試劑盒(Tiangen)提取，具體方法參照說明書進(jìn)行。提取的RNA用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其完整性；用 Q5000 核酸蛋白分析儀(美國 Quawell)測(cè)定提取RNA的濃度和純度。利用 M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶(TaKaRa)對(duì)總 RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，合成單鏈cDNA，用于DGAT基因的克隆，具體方法參照試劑盒的說明書。

1.2.2牡丹DGAT基因全長(zhǎng)的克隆利用生物學(xué)軟件DNAMAN和Primer premier 5.0，根據(jù)NCBI已登錄的植物DGAT基因序列，設(shè)計(jì)1對(duì)簡(jiǎn)并引物DGAT-F(5′-TTGCTAAGTCAG TTGATAAGG-3′)和DGAT-R(5′-TTGGCTGGTAACATAACG-3′)，以反轉(zhuǎn)錄合成的cDNA第一鏈為模板擴(kuò)增牡丹DGAT基因保守片段。PCR擴(kuò)增體系為20.0 μL，包含10×PCR Buffer 2.0 μL，dNTP(2.5 mmol/L)1.6 μL，上下游引物(10 mmol/L)各1.0 μL，模板cDNA 1 000～2 000 ng，r-Taq DNA聚合酶(5U)0.2 μL。PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?5 ℃預(yù)變性5 min，95 ℃變性40 s，55 ℃退火40 s，72 ℃延伸40 s，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，最后72 ℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠檢測(cè)后，利用凝膠試劑盒(Tiangen)回收目的片段，連接到pGEM-T Easy載體上，轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5α菌株，進(jìn)行克隆和測(cè)序。

根據(jù)獲得的中間片段序列，設(shè)計(jì)1對(duì)3′端特異性引物，DGAT3-1(5′-CGTTATGTTACCAGCCAACCTATC-3′)和DGAT3-2(5′-GTTCTACTGCCTTTTTCACCTCTG-3′)，1對(duì)5′端特異性引物DGAT5-1(5′-CATCCCCCTTATCAACTGACTTAGC-3′)和DGAT5-2(5′-AACCACACAATGCAAGCACAGAG-3′)，按Clontech公司SMARTTMRACE Amplification Kit操作說明進(jìn)行擴(kuò)增，回收產(chǎn)物，連接到pGEM-T Easy 載體上，然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌 DH5α菌株，鑒定后測(cè)序，并與中間片段進(jìn)行拼接。

依據(jù)拼接序列設(shè)計(jì)1對(duì)引物DGAT-ORFF(5′-AGCTCTTTTTCCCGGCATCA-3′)和DGAT-ORFR(5′-AGCCACGCCAATGAGATCTGT-3′)，進(jìn)行開放閱讀框(ORF)擴(kuò)增。引物合成和測(cè)序由英濰捷基(上海)貿(mào)易有限公司完成。

1.2.3牡丹DGAT基因的生物信息學(xué)分析用DNAMAN軟件對(duì)序列進(jìn)行拼接，得到正確的牡丹DGAT基因的全長(zhǎng)序列。在NCBI上進(jìn)行蛋白保守結(jié)構(gòu)功能域和氨基酸同源性比對(duì)分析；利用ProtParam 軟件預(yù)測(cè)編碼蛋白的理論分子量和等電點(diǎn)等基本理化性質(zhì)；利用ProtScale 軟件預(yù)測(cè)蛋白親疏水性；利用ExPASy網(wǎng)站在線預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)；使用MEGA軟件的鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。

1.2.4牡丹DGAT基因的表達(dá)分析表達(dá)分析樣品的總RNA用PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser (TaKaRa) 試劑盒反轉(zhuǎn)錄以合成單鏈 cDNA。根據(jù)牡丹DGAT基因的編碼區(qū)序列，設(shè)計(jì)1對(duì)特異性引物qRT-DGATF(5′-ATGTTACCAGCCAACCTATCCTC-3′)和qRT-DGATR(5′-GGATGCTGAGAGTTCTGGACAATA G-3′)，以Actin(JN105298.1)為內(nèi)參基因，引物分別為Act-F(5′-AAGTCCTGTTCCAGCCATCACTA-3′)和Act-R(5′-TACTGAGGGAAGCAAGAATAGACC-3′)，采用SYBR Premix ExTaqTMⅡKit(TaKaRa)進(jìn)行qRT-PCR反應(yīng)。反應(yīng)體系為 20 μL，反應(yīng)程序?yàn)?5 ℃預(yù)變性15 s，58 ℃變性15 s，72 ℃退火15 s(40個(gè)循環(huán))，反應(yīng)在熒光定量PCR儀(Eppendorf)上進(jìn)行，每個(gè)樣品重復(fù)3次，通過公式2-ΔΔCt法計(jì)算基因相對(duì)表達(dá)量，DGAT基因表達(dá)的差異分析通過SPSS 17.0軟件進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 牡丹DGAT基因全長(zhǎng)的克隆

