阿依古·吐熱克，米合勒阿依·艾克帕，巴吐爾·買買提明，麥合蘇木·艾克木，阿不都熱依木·玉蘇甫

(新疆醫(yī)科大學(xué)1維吾爾醫(yī)學(xué)院，2中心實驗室，烏魯木齊　830011；3新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)民族醫(yī)藥管理局，烏魯木齊　830001)

鐵線蕨總黃酮對哮喘大鼠模型及其尿液代謝物的影響

阿依古·吐熱克1，米合勒阿依·艾克帕1，巴吐爾·買買提明2，麥合蘇木·艾克木1，阿不都熱依木·玉蘇甫3

(新疆醫(yī)科大學(xué)1維吾爾醫(yī)學(xué)院，2中心實驗室，烏魯木齊830011；3新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)民族醫(yī)藥管理局，烏魯木齊830001)

摘要：目的探討鐵線蕨總黃酮(TXJF)對哮喘模型大鼠及其尿液代謝物的影響。方法選取60只健康雄性SD大鼠，采用OVA致敏及霧化吸入方法，建立哮喘大鼠模型，隨機(jī)分為正常對照組，陽性對照組(醋酸地塞米松)，哮喘模型組，鐵線蕨總黃酮(TXJF)組(高、中、低劑量)各組10只，TXJF組以TXJF進(jìn)行灌胃給藥，檢測各組大鼠肺泡灌洗液(BALF)中的炎癥細(xì)胞數(shù)目及分類，肺組織病理形態(tài)學(xué)改變，測定血清免疫球蛋白E(IgE)，從而進(jìn)行模型的評價及觀察TXJF對哮喘模型大鼠的影響。收集大鼠尿液，利用核磁共振波普(1H-NMR)技術(shù)檢測氫譜，從而建立大鼠尿液代謝指紋譜，正交偏最小二乘判別分析法(OPLS-DA)，運用偏最小二乘判別分析法(PLS-DA)觀察各組大鼠尿液中代謝產(chǎn)物的差異性。結(jié)果與正常對照組相比較，哮喘模型組大鼠出現(xiàn)哮喘樣癥狀，BALF中細(xì)胞總數(shù)及炎癥細(xì)胞百分率升高，肺組織出現(xiàn)病理學(xué)改變，血清IgE水平升高；TXJF組大鼠哮喘樣癥狀有所好轉(zhuǎn)，BALF中細(xì)胞總數(shù)及炎癥細(xì)胞百分率下降、肺組織病理改變情況減輕；與哮喘模型組比較，TXJF組血清IgE水平下降。哮喘模型組尿液中異亮氨酸、檸檬酸、琥珀酸、甘氨酸、丙氨酸含量降低，乳酸含量升高。與哮喘模型組相比較，高劑量TXJF組中異亮氨酸、琥珀酸、檸檬酸、肌酸、?；撬?、丙氨酸、甘氨酸含量升高，乳酸等含量降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論TXJF能夠改善哮喘大鼠的一般情況，減輕肺組織病理改變，降低血清IgE水平，降低肺泡灌洗液(BALF)中的炎癥細(xì)胞數(shù)目及分類，并且對哮喘大鼠尿液代謝物具有顯著的影響，從而起到治療哮喘的作用，其作用機(jī)制可能與作用于哮喘大鼠體內(nèi)的氨基酸代謝、能量代謝等多種代謝途徑有關(guān)聯(lián)。

關(guān)鍵詞：鐵線蕨總黃酮(TXJF)；哮喘大鼠模型；尿液代謝物

中圖分類號：R963

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1009-5551(2018)05-0590-08

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2018.05.016

基金項目：新疆維吾爾自治區(qū)衛(wèi)生和計劃生育委員會人才培養(yǎng)計劃項目(2016-03-12)

作者簡介：阿依古·吐熱克(1989-)，女，在讀碩士，研究方向：藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)理。

通信作者：阿不都熱依木·玉蘇甫，男，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)理，E-mail：ayusup@126.com。

本文引用：阿依古·吐熱克，米合勒阿依·艾克帕，巴圖爾·買買提明,等.鐵線蕨總黃酮對哮喘大鼠模型及其尿液代謝物的影響[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2018,41(5):590-596,601.doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2018.05.016

EffectsofthetotalflavonoidsofAdiantumcapillus-venerisL.onasthmaratmodelandurinarymetabolites

