潘俊英　宋曉玲

(1.內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市蒙醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古　呼和浩特　010030；　2. 內(nèi)蒙古自治區(qū)包頭醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古　包頭　014060)

六味安消散又稱西吉德-6或阿木日-6，是蒙藏醫(yī)常用的經(jīng)典驗方。制劑處方由大黃、土木香、山柰、訶子、北寒水石(煅)、堿花6味中藥組成[1]，具有和胃健脾、導(dǎo)滯消積、活血止痛的功效；臨床用于脾胃不和、積滯內(nèi)停所致的胃痛脹滿、消化不良、便秘、痛經(jīng)[2]。《中國藥典》一部1985版年至2015年版連續(xù)7版收載了該藥。為便于質(zhì)量控制及減低原劑型藥量，提高患者順應(yīng)性，前期我們將六味安消散研制成六味安消分散片。本文將以阿托品致胃腸動力障礙小鼠為模型對六味安消分散片促胃腸動力的作用進(jìn)行實驗研究，進(jìn)而評價六味安消分散片促進(jìn)胃腸動力的作用；以“適度夾尾激惹刺激復(fù)合不規(guī)則喂養(yǎng)”致FD大鼠模型為研究對象，通過給予六味安消分散片治療后，測定大鼠的離體十二指腸平滑肌收縮振幅及血漿胃動素(motilin，MTL)水平，探討其治療肝郁脾虛型FD可能的機(jī)制；以期為制劑的臨床應(yīng)用提供前期基礎(chǔ)。

1　材料與儀器

1.1動物SPF級昆明種小鼠，雌雄各半，體重(20±2)g，由中國食品藥品檢定研究院提供，動物合格證號：SCXK(京)2014-0013；SPF級SD大鼠，雌雄各半，體重180～200g，由中國食品藥品檢定研究院提供，動物合格證號：SCXK(京)2014-0013。

1.2試劑六味安消散，由包頭醫(yī)學(xué)院藥劑實驗室自制，批號：20160727；六味安消分散片(批號：20160724)由包頭醫(yī)學(xué)院藥劑實驗室自制，制備方法：北寒水石微粉碎至粒徑為40～60μm的粉末待用；堿花用8倍量的水，加熱攪拌充分溶解后，濾過、濾液濃縮、干燥，粉碎待用；土木香等4味植物藥材粉碎成粗粉，90%乙醇浸漬48h后滲漉至無色，收集滲漉液，回收乙醇后，濃縮至相對密度為1.18的清膏；稱取處方量的清膏水浴加熱軟化，與礦物藥粉及3%羧甲基淀粉鈉、3%低取代羥丙基纖維素、35%微晶纖維素混合均勻，50%乙醇制軟材，過20目篩制粒，60℃干燥，18目篩整粒后，加入5%交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮和1%微粉硅膠，混合均勻后，壓片即得。多潘立酮(西安楊森制藥有限公司)，批號：160719150；硫酸阿托品注射液(蕪湖康奇制藥有限公司)；批號：151010；藍(lán)色葡聚糖2000(DB-2000)(瑞典 Pharmacira，17-0360-01)；血漿胃動素ELISA檢測試劑盒，購自上海羽朵生物科技有限公司。

1.3儀器Multiskan GO酶標(biāo)定量測量儀(芬蘭，Thermo Fisher)；UV-1780紫外可見分光光度計(島津儀器蘇州有限公司)；X1R臺式高速冷凍離心機(jī)(德國、Thermo Fisher)；DF-101Z智能集熱式恒溫磁力攪拌器(河南省予華儀器有限公司)；BL-420生物機(jī)能檢測系統(tǒng)(成都泰盟電子有限公司)。

