汪小柳，劉志軍（南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院皮膚科，湖南衡陽421001）

尖銳濕疣（CA）是人乳頭瘤病毒（HPV）感染人生殖器及附近表皮引起的皮膚、黏膜良性增生性疾病[1]，是臨床最常見的性傳播疾病之一[2]。目前，該病在治療方面尚無有效的抗病毒藥物，且多數(shù)治療為有創(chuàng)性療法，且疼痛大、復(fù)發(fā)率高[3]，皮損長期反復(fù)發(fā)作加之各種療法的不斷刺激還可能誘發(fā)癌變[4]。有關(guān)CA疣體的發(fā)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)乃至惡變的機制仍不清楚。如何有效抑制疣體形成，減少復(fù)發(fā)，一直是困擾臨床醫(yī)生的難題，而進一步闡明CA的發(fā)病機制顯然是解決這一問題的關(guān)鍵。

Brn?3α 基因是 POU（Pit?Oct?Unc）轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一[5]，在成人周圍和中樞神經(jīng)系統(tǒng)特定區(qū)域高表達[6]。有研究表明，Brn?3α 能激活 HPV16、18 上游調(diào)控區(qū)域的表達，后者可激活HPV E6、E7致癌基因轉(zhuǎn)錄，可能在宮頸細胞早期惡化過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[7]。但Brn?3α是否與CA的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，目前尚無文獻報道。因此，本研究檢測了CA和正常皮膚組織中Brn?3α表達水平的變化，并探討了其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1月至2017年1月本院門診或病房未接受過任何治療的CA患者皮損25例，并經(jīng)組織病理學(xué)檢查證實?；颊吣挲g18～50歲，平均（29.7±8.21）歲。正常皮膚組織取自同期在本院門診接受包皮環(huán)切術(shù)患者 20例，年齡 15～35歲，平均（28.30±7.88）歲。所有研究對象均簽署了本研究知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 采用免疫組織化學(xué)SP法。取CA患者皮損和正常皮膚組織以4%多聚甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切取5μm厚切片。石蠟切片按常規(guī)脫蠟至水、抗原修復(fù)、通透。再加用正常山羊血清在37℃水洛鍋中孵育20 min。最后按免疫組織化學(xué)試劑盒說明書常規(guī)進行免疫組織化學(xué)染色?？笲rn?3α抗體為l∶100。

1.2.2 判斷標準 免疫組織化學(xué)染色顯示有棕色或有棕色顆粒的細胞為陽性細胞。光鏡下觀察[在高倍鏡（400×）下隨機選取5個視野]計數(shù)陽性細胞數(shù)的平均百分比。定義0～5%為0分，＞5%～25%為1分，＞25%～50%為2分，＞50%～75%為3分，≥75%為4分；細胞染色強度判定：未染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；二者相乘所得總分小于或等于3分為陰性，＞3～6 分為弱陽性，＞6～9 分為陽性，＞9 分為強陽性。統(tǒng)計比較CA患者皮損和正常皮膚組織Brn?3α染色陽性率和染色強度。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料以±s表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示，采用 Kruskal?Wallis檢驗。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組研究對象Brn?3α蛋白表達陽性率比較 CA組患者皮損Brn?3α表達陽性率與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.002，P=0.965）。見表1。

表1 兩組研究對象Brn?3α蛋白表達陽性率比較

2.2 兩組研究對象Brn?3α表達強度比較 兩組研究對象Brn?3α均表達于細胞膜、細胞質(zhì)中。見圖1。CA組患者皮損Brn?3α表達水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（T=167.5，P=0.0068）。見表2。

圖1 兩組研究對象Brn?3α表達比較（免疫組織化學(xué)，400×）

表2 兩組研究對象Brn?3α表達強度比較

3 討 論

CA是一種臨床常見性傳播疾病，增生快、復(fù)發(fā)率高，臨床治療較棘手[7?9]。由于皮損長期反復(fù)發(fā)作及各種療法不斷刺激，甚至有可能誘發(fā)癌變，如宮頸癌[10?11]。

有研究發(fā)現(xiàn)，CA的發(fā)生是一個極其復(fù)雜的多基因調(diào)控異常的過程，不僅與細胞異常增殖有關(guān)，還涉及細胞異常凋亡[12?13]。多種基因參與了調(diào)控細胞的增殖、分化與凋亡，其中Brn?3α基因是參與細胞調(diào)控的重要基因，在人類宮頸細胞中，Brn?3α發(fā)揮激活編碼HPV E6、E7蛋白基因轉(zhuǎn)錄的作用，在宮頸轉(zhuǎn)化過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。

Brn?3α是一種細胞轉(zhuǎn)錄因子，屬于POU家族。POU家族有一段結(jié)合DNA的區(qū)域，稱為POU結(jié)構(gòu)域。Brn?3α屬POU家族轉(zhuǎn)錄因子第Ⅳ亞類。其POU結(jié)構(gòu)域具有高度保守的DNA序列，氨基酸序列有95%同源[14]。