AyiguTureke1,MiheleayiAikepa1,BatuerMaimaitiming2,MaihesumuAikemu1,AbdiryimYusup3

(1InistituteofTraditionalUyghurMedicine；2CentralLaboratory，XinjiangMedicalUniversity，Urumqi830011，China；3AdministrationBureauofTraditionalChineseMedicineandEthnicGroupMedicineofXinjiangUyghurAutonomousRegion,Urumqi830001,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the effect of total flavonoids ofAdiantumcapillus-venerisL.on asthma rat models and their urine metabolites.MethodsFifty healthy male Sprague-Dawley rats were to sensitize and inhale by OVA to establish an asthmatic rat model.The rats were randomly divided into normal control group,positive control group(dexamethasone acetate group),asthma model group,and TXJF(high,medium,and low-dose)groups(each group has 10 rats),and TXJF was administered intragastrically.The number and classification of inflammatory cells in bronchoalveolar lavage fluid(BALF),the histopathological changes of lung tissue and the serum IgE level were detected to model evaluation and observe the effect of TXJF on asthma model rats.The rat urine and the proton spectrum was detected by nuclear magnetic resonance(1H-NMR)technique to establish the metabolic fingerprint of rat urine.The difference in metabolites between urine metabolites of rats in each group were observed using the Orthogonal Partial Least Squares Discriminant Analysis(OPLS-DA)and Partial Least Squares Discriminant Analysis(PLS-DA).ResultsCompared with the normal control group,the asthma model group showed asthma-like symptoms,the total number of cells and inflammatory cells in the BALF increased,the pathological changes appeared in the lung tissue,serum IgE levels increased;asthma-like symptoms in the TXJF group rats were improved,the percentage of total cells and inflammatory cells in the BALF decreased,and the pathological changes in the lung tissue alleviated.Compared with the asthma model group,serum IgE levels in the TXJF group decreased.The levels of isoleucine,citric acid,succinic acid,glycine,and alanine in the urine of the asthma model group decreased,and the lactate content increased.Compared with the asthma model group,the content of isoleucine,succinic acid,citric acid,creatine,taurine,alanine,and glycine in the high-dose TXJF group increased,and the content of lactic acid decreased.The difference was statistically significant(P<0.05).ConclusionTXJF can improve the general condition of asthmatic rats,reduce the pathological changes of lung tissue,reduce the level of serum IgE,decrease the number and classification of inflammatory cells in BALF,and have significant effect on urinary metabolites in asthmatic rats,thus it plays a role in the treatment of asthma.The mechanism of action may be related to various metabolic pathways such as amino acid metabolism and energy metabolism in asthmatic rats.

Keywords:Total flavonoids of Adiantum(TXJF);asthmatic rat model;urine metabolites

鐵線蕨(Adiantumcapillus-venerisL.)為鐵線蕨科多年生常綠草本植物，含有揮發(fā)油、多糖類、黃酮類、生物堿類及萜類等化學(xué)成分[1]，具有止咳化痰、消炎止痛、溫腎利尿、抗炎抑菌、調(diào)節(jié)血糖平衡、抗氧化、抗腫瘤等藥理作用[2]，主要用于傷風(fēng)感冒、哮喘、頭疼胸痛、久咳多痰、等疾病的治療[3-7]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)鐵線蕨總黃酮(TXJF)具有抗炎、平喘、止咳及祛痰作用并呈劑量依賴性[8]，但其抗哮喘作用及作用機(jī)理尚不明確。哮喘是由多種炎癥細(xì)胞參與的慢性氣道炎癥性疾病，因其發(fā)生與發(fā)展的病因諸多、復(fù)雜，至今對其機(jī)制尚未解釋清楚。代謝組學(xué)作為系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分，具有整體、動態(tài)、綜合與分析的特點，與中醫(yī)藥的整體觀、系統(tǒng)觀及辨證論治方式不謀而合，被越來越多的應(yīng)用于中藥藥效及作用機(jī)理等研究[9-11]。本研究在建立哮喘大鼠模型的基礎(chǔ)上干預(yù)TXJF，測定灌洗液(BALF)細(xì)胞總數(shù)及炎癥細(xì)胞百分率，觀察大鼠肺組織病理學(xué)改變，檢測大鼠血清總IgE水平，觀察TXJF對大鼠哮喘模型的影響，并利用核磁共振波普(1H-NMR)技術(shù)測定TXJF對哮喘模型大鼠尿液代謝物的變化，旨在為TXJF的抗哮喘作用及可能的作用機(jī)理方面提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1　材料