2　方法

2.1六味安消分散片對小鼠胃腸動力的影響SPF級昆明小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量18～22g，隨機(jī)分為空白對照組、阿托品模型組、六味安消散組(1.17g/kg，臨床等效劑量)、六味安消分散片組(0.59g/kg、1.17g/kg、2.34g/kg，以原散劑劑量折算計)、多潘立酮組(4.5mg/kg)，每組10只，ig給藥。六味安消散及六味安消分散片臨用前分散成混懸液；空白對照組及模型組給予生理鹽水15mL/kg；給藥體積均為15mL/kg，1次/d。連續(xù)用藥6d后，禁食(不禁水、藥)18h，第7天灌胃給藥1h后，除空白組腹腔注射等容積的生理鹽水外，其它組均腹腔注射硫酸阿托品1mg/kg。20min后，各組均ig2%葡聚糖藍(lán)(DB-2000)溶液0.4mL/只；20min后脫頸椎臼處死，結(jié)扎賁門及幽門處，取全胃，沿胃大彎剪開，將胃內(nèi)容物分散于4mL蒸餾水中，4000r/min離心20min，取上清液置分光光度計λ620nm處測得吸光度；另取10只空白小鼠ig2%葡聚糖藍(lán)(DB-2000)溶液0.4mL/只后立即處死，同法操作，測定胃內(nèi)殘留色素吸光度，作為標(biāo)準(zhǔn)管；計算胃內(nèi)色素排空率[胃內(nèi)色素排空率=(1-胃內(nèi)殘留色素吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管色素吸光度)×100%][3]。同時迅速取各組小鼠幽門切跡至回盲部腸段，自然平鋪于玻璃板上，量取幽門切跡至色素推進(jìn)前端距離和至回盲部全長，計算小腸推進(jìn)比；小腸推進(jìn)率(%)=色素前沿至幽門的距離/小腸全長×100%。

2.2對FD大鼠離體腸平滑肌條的影響實驗大鼠40只隨機(jī)分成對照組、模型組、給藥組、陽性對照(多潘立酮)組，每組10只。大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)2周后，參考文獻(xiàn)[4]，除空白對照組外，余組均采用“適度夾尾激惹刺激復(fù)合不規(guī)則喂養(yǎng)”法制備FD大鼠模型，即用紗布包裹止血鉗輕度鉗夾鼠尾后1/3處，立即放開，以不破皮為度，令其暴怒，尋釁與其他大鼠撕打，以激怒全籠大鼠站立對峙打斗，每次30min，4次/d；同時，予每周二、四、六禁食，余日給足量飼料，持續(xù)造模3wk；3wk后，大鼠出現(xiàn)扎堆，靠邊，反應(yīng)遲鈍，易受驚嚇，毛發(fā)干枯不順，糞便交替出現(xiàn)變稀和堅硬等表現(xiàn)，可認(rèn)定造模成功。造模結(jié)束次日，各組大鼠均恢復(fù)正常喂養(yǎng)并開始ig給藥。陽性對照組ig2.7mg/kg多潘立酮混懸液，給藥組ig0.81g/kg六味安消分散片混懸液(臨床等效劑量，以原散劑劑量折算計)，對照組及模型組ig給予等體積生理鹽水，給藥體積為10mL/kg，連續(xù)7天。末次給藥后，禁食不禁水18h，各組大鼠脫頸臼處死，腹主動脈采血5mL。模型組大鼠立即剖腹取2cm十二指腸段放入37℃克氏液中，處理后，連接BL-420E生物機(jī)能實驗系統(tǒng)[5]，將腸段懸吊于盛有20mL臺氏液(通氧)的恒溫浴管中，上端連接拉力換能器，下端系于L形鉤上固定，同時通入混合器60～80個氣泡/min，穩(wěn)定15min，待平滑肌收縮曲線的波形呈穩(wěn)定的正余弦曲線后，先采集3min腸平滑肌收縮曲線，然后向浴管中滴加六味安消分散片混懸液，采集給藥后腸平滑肌曲線。分別選1min內(nèi)曲線進(jìn)行處理計算，求出給藥前后腸平滑肌收縮振幅。

2.3對FD大鼠血漿胃動素的影響采集的腹主動脈血置入離心管(提前加入4%檸檬酸鈉抗凝)中，4000r/min離心15min，取上清，采用ELISA法測定MTL數(shù)值，嚴(yán)格按照試劑盒說明步驟操作。