以牡丹種子的cDNA為模板，利用設(shè)計(jì)的簡(jiǎn)并引物DGAT-F和DGAT-R進(jìn)行保守區(qū)的PCR擴(kuò)增，得到1個(gè)長(zhǎng)度為728 bp保守片段(圖1，A)，并在NCBI上進(jìn)行Blastn分析，確定該片段為DGAT基因片段。根據(jù)該片段序列，采用RACE技術(shù)，利用3′端特異性引物DGAT3-1和DGAT3-2擴(kuò)增得到3′端目的片段(圖1，B)，利用5′端特異性引物DGAT5-1和DGAT5-2擴(kuò)增得到5′端目的片段(圖1，C)。將中間片段、3′端和5′端目的片段進(jìn)行拼接，在開放閱讀框區(qū)域設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行擴(kuò)增驗(yàn)證，得到預(yù)期的片段(圖1，D)，最終得到1條全長(zhǎng)為2 028 bp的完整牡丹DGAT基因的cDNA序列。在NCBI上進(jìn)行ORF搜索，該基因具有完整的開放閱讀框，其中，包含250 bp的5′-UTR、1 554 bp的開放閱讀框和224 bp的3′-UTR，編碼517個(gè)氨基酸(圖2)。將其命名為PaDGAT1，GenBank登錄號(hào)為MG214258。

M. DL2000；1. 保守片段；2. 3′-RACE；3. 5′-RACE；4.開放閱讀框片段圖1 牡丹PaDGAT1基因的擴(kuò)增M. DL2000；1. Conserved region；2. 3′-RACE；3. 5′-RACE；4. ORF；Fig.1 Amplification of PaDGAT1 gene in Paeonia suffruticosa

ATG. 起始密碼子；TAA. 終止密碼子圖2 牡丹PaDGAT1基因核苷酸序列和推測(cè)的氨基酸序列ATG. Start codon；TAA. Stop codonFig.2 The nucleotide acid sequence and deduced amino sequence of PaDGAT1 gene in P. suffruticosa

2.2 牡丹DGAT基因的生物信息學(xué)分析

利用NCBI的蛋白數(shù)據(jù)庫對(duì)PaDGAT1基因編碼的氨基酸序列進(jìn)行保守區(qū)預(yù)測(cè)，結(jié)果表明(圖3)，該蛋白在第81～515位氨基酸序列具有典型的PLN02401結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域?qū)儆谀そY(jié)合O-?；D(zhuǎn)移酶MBOAT (membrane bound O-acyltransferase)超家族，此結(jié)構(gòu)域包含?；D(zhuǎn)移酶，在活性位點(diǎn)上有保守的組氨酸殘基，此殘基主要用于催化蛋白質(zhì)上脂肪酸酰基的酯化反應(yīng)，推測(cè)該蛋白與油脂合成有關(guān)。除此之外，PaDGAT1基因編碼的氨基酸序列(圖4)包括保守結(jié)構(gòu)域(basic motif)、?；o酶A結(jié)合域(acyl-col binding motif)、蔗糖非發(fā)酵相關(guān)蛋白激酶結(jié)構(gòu)域(sucrose non-fermenting related protein kinase motif)、亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域(leucine zipper motif)、二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶功能域(DGAT motif)、脂肪酸結(jié)合蛋白特征(fatty acid protein signature)、二酰甘油結(jié)合域(DAG binding motif)和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位信號(hào)(ER-DIR)，其中在亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)中存在重要的脯氨酸(Pro)和絲氨酸(Ser)。將牡丹PaDGAT1蛋白與其他植物的DGAT蛋白在NCBI上進(jìn)行BlastP氨基酸同源比對(duì)，發(fā)現(xiàn)其與多個(gè)物種的DGAT蛋白具有較高的一致性，其中與梅(PrunusmumeXP008242379)、山杏(PrunussibiricaAIX97817)和櫻桃(PrunusaviumXP021805031)等植物的DGAT蛋白具有91.77%的一致性，牡丹PaDGAT1蛋白的氨基酸序列在中間區(qū)和C端保守性強(qiáng)，而在N端保守性差(圖4)。

圖3 PaDGAT1基因編碼蛋白結(jié)構(gòu)域Fig.3 Domain of the PaDGAT1 protein

XP008242379.梅；AIX97817. 山杏；XP021805031. 櫻桃圖4 PaDGAT1基因的氨基酸序列與同源序列比對(duì)XP008242379. Prunus mume；AIX97817. Prunus sibirica；XP021805031. Prunus aviumFig.4 Alignment of PaDGAT1 amino sequence with other homologous proteins