1.1試劑與藥品卵清蛋白(美國Sigma公司，批號A5253)，20%氫氧化鋁膠生理鹽水(齊魯動物保健品有限公司，批號1507006)，醋酸地塞米松片(浙江仙琚制藥股份有限公司，批號151288)，0.9%氯化鈉注射液(國藥集團(tuán)新疆制藥有限公司，批號1608008)，4%多聚甲醛固定液(北京索萊寶生物科技有限公司，批號AR10680)，蘇木素-伊紅(HE)染色試劑盒(上海莼試生物技術(shù)有限公司，批號C0106，C0107)，重水(美國CIL公司，批號R03010104)，大鼠免疫球蛋白E(IgE)酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)試劑盒(武漢伊萊瑞特生物科技有限公司，批號E-EL-R0517c)。

1.2儀器C2500-R-230V型高速離心機(jī)(美國Labnet公司)，ICV-450型電熱恒溫培養(yǎng)箱(日本ASONE公司)，MK3型酶標(biāo)儀(美國Thermo Fisher公司)，W004型壓縮式霧化器(江蘇富林醫(yī)療設(shè)備有限公司)，Inova-600型核磁共振波譜儀(美國Varian公司)，GS-15R型低溫高速離心機(jī)(美國Beckman公司)，DW-86L286型超低溫冰箱(青島海爾特種電器有限公司)，WG-1000-7型核磁管(美國Wilmad-Labglass公司)，BSA224S-CW型電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司)，RM2245型病理切片機(jī)、100-04型圖像分析儀和DM 3000型顯微鏡(德國Leica公司)。

1.3藥材鐵線蕨全草2016年6月購自新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)院藥房，經(jīng)該醫(yī)院艾尼瓦爾·塔力甫主任藥師鑒定為鐵線蕨科多年生常綠草本植物鐵線蕨(Adiantumcapillus-venerisL.)的干燥地上部分。

1.4動物SPF級雄性SD大鼠60只，體質(zhì)量(200±30)g，購自于新疆醫(yī)科大學(xué)動物實驗研究中心并提供飼料，動物許可證號SCXK(新)2016-0003。

2　方法

2.1鐵線蕨總黃酮提取物(TXJF)的制備[12]稱取鐵線蕨藥材5 kg，加25倍量50%乙醇回流提取2次，每次2 h，收集提取液，減壓濃縮得鐵線蕨提取物。以聚酰胺樹脂吸附法純化，選用60～100目聚酰胺樹脂，將聚酰胺樹脂用水和無水乙醇各3 BV洗脫除雜后開始上樣，上樣液質(zhì)量濃度5.412 6 g/L，流速1.0mL/min，上樣完成后家70%乙醇6 BV洗脫，收集第2～6 BV洗脫液，減壓濃縮，恒溫真空干燥，得鐵線蕨總黃酮粉末，備用。以蘆丁為對照品，NaNO2-Al(NO3)3-NaOH為顯色劑，采用紫外-分光光度法測得鐵線蕨總黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)51.01%。

2.2動物分組、造模及給藥將SD大鼠60只隨機(jī)分成6組，每組10只，分別為正常對照組、哮喘模型組、陽性對照(醋酸地塞米松)組及TXJF高、中、低劑量組，各組大鼠均在清潔動物房內(nèi)用普通飼料飼養(yǎng)，相對濕度60%～80%，溫度(26±3)℃，自由飲食和飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)1 W后，于第1、8天，除正常對照組以外其余組以10%卵清蛋白混合溶液[卵清蛋白(OVA)10 g+氫氧化鋁膠生理鹽水100 g] 1mL腹腔注射致敏，正常對照組以生理鹽水1mL代替，從第15天開始每天將正常對照組(等量生理鹽水)，哮喘模型組(等量生理鹽水)，陽性對照組(醋酸地塞米松0.3mg/kg)和TXJF高、中、低劑量組(0.8，0.4，0.2 g/kg)大鼠灌胃給藥，30min后分別置于密閉式自制有機(jī)玻璃霧化箱內(nèi)，以10% OVA霧化吸入 20min激發(fā)引喘，每天1次，連續(xù)16 d。在霧化過程中觀察各組大鼠的一般狀態(tài)，哮喘模型組出現(xiàn)皮膚癢、繞鼻、腹式呼吸、呼吸頻率加速加深、焦躁不安、仰頭呼吸、張口呼吸、四肢癱軟及行動遲緩等病一系列哮喘樣癥狀。正常對照組未見上述癥狀，陽性對照組及TXJF高、中、低劑量組中可見上述癥狀以不同程度的改善。

