蔣會婷 鄭蘭紫 王婭瓊 耿利彬 張巍巍 馮寶立

呼吸道病毒感染是兒童急性呼吸道感染最常見的原因［1］，為了解北京市密云區(qū)兒童呼吸道傳染病的流行動態(tài)和呼吸道病毒的感染狀況，現(xiàn)對2014年9月－2016年8月患病兒童的咽拭子樣本，進(jìn)行了8種呼吸道病毒的檢測，結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 樣本采集 2014年9月－2016年8月，因呼吸道感染到密云區(qū)醫(yī)院就診的患兒，包括急性上呼吸道感染病例，肺炎病例及重癥肺炎病例，三種類型病例的樣本比例為1∶2∶1。病例定義參照北京市呼吸道傳染病病原學(xué)監(jiān)測工作方案。每月隨機采集10件樣本，每周均衡分布，共采集了240件咽拭子樣本。

1.2 試劑與材料 呼吸道病毒采樣管為友康基業(yè)生物科技(北京)有限公司產(chǎn)品。病毒RNA提取試劑羅氏MagNA Pure LC2.0核酸提取試劑盒為Roche公司產(chǎn)品。呼吸道病毒核酸多重聯(lián)檢試劑盒為江蘇和創(chuàng)生物科技有限公司產(chǎn)品。

1.3 核酸提取 取50 μL樣本，使用羅氏 MagNA Pure LC2.0型全自動核酸提取儀提取病毒RNA，提取物用100 μL洗脫液溶解，立即置－70℃保存?zhèn)溆茫僮鞣椒ò凑諆x器使用說明書。

1.4 實時熒光RT-PCR檢測 用PCR的方法檢測8種常見呼吸道病毒核酸，包括流感病毒(甲型流感病毒、乙型流感病毒)、副流感病毒、腺病毒、冠狀病毒、呼吸道合胞病毒、人偏肺病毒、鼻病毒、博卡病毒。按照和創(chuàng)呼吸道病毒核酸多重聯(lián)檢試劑盒說明書進(jìn)行PCR體系配制。使用Roche 480型實時熒光PCR儀進(jìn)行熒光PCR擴增，根據(jù)試劑盒4組16個檢測指標(biāo)熒光集團(tuán)信號的設(shè)定［2］，進(jìn)行結(jié)果判斷。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。所得數(shù)據(jù)采用χ2檢驗進(jìn)行分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 呼吸道病毒病原譜檢出情況 在240份兒童呼吸道感染病例樣本中，99份樣本檢出呼吸道病毒，陽性率為41.25%。其中流感病毒檢出陽性率最高為9.58%，其次為副流感病毒和鼻病毒，檢出陽性率為7.92%。還出現(xiàn)兩種病毒的混合感染共11例。分別出現(xiàn)人偏肺病毒和副流感病毒混合感染1例，鼻病毒和腺病毒混合感染4例，流感病毒和副流感病毒混合感染2例，鼻病毒和副流感病毒混合感染4例(表1)。

表1 2014年9月－2016年8月密云區(qū)呼吸道患兒呼吸道病毒病檢出情況(n=240)

2.2 不同季節(jié)檢出情況 對所檢測的呼吸道病毒的總體陽性率而言，春季檢出陽性率最高，為50.00%，夏季最低，為28.17%。經(jīng)χ2檢驗，不同季節(jié)陽性檢出率有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。其中，流感病毒檢出陽性率在冬季(18.33%)和春季(16.67%)較高，副流感病毒檢出陽性率在夏季(12.68%)和秋季(14.29%)較高。腺病毒檢出陽性率最高的季節(jié)是秋季(6.12%)，冠狀病毒檢出陽性率最高的季節(jié)是冬季(3.33%)，呼吸道合胞病毒檢出陽性率最高的季節(jié)是冬季(13.33%)，人偏肺病毒檢出陽性率最高的季節(jié)是春季(8.33%)，鼻病毒檢出陽性率最高的季節(jié)是春季(10.00%)和秋季(14.29%，表2和3)。

表2 兒童呼吸道病毒感染的流行特征

2.3 不同年齡組患兒呼吸道病毒檢出陽性率比較依據(jù)患兒年齡，分為0～、4～、7～14歲3個年齡組對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析，結(jié)果顯示0～歲年齡組呼吸道病毒檢出陽性率最高，為43.81%，經(jīng)χ2檢驗，不同年齡組檢出陽性率無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05，表2)。其中，4～歲組流感病毒檢出陽性率最高，為14.08%;0～歲年齡組副流感病毒檢出陽性率最高，為9.52%;7～14歲組鼻病毒檢出陽性率最高，為7.81%，其中博卡病毒只在0～歲組有檢出。

表3 不同季節(jié)8種呼吸道病毒檢出情況

表4 不同年齡組8種呼吸道病毒檢出情況

2.4 不同性別患兒病毒檢出情況 男童檢出陽性率為34.62%(45/130)，女童檢出陽性率為49.09%(54/110)。經(jīng)χ2檢驗，性別之間檢出陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05，表2)。

3 討論

3.1 調(diào)查表明，密云區(qū)兒童呼吸道病毒檢出陽性率與文獻(xiàn)報道的北京地區(qū)兒童呼吸道病毒檢出陽性率基本一致［3］。其中檢出陽性率較高的是流感病毒、副流感病毒和鼻病毒，這與石偉先等［3］、荊紅波等［4］研究結(jié)果一致。

3.2 本研究發(fā)現(xiàn)，兒童呼吸道病毒檢出存在明顯的季節(jié)性，秋季和春季是檢出陽性率較高的季節(jié)，這與北京地區(qū)春秋寒冷，氣溫晝夜溫差較大，大氣污染有關(guān)［5］，李權(quán)恒等［6］研究顯示，呼吸道病毒陽性率與空氣質(zhì)量指數(shù)、PM2.5、NO2和SO2等空氣污染物有關(guān)。在春季中流感病毒、鼻病毒和人偏肺病毒檢出陽性率高，夏季中副流感病毒檢出陽性率高，秋季中副流感和鼻病毒檢出陽性率高，冬季中流感病毒和呼吸道合胞病毒檢出陽性率高，與有關(guān)研究結(jié)果一致［7－11］。整體趨勢是冬春季為兒童呼吸道傳染病流行高峰，與既往研究結(jié)果一致［11］。對于不同年齡組，呼吸道病毒檢出率無差異，這與有關(guān)研究結(jié)果不一致［12，13］。流感病毒，副流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、人偏肺病毒和鼻病毒在各年齡組都有檢出，說明各年齡段兒童對呼吸道病毒都易感，因為兒童的抵抗力、免疫力較低，所以應(yīng)做好兒童呼吸道傳染病防病工作。呼吸道病毒檢出率與也性別有關(guān)，女童較男童易感，這與有關(guān)報道不同［13，14］，可能與檢測樣本數(shù)量有限以及本地區(qū)的一些未知因素有關(guān)，在以后要增加樣本量并進(jìn)行多層面的研究分析。

綜上所述，本研究對密云區(qū)兒童呼吸道傳染病病毒流行特征有一定的認(rèn)識。但是由于樣本量較少，也只檢測了病毒類病原，存在一定局限性。此外對于住院患兒也只檢測了上呼吸道樣本，對病毒的檢出勢必存在一定影響，今后應(yīng)該增加對下呼吸道樣本的采集和分析。

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