利用ProtParam 軟件分析PaDGAT1基因編碼蛋白的理化性質(zhì)，結(jié)果表明，該蛋白的分子量為58.86 kD，理論等電點(diǎn)為8.62，分子式為C2698H4169N695O710S36；負(fù)電荷殘基總數(shù)(Asp+Glu)為39，正電荷殘基總數(shù)(Arg+Lys)為46。在組成PaDGAT1蛋白的20種氨基酸中，亮氨酸(Leu)所占比例最高(10.8%)，蘇氨酸(Thr)所占比例最低(2.3%)。該蛋白的不穩(wěn)定指數(shù)為45.23，脂肪指數(shù)為103.63，根據(jù)Guruprasad方法判定，PaDGAT1蛋白不穩(wěn)定。采用ProtScale分析蛋白的親疏水性，結(jié)果顯示，PaDGAT1蛋白質(zhì)屬于疏水蛋白，其中第53位的亮氨酸(Leu)親水性最強(qiáng)(-2.544)，第130位纈氨酸(Val)的疏水性最強(qiáng)(3.689)。通過ExPASy網(wǎng)站上的GOR預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)，結(jié)果表明，α螺旋(alpha helix)占18.76%，延伸鏈(extended strand)占33.66%，無規(guī)則卷曲(random coil)占47.58%，可見，在整個(gè)PaDGAT1蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)中，無規(guī)則卷曲和延伸鏈?zhǔn)瞧渲饕慕Y(jié)構(gòu)元件。

圖5 氨基酸序列進(jìn)化分析Fig.5 Phylogenetic analysis of amino acids sequences

H7、H14、H21、H28分別表示種子收獲后第7天、第14天、第21天和第28天;不同小寫字母表示0.05水平顯著性差異圖6 PaDGAT1基因在不同時(shí)期和不同組織中的表達(dá)H7, H14, H21 and H28 indicated 7, 14, 21 and 28 days after harvest; The different nornal letters mean significant difference at 0.05 levelFig.6 The expression level of PaDGAT1 gene in different stages and tissues

為了進(jìn)一步分析PaDGAT1基因的系統(tǒng)進(jìn)化，選取多種植物的DGAT蛋白序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(圖5)，結(jié)果表明，不同類型DGAT蛋白差異明顯，可以將植物體內(nèi)的DGAT蛋白分為2大分支，4個(gè)亞家族，分別是DGAT1、DGAT2、DGAT3和WS/DGAT亞家族，其中，DGAT1和DGAT2亞家族屬于一個(gè)分支，DGAT3與WS/DGAT亞家族屬于另一個(gè)分支，大豆(Glycinemax)、花生(Arachishypogaea)和山杏(Prunussibirica)等共屬于DGAT1亞家族，本研究的牡丹PaDGAT1蛋白與油橄欖(Oleaeuropaea)DGAT蛋白親緣關(guān)系最近。

2.3 牡丹DGAT基因的表達(dá)分析

為了研究DGAT基因在牡丹生長(zhǎng)發(fā)育及種子發(fā)育過程中的調(diào)控作用，采取實(shí)時(shí)熒光定量PCR法對(duì)其進(jìn)行分析。結(jié)果表明，在牡丹的不同組織器官中，PaDGAT1基因表達(dá)量具有明顯差異，在花芽中表達(dá)量最高，在葉、莖和未發(fā)育子房中表達(dá)量低(圖6，A)。在種子發(fā)育過程中，PaDGAT1基因的表達(dá)量呈現(xiàn)前期不斷升高，中期下降，后期又升高的趨勢(shì)。即從子房發(fā)育至28 d時(shí)，表達(dá)量升至最高，隨后表達(dá)量下降，在種子發(fā)育85 d時(shí)收獲，其表達(dá)量又升高(圖6，B)。在種子收獲后，PaDGAT1基因的表達(dá)水平呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，在收獲7 d時(shí)升至最高，隨著種子的干燥和進(jìn)一步成熟，其表達(dá)量逐漸下降(圖6，C)。結(jié)果分析表明DGAT基因主要參與種子發(fā)育和成熟的調(diào)控過程。

3 討 論

本研究從牡丹種子中克隆了1個(gè)DGAT基因全長(zhǎng)序列，該基因編碼蛋白屬于膜結(jié)合O-酰基轉(zhuǎn)移酶MBOAT超家族成員；進(jìn)化上與油橄欖的DGAT蛋白親緣關(guān)系最近；表達(dá)分析表明，牡丹PaDGAT1基因在花芽中表達(dá)量最高，在葉、莖和未發(fā)育子房中表達(dá)量較低；在種子發(fā)育過程中，其表達(dá)水平呈現(xiàn)先升高再降低又升高的趨勢(shì)；在種子收獲后的7 d，PaDGAT1基因表達(dá)量最高，隨著種子的干燥其表達(dá)量逐漸降低。