2.3標(biāo)本采集各組動物末次激發(fā)后放在代謝籠，收集24h內(nèi)尿液，尿液里加入0.1%疊氮鈉溶液(NaN3)100μL，4℃，10 000 r/min離心10min，取上清液，置于-80℃冰箱保存，用于1H-NMR檢測；由大鼠腹主動脈采血，收集好的血液樣本4℃，3000 r/min離心10min，分離血清，置于-80℃冰箱保存，用于血清IgE水平測定；迅速打開胸腔，露出氣管和肺，從甲狀軟骨上部切開V形裂口，插入磨平的針頭，用線結(jié)扎固定，注入5%生理鹽水(冷藏)3mL，立刻回抽，收集灌洗液(BALF)，灌洗3次，回收的BALF以4℃，3000 r/min離心10min。將沉淀物置于-4℃冰箱內(nèi)保存，用于BALF中細(xì)胞總數(shù)計數(shù)及分類。取大鼠右肺中葉，以4%多聚甲醛溶液固定，組織石蠟包埋，于內(nèi)三分之一處進(jìn)行連續(xù)切片(切片厚度約3 μm)，以HE染色試劑盒進(jìn)行染色，觀察肺組織炎癥細(xì)胞浸潤情況。

2.4BALF中炎癥細(xì)胞總數(shù)計數(shù)及分類及血清IgE水平檢測將BALF離心后沉積物用10%小牛血清PBS100μL懸浮細(xì)胞，吸取0.1mL置于細(xì)胞計數(shù)板上，細(xì)胞總數(shù)在顯微鏡下計數(shù)。取0.01mL涂片，制作3張涂片及瑞氏染色，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)分類，測量細(xì)胞總數(shù)與Ly、Neu、Eos的百分比。嚴(yán)格按照大鼠血清IgE水平ELISA檢測試劑盒說明書，檢測各組大鼠血清IgE水平。

2.51H-NMR尿液樣品的處理解凍尿液樣品至常溫，取400μL尿液加入以重水配制的200μL磷酸鹽緩沖液，將混合液用低溫離心機(jī)以4℃，10 000 r/min，離心10min，取上清混合液550μL移入至5mm的核磁管里，用于核磁共振檢測。

2.61H-NMR數(shù)據(jù)采集與預(yù)處理尿液1H-NMR譜的測試是用Inova600型核磁共振波譜儀，NOESYPRESAT-ID脈沖序列進(jìn)行氫譜測定，測試溫度為25℃，頻率為600 MHz，掃描次數(shù)為128次，采樣數(shù)據(jù)點為32 k，譜寬為10 000 Hz，采樣時間推延2s，抑制水峰是以預(yù)飽和方法來進(jìn)行。1H-NMR圖譜用MestReNova-6.1軟件進(jìn)行手動調(diào)整基線及相位，以乳酸化學(xué)位移1.32 ppm的質(zhì)子信號作為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行定標(biāo)，在0.5～9.0 ppm范圍內(nèi)將圖譜進(jìn)行自動積分，在4.68～5.20 ppm段消除水峰的信號。

2.7統(tǒng)計學(xué)處理

2.7.2尿液樣品1H核磁共振圖譜(1H-NMR)數(shù)據(jù)采用SIMCA-P+11軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，分析方法為(1)偏最小二乘判別分析法(PLS-DA)[13]：主要用于檢驗?zāi)Ｐ偷挠行苑治觯?2)正交偏最小二乘判別分析[14](OPLS-DA)：主要用于協(xié)助驗證模型的有效性以及發(fā)現(xiàn)2組之間存在的差異有顯著性變化的物質(zhì)。