既往對Brn?3α的研究主要集中于神經(jīng)系統(tǒng)，Brn?3α主要表達于周圍神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元亞群中，主要參與神經(jīng)元生存和分化相關(guān)基因的激活[5]。近年來，有研究發(fā)現(xiàn)，Brn?3α在宮頸涂片中容易測得，且與宮頸病變級別明顯相關(guān)。Brn?3a在原位癌Ⅲ級患者宮頸活檢組織中表達水平升高，可作為HPV致癌基因轉(zhuǎn)錄活化的生物標志物[15]。

本研究結(jié)果顯示，作為宮頸癌的癌前病變，CA的發(fā)生也與Brn?3α異常表達相關(guān)。Brn?3α在正常皮膚的基底層細胞和CA疣體細胞中均有表達，二者表達陽性率分別為 80%、84%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。然而，CA 組患者皮損Brn?3α表達水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。因此，檢測Brn?3α在CA損害中的表達水平可作為臨床篩查和CA隨訪的輔助工具，也有望成為治療宮頸病變的靶點。因此，Brn?3α在CA病變過程中的具體作用及其在診治中的應(yīng)用尚有待于進一步研究。

參考文獻

[1]HUANG S，TANG W，ZHU Z，et al.Higher prevalence of sexual trans?mitted diseases and correlates of genital warts among heterosexual males attending sexually transmitted infection clinics（MSCs）in Jiang?men，China：implication for the up?taking of STD related service[J].PLoS One，2015，10（3）：e0121814.

[2]宋曉彬，茅范貞，周燕，等.發(fā)展中國家人乳頭瘤病毒疫苗衛(wèi)生經(jīng)濟學(xué)評價研究的系統(tǒng)綜述[J].中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2016，50（1）：85?90.

[3]SPINU D，RǎDULESCU A，BRATU O，et al.Giant condyloma acumina?tum?Buschke?Lowenstein disease?a literature review[J].Chirurgia（Bu?cur），2014，109（4）：445?450.

[4]SKINNER SR，APTER D，DE CARVALHO N，et al.Human papilloma?virus（HPV）?16/18 AS04?adjuvanted vaccine for the prevention of cervi?cal cancer and HPV?related diseases[J].Expert Rev Vaccines，2016，15（3）：367?387.

[5]RIPLEY BJ，RAHMAN MA，ISENBERG DA，et al.Elevated expres?sion of the Brn?3a and Brn?3b transcription factors in systemic lupus er?ythematosus correlates with antibodies to Brn?3 and overexpression of Hsp90.[J].Arthritis Rheum，2005，52（4）：1171?1179.

[6]FAULKES DJ，ENSOR E，LE ROUZIC E，et al.Distinct domains 0f Brn?3α regulate apoptosis and neurite outgrowth in vivo[J].Neuroreport，2004，15（9）：1421?1425.

[7]張晶，喻楠，等.尖銳濕疣預(yù)防性治療及復(fù)發(fā)因素研究進展[J].健康前沿，2017，26（3）：230.

[8]MAATOUK I.Vitiligo?like lesions following imiquimod 5%application for condyloma acuminata：An additional case[J].Indian J Dermatol Ve?nereol Leprol，2016，82（5）：572?574.

[9]XIE Z，ZHANG M，XIONG W，et al.Immunotolerant indoleamine?2，3?dioxygenase is increased in condyloma acuminata[J].Br J Dermatol，2017，177（3）：809?817.

[10]LAJER CB，GARN?S E，F(xiàn)RIIS?HANSEN L，et al.The role of miR?NAs in human papilloma virus（HPV）?associated cancers：bridging be?tweenHPV?related head and neck cancer and cervical cancer[J].Br J Cancer，2012，106（9）：1526?1534.

[11]ZEKAN J，SKERLEV M，MILI? L，et al.Human papillomavirus?related diseases of the female lower genital tract：oncogenic aspects and molecu?lar interaction[J].Coll Antropol，2014，38（2）：779?786.

[12]陳敏聰，王建琴，方銳華，等.尖銳濕疣皮損中Caspase 8與p?Akt的表達[J].中華皮膚科雜志，2017，50（5）：366?369.

[13]解方，李承新.尖銳濕疣免疫學(xué)發(fā)病機制研究進展[J].傳染病信息，2015，28（3）：175?178.

[14]PEIXOTO P，LIU Y，DEPAUW S，et al.Direct inhibition of the DNA?binding activity of POU transcription factors Pit?1 and Brn?3 by selec?tive binding of a phenyl?furan?benzimidazole dication[J].Nucleic Acids Res，2008，36（10）：3341?3353.

[15]ARTINGER KB，F(xiàn)EDTSOVA N，RHEE JM，et al.Placodal origin of Brn?3?expressing cranial sensory neurons[J].J Neurobiol，1998，36（4）：572?585.