二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶DGAT是催化三酰甘油TAG合成的最后一步，也是一個(gè)處于關(guān)鍵步驟的酶，對(duì)于植物種子中的脂肪酸積累及油脂合成的調(diào)控具有重要作用，也因而被廣泛研究[15]。DGAT基因在控制脂肪酸向TAG的流動(dòng)方面起著決定性作用，在油料作物及能夠積累非常見脂肪酸(unusual FAs)的植物中，DGAT基因的轉(zhuǎn)錄水平與油脂的積累量有一定的相關(guān)性[11]。本研究牡丹的PaDGAT1蛋白具有多個(gè)保守結(jié)構(gòu)域，符合DGAT1蛋白的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)[16]，同時(shí)包含植物DGAT蛋白已知的功能結(jié)構(gòu)域，其中在亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域(leucine zipper motif)中存在重要的脯氨酸(Pro)和絲氨酸(Ser)殘基，保證該特征區(qū)域?qū)Φ鞍椎慕Y(jié)合起到調(diào)節(jié)作用[17-19]。有研究表明，在玉米的該結(jié)合域中由于脯氨酸殘基的缺失使DGAT酶活下降，異位表達(dá)帶該殘基的玉米可使其種子中油含量及油酸含量大量增加[20]，在蒺藜苜蓿的2個(gè)DGAT1基因突變株中同樣證實(shí)脯氨酸殘基的存在會(huì)影響TAG的合成和油體形成[8]。

研究表明，DGAT1是一個(gè)多功能酶，不僅能催化合成三酰甘油TAG，還參與合成二酰甘油、維生素A及蠟質(zhì)[21]，同樣，在大豆和擬南芥中，該酶是油脂積累過程中一種主要酶[11]，研究表明，DGAT1和DGAT2存在遠(yuǎn)親的微生物基因(在酵母中除外)，這說明DGAT基因是一個(gè)古老的基因家族，在人類和植物的進(jìn)化之前就已經(jīng)出現(xiàn)[22-23]。本研究結(jié)果顯示，牡丹PaDGAT1蛋白屬于DGAT1亞家族，其N端保守性差，并與油橄欖(Oleaeuropaea)親緣關(guān)系最近。眾所周知，橄欖油是從新鮮油橄欖果實(shí)中冷榨提取的一種高檔食用植物油，橄欖油作為一種高檔食用油，除了富含不飽和脂肪酸外，還含有豐富的生物活性物質(zhì)如多酚、角鯊烯和維生素等，這些成分具有抗氧化、調(diào)節(jié)膽固醇、預(yù)防癌癥、美容及調(diào)整人體生理機(jī)能的重要作用[24]，這也進(jìn)一步證明牡丹籽油同樣具有較高的營(yíng)養(yǎng)與保健價(jià)值。

大量研究表明，DGAT基因在大多數(shù)高等植物中的各個(gè)器官中均有表達(dá)，對(duì)亞麻薺的研究發(fā)現(xiàn)，DGAT基因在種子發(fā)育時(shí)期也有特異性表達(dá)[25]。在本研究中，牡丹PaDGAT1基因在花芽中大量表達(dá)，而在葉片、莖和未發(fā)育子房中低表達(dá)，這與擬南芥[5]、油菜[26]和大豆[27]等大多雙子植物的組織器官表達(dá)模式相似。在種子發(fā)育過程中，隨著牡丹種子的不斷發(fā)育成熟，PaDGAT1基因表達(dá)量呈現(xiàn)出先升高后降低再升高的趨勢(shì)，這與紫蘇[28]和蓖麻[29]種子DGAT基因具有相似的表達(dá)趨勢(shì)，這說明DGAT基因的表達(dá)可能與種子萌發(fā)[8]和胚發(fā)育[30]有關(guān)。研究表明，在種子萌發(fā)過程中，脂肪酸的動(dòng)員與DGAT1基因密切相關(guān)，可以促使TAG合成增加，并作為種子發(fā)育的主要碳源供應(yīng)途徑[31]。He等[32]證實(shí)萌發(fā)的蓖麻種子中脂類合成與DGAT1 相關(guān)。在牡丹種子收獲后，PaDGAT1基因表達(dá)量升高，在收獲后7 d時(shí)，表達(dá)量最高，隨后迅速下降。由此推測(cè)，種子在前期需要積累大量TAG來滿足種子萌發(fā)和快速生長(zhǎng)發(fā)育的需求；在牡丹種子收獲后，其油分的形成與積累還在進(jìn)行。這些結(jié)果說明PaDGAT1基因調(diào)控著牡丹種子發(fā)育和成熟中油脂合成的整個(gè)過程。

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