3　結(jié)果

3.1肺組織HE染色觀察及分析正常對照組大鼠支氣管上皮組織完整，肺泡間隔及腔內(nèi)無明顯炎癥細(xì)胞浸潤。哮喘模型組大鼠細(xì)小支氣管壁及伴行血管周圍有大量的炎癥細(xì)胞浸潤，以淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞為主，肺泡腔內(nèi)炎性細(xì)胞滲出。氣道黏膜皺褶增多，出現(xiàn)黏膜脫落情況，平滑肌明顯增厚，管腔變窄，部分肺泡壁斷裂，融合成肺氣腫，肺大泡。陽性對照組大鼠與TXJF組大鼠中上述病理改變較哮喘模型組減輕，但未痊愈，見圖1。

3.2各組大鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)及Ly、Eos、Neu百分率的比較與正常對照組比較，哮喘模型組大鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)及Ly、Neu 、Eos百分率升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與模型組對比，TXJF高、中、低劑量組大鼠 BALF 中細(xì)胞總數(shù)及Ly、Neu、Eos百分率降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而且呈劑量依賴性，見表1。

3.3各組大鼠血清IgE水平的檢測結(jié)果與正常對照組比較，哮喘模型組大鼠血清IgE水平升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與哮喘模型組比較，陽性對照組及TXJF高、中劑量組大鼠血清IgE水平下降，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，TXJF低劑量組大鼠血清IgE水平變化不明顯，見表1。

圖1　各組大鼠肺組織HE染色圖(×200倍)

表1　各組大鼠BALF中的細(xì)胞總數(shù)及各種炎癥細(xì)胞的百分率比較

注：對正常對照組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05；與TXJF高劑量組比較，△P<0.05。

3.41H-NMR分析結(jié)果

3.4.1尿液中主要代謝物的1H-NMR歸屬通過1H-NMR譜圖對6組大鼠尿液中的差異性代謝產(chǎn)物成分信號進(jìn)行了判別分析及歸屬。有差異性的內(nèi)源性代謝物有異亮氨酸，乳酸，丙氨酸，膽堿，糖蛋白，乙酰乙酸，琥珀酸，檸檬酸，肌酸，甘氨酸，苯丙氨酸，?；撬?，肉堿，二甲胺，尿馬酸，甲酸，不飽和脂肪酸，r-氨基丁酸等含量發(fā)生變化。這些代謝物存在于氨基酸代謝、糖代謝，脂類代謝，嘌呤代謝，能量代謝等對機(jī)體非常重要的多種生物化學(xué)轉(zhuǎn)化的過程，故可將1H-NMR氫譜作為哮喘大鼠尿液代謝指紋譜，用來描述大鼠機(jī)體病理狀況下內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的變化，見圖2。

(注 A.TXJF低劑量組；B.TXJF中劑量組；C.TXJF高劑量組；D.哮喘模型組；E.陽性對照組；F.正常對照組)

圖2尿液1H-NMR圖譜

3.4.2模式識別分析結(jié)果將1H-NMR氫譜分段積分后得出的積分值以PLS-DA與OPLS-DA法分析所獲得3D空間圖與平面散點圖。圖中直觀地反應(yīng)出各組大鼠尿液樣本在空間上的位置，橫縱軸各表示主成分，是沒有單位的標(biāo)尺，不同的顏色代表不同的組別，每一個點代表了一個樣本，各組樣品分布區(qū)域基本分開，哮喘模型組與其他組所占的空間基本上相互獨立的，表明在代謝成分之間有差異，見圖3。在SIM-CA-P+軟件中，通過R2X、R2Y和Q2來表示實驗過程中所建立模型的質(zhì)量評價指標(biāo)。其中R2是所解釋的模型差異，Q2是所預(yù)測的模型差異。R2、Q2值越接近于1，代表模型擬合度越好，越小代表模型擬合度越差，一般認(rèn)為模型的預(yù)測結(jié)果達(dá)到“良”的標(biāo)準(zhǔn)必須要Q2>0.4。PLS-DA分析結(jié)果顯示R2X=0.661，R2Y=0.8，Q2=0.476。Q2>0.4時可以認(rèn)為模型有一定的可靠性，說明各組大鼠尿液代謝成分上有差異。從OPLS-DA圖來看，正常對照組與哮喘模型組，哮喘模型組與陽性對照組，TXJF高劑量組與哮喘模型組，TXJF中劑量組與哮喘模型組，TXJF低劑量組與哮喘模型組的分布區(qū)域是完全分開的，無交叉，無重疊，Q2值依次為0.840，0.904，0.962，0.939，0.889。TXJF各劑量組與模型組OPLS-DA兩兩比較分析結(jié)果中哮喘模型組與TXJF高劑量組的Q2=0.962為最高，說明這2組之間差異性最明顯?？臻g分布圖(a)和散點圖(b)中橫縱坐標(biāo)是沒有單位的標(biāo)尺，表示2個主成分，每個點代表每一個樣本，2組之間無交叉，無重疊，明顯分成2類，說明有差異，見圖4～8。

