袁海英　葉利明

摘要：建立強力枇杷露中齊墩果酸和熊果酸含量測定方法。采用HPLC法，色譜柱為sepax Aumthyst C18-H（4.6mm×250mm，5μm）；流動相為乙腈一甲醇-0.5%乙酸銨溶液（體積比67：12：21）；流量為1.0mL/min；柱溫為30℃；檢測波長為210nm。齊墩果酸的進樣量在0.05～1.59μg呈良好的線性關系（r=-1.0000），精密度RSD=1.23%，平均加樣回收率為93.7%，RSD=1.40%；熊果酸的進樣量在0.19～6.20μg呈良好的線性關系（r=1.0000），精密度RSD=0.20%，平均加樣回收率為98.6%，RSD=1.96%。該方法簡便、準確、重復性好，可用于強力枇杷露中齊墩果酸和熊果酸的含量測定。

關鍵詞：強力枇杷露；齊墩果酸；熊果酸；高效液相色譜法

文獻標志碼：A 文章編號：1674-5124（2018）05-0063-04

0引言

強力枇杷露具有養(yǎng)陰斂肺，鎮(zhèn)咳祛痰的功效。臨床用于久咳勞嗽，支氣管炎等。其質量標準收載于《衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第二冊》第272頁，該處方由枇杷葉、罌粟殼、百部、白前、桑白皮、桔梗、薄荷腦組成。標準中僅有兩項顏色反應鑒別項，既無薄層鑒別也無含量測定項。目前已有較多文獻對強力枇杷露中罌粟殼的有效成分含量測定進行了研究，但對于處方中的君藥枇杷葉中的有效成分含量測定研究幾乎沒有；故本實驗采用HPLC法測定了強力枇杷露中齊墩果酸和熊果酸的含量，結果表明本方法結果準確、可靠、重復性好，可用于強力枇杷露中齊墩果酸和熊果酸的含量控制。

1實驗部分

1.1儀器與試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國Agilent）；電子天平（梅特勒，XA205）；電子天平（YP402N）；UPT-1-40L優(yōu)普超純水器。乙腈、甲醇為色譜純；其余試劑為分析純；水為超純水。齊墩果酸對照品，中國食品藥品檢定研究院，批號：110709-201206，純度94.9%：熊果酸對照品，中國食品藥品檢定研究院，批號：110742-201421，純度93.8%。強力枇杷露，由華潤三九（雅安）藥業(yè)有限公司生產，批號分別為160825、160850、160852、160854、160901、160904、160905、160906、160913、160915。

1.2實驗方法與結果

1.2.1色譜條件與系統適應性試驗

采用Sepax Aurethyst C18-H色譜柱（4.6 BBX250mm，5 μm），流動相為乙腈-甲醇-0.5%7，酸銨溶液（體積比67：12：21），流量1.0mL/min，檢測波長210nm，柱溫30℃，進樣量20μL，取對照品、陰性樣品和供試品溶液分別進樣，齊墩果酸和熊果酸的保留時間分別為20.5min和21.6min，主峰與雜質峰的分離良好，無陰性干擾，拖尾因子分別為1.01和1.14，分離度分別為16.7和1.9，理論板數以熊果酸峰計算大于5000（見圖1）。

1.2.2溶液的制備

精密稱取齊墩果酸對照品13.17 mg于10 mL容量瓶中，加乙醇定容制成對照儲備液。另精密稱取熊果酸對照品10.65 mg于50mL容量瓶中，再精密吸取齊墩果酸對照儲備液2 mL置該量瓶中，加乙醇溶解并定容，搖勻得齊墩果酸質量濃度為49.99 μg/mL、熊果酸質量濃度為199.8 μg/mL的混合對照溶液。精密量取強力枇杷露樣品25mL，用正丁醇一甲醇（體積比10：1，水飽和）混合溶液振搖提取4次（25，25，25，20mL），合并正丁醇一甲醇（10：1，水飽和）溶液，用正丁醇飽和的水20mL洗滌，棄去水液，分取正丁醇液，水浴蒸干，殘渣加甲醇使溶解并轉移至5 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至亥0度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取處方比例的各藥材，按工藝制備方法制備缺枇杷葉的陰性樣品，照供試品處理方法制備陰性樣品溶液。