(注：■正常組●陽性對照組◆哮喘模型組▼高劑量TXJF組▲中劑量TXJF組★低劑量TXJF組)

圖31H-NMR譜PLS-DA分析3D得分圖

3.4.3各組大鼠尿液差異性代謝物的確認(rèn)與正常對照組相比，相關(guān)系數(shù)為負(fù)值的表示在哮喘模型組大鼠尿液中含量降低的化合物，正值的表示在哮喘模型組大鼠尿液中含量升高的化合物。與正常對照組比較，哮喘模型組大鼠尿液中異亮氨酸、丙氨酸、琥珀酸、檸檬酸、肌酸、甘氨酸、苯丙氨酸、?；撬岷拷档?，乳酸、乙酰乙酸、肉堿、二甲胺、不飽和脂肪酸、尿馬酸、甲酸含量升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與哮喘模型組比較，陽性對照組中異亮氨酸、膽堿、糖蛋白、琥珀酸、檸檬酸、r-氨基丁酸等化合物含量升高，乳酸、乙酰乙酸、肉堿、不飽和脂肪酸、甲酸及馬尿酸含量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與哮喘模型組比較，TXJF高劑量組大鼠尿液中異亮氨酸、膽堿、琥珀酸、檸檬酸、肌酸、?；撬帷⒏拾彼?、苯丙氨酸含量升高，乳酸、乙酰乙酸、肉堿、二甲胺、不飽和脂肪酸、甲酸及馬尿酸含量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與哮喘模型組比較，TXJF中劑量組是大鼠尿液中異亮氨酸、糖蛋白、丙氨酸、琥珀酸、r-氨基丁酸、?；撬?、甘氨酸、琥珀酸含量升高，甲酸、乳酸、乙酰乙酸、二甲胺含量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與哮喘模型組比較，TXJF低劑量組大鼠尿液中異亮氨酸、丙氨酸膽堿、琥珀酸、苯丙氨酸含量升高，乙酰乙酸含量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

注：S單峰，d雙重峰，t三重峰，q四重峰，m多峰。

4　討論

實驗結(jié)果表明哮喘模型建立成功。通過藥物干預(yù)，陽性對照組、TXJF各劑量組BALF中細(xì)胞總數(shù)及炎癥細(xì)胞百分率降低，肺組織病理學(xué)改變減輕，IgE水平降低。說明TXJF可能通過抗炎，止咳，平喘作用來降低肺泡灌洗液中的炎癥細(xì)胞及血清IgE，改善肺組織病理學(xué)改變，減輕氣道炎癥。從1H-NMR結(jié)果來看，哮喘模型大鼠尿液中的氨基酸代謝、脂肪代謝、能量代謝等多種代謝途徑出現(xiàn)不同程度的紊亂。TXJF干預(yù)后出現(xiàn)明顯的回調(diào)情況，TXJF可能通過影響并調(diào)節(jié)大鼠機(jī)體內(nèi)的各種代謝通路出現(xiàn)的紊亂即蛋白質(zhì)代謝有關(guān)的異亮氨酸，脂肪代謝有關(guān)的不飽和脂肪酸、能量代謝有關(guān)的乳酸，丙氨酸，琥珀酸等代謝物而起到減輕大鼠機(jī)體的消耗性狀態(tài)，改善通氣和換氣功能，改善缺氧狀態(tài)，增強機(jī)體免疫。此結(jié)果初步說明，TXJF一方面通過減輕氣道炎癥、改善肺組織病理改變等途徑，另一方面可能通過調(diào)節(jié)到哮喘模型大鼠體內(nèi)的多種代謝途徑的紊亂來發(fā)揮抗哮喘作用。本研究進(jìn)一步為TXJF的抗哮喘作用及可能的作用機(jī)制方面提供了有意義的依據(jù)。

[收稿日期：2017-10-02]

(本文編輯施洋)