1.2.3線性關系考察

配制齊墩果酸為79.344，39.672，19.826，9.918，4.959，2.480 I～g/mL，熊果酸為310.016，155.008，77.504，38.752，19.376，9.688μg/mL的齊墩果酸和熊果酸混合對照品溶液，分別精密吸取上述不同濃度的混合對照品溶液各20μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定其峰面積，并以峰面積為縱坐標y，進樣量為橫坐標x（μg），進行線性回歸。齊墩果酸的回歸方程為：y=485.4903x-1.0791，r=1.0000，結果表明齊墩果酸在0.05-1.59μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。熊果酸的回歸方程為：7=437.8244x+2.115 1，r=1.0000，結果表明熊果酸在0.19-6.20μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。結果如圖2所示。

1.2.4儀器精密度試驗

精密吸取上述對照品溶液10μL，連續(xù)進樣6次，測得齊墩果酸峰面積RSD=1.23%（n=6），熊果酸峰面積RSD=0.20%（n=6），結果見表1。表明儀器的精密度良好。

1.2.5重復性試驗

取同一批號的強力枇杷露樣品，按1.2.2項方法平行制備6份供試品溶液，分別進樣，計算得齊墩果酸平均含量為1.95 μg/mL，RSD=1.56%（n=6），熊果酸平均含量為9.82μg/mL，RSD=0.49%（n=6），結果見表2。表明本方法的重復性良好。

1.2.6穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，分別于室溫下放置0，2，4，8，12，24h后進樣10μL，計算得24h內齊墩果酸峰面積RSD=0.47%，熊果酸峰面積RSD=0.40%，結果見表3。表明齊墩果酸和熊果酸在24h內穩(wěn)定。

1.2.7加樣回收率試驗

精密量取25 mL已知含量的強力枇杷露樣品共9份，分別精密加入低、中、高濃度的對照品溶液，混勻后按1.2.2項下方法制備供試品溶液，并按1.2.1項下方法進樣，記錄峰面積，計算得齊墩果酸和熊果酸的平均回收率分別為93.7%（RSD=1.40%）、98.6%（RSD=1.96%），結果見表4。表明本方法回收率良好。

1.2.8樣品測定

取10個批號的強力枇杷露樣品，按1.2.2項方法制備供試品溶液，并按1.2.1項色譜條件進樣，每批樣品采用雙樣雙針測定，以外標法計算10批樣品中齊墩果酸和熊果酸的含量，結果見表5。10批強力枇杷露中齊墩果酸和熊果酸的總含量在7.3～12.0μg/mL之間，批間精密度RSD約16%，表明成品含量批間波動較大。

2結束語

在篩選色譜柱時曾對不同廠家的c18柱進行了考察，最終選擇了1.2.1項下的色譜柱，該色譜柱能使樣品中齊墩果酸和熊果酸的對稱因子和分離度較好。此外在供試品萃取時曾考慮使用水飽和的正丁醇進行萃取，但乳化現象較嚴重，故在正丁醇中加入一定量的甲醇并用水飽和后，萃取時乳化現象可得到明顯改善。

現代藥物化學研究表明：枇杷葉中的主要有效成分即為三萜酸類化合物，其中主要是烏索酸（uA，即熊果酸）、齊墩果酸（OA）和委陵菜酸（TA）等母體的衍生物，具有抗炎止咳、降血糖、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤等藥理作用。通過10批樣品的含量測定結果表明：強力枇杷露中齊墩果酸和熊果酸的總含量在10μg/mL左右，而枇杷葉原料中齊墩果酸和熊果酸的總量約為7～12mg/g，其轉移率僅2%左右，提示需對強力枇杷露的提取工藝進行優(yōu)化以提高齊墩果酸和熊果酸的轉移率，另外也表明了枇杷葉中可能還有其他水溶性成分具有抗炎止咳的功效。

（編輯：莫婕）