2.4統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPASS17.0統(tǒng)計軟件處理。每組均數(shù)以x±s表示，采用方差分析均采。用組間兩兩比較，P<0.05有統(tǒng)計學(xué)差異。

3　實驗結(jié)果

3.1六味安消分散片對小鼠胃排空、腸推進(jìn)的影響模型組小鼠胃內(nèi)色素排空率和小腸推進(jìn)率明顯低于對照組，差異顯著(P<0.01)，提示模型小鼠胃排空和腸推進(jìn)功能異常，預(yù)示造模成功。

給藥后，六味安消分散片1.17g/kg、2.34g/kg組及六味安消散組、多潘立酮組均有促進(jìn)小鼠胃內(nèi)色素排空的作用(與模型組比，P<0.01)，與對照組相比無顯著性差異(P>0.05)；六味安消分散片各劑量組與六味安消散組比較差異不顯著(P>0.05)。

給藥后，六味安消分散片各劑量組及六味安消散組、多潘立酮組均有促進(jìn)小鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動的作用(與模型組比，P<0.05-0.01)，與對照組相比無顯著性差異(P>0.05)；六味安消分散片1.17g/kg、2.34g/kg組與六味安消散組比較差異不顯著(P>0.05)。結(jié)果見表1。

表1　六味安消分散片對小鼠胃排空、腸推進(jìn)的影響

注：與阿托品模型組比較：*P<0.05，**P<0.01；與對照組比較：△P<0.05，△△P<0.01

3.2對FD大鼠離體十二指腸平滑肌運(yùn)動的影響將空白克氏液中大鼠離體十二指腸平滑肌的收縮振幅設(shè)定為100%，采用累積給藥的方式加入藥物混懸液，在一定濃度范圍內(nèi)，觀察腸平滑肌的收縮振幅。當(dāng)六味安消分散片混懸液濃度為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5g/L時，十二指腸平滑肌的收縮振幅顯著增強(qiáng)(P<0.05～0.01)，結(jié)果見圖1。結(jié)果表明，六味安消分散片對模型大鼠離體十二指腸平滑肌自主收縮均具明顯促進(jìn)作用，呈濃度依賴性地增加收縮振幅，在0.5～2.5g/L濃度范圍內(nèi)有明顯量效關(guān)系。

3.3對大鼠血漿MTL的影響FD模型組大鼠血漿MTL水平明顯低于對照組，差異顯著(P<0.01)，提示造模成功。給予六味安消分散片0.81g/kg治療后的模型大鼠，其血漿MTL水平與對照組無顯著性差異(P>0.05)；而給予多潘立酮治療后的模型大鼠，其血漿MTL水平仍很低，與模型組比較無顯著性差異(P>0.05)，與對照組有顯著性差異(P<0.01)見表2。

表2　各組大鼠血漿MTL比較

注：與對照組比較：△P<0.05，△△P<0.01，與FD模型組比較，*P<0.05，**P<0.01

4　討論

FD是臨床常見的胃腸疾病之一，主要癥狀包括上腹痛、上腹灼熱感、餐后飽脹、噯氣、食欲不振、惡心、嘔吐等其中的一種或多種[6]。目前認(rèn)為，F(xiàn)D的病理生理學(xué)基礎(chǔ)普遍認(rèn)為可能與胃腸動力障礙、胃底容受性受損、胃對機(jī)械擴(kuò)張敏感性升高、十二指腸對酸及脂敏感性的改變、胃竇十二指腸運(yùn)動異常、自主神經(jīng)功能改變、幽門螺桿菌感染、精神應(yīng)激及胃腸激素分泌失常等因素密切相關(guān)。其中，胃腸動力障礙是目前研究最為集中的病理生理機(jī)制[7]。隨著人們生活節(jié)奏的加快，其發(fā)病率越來越高。祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為FD病位在脾胃，涉及肝脾兩臟，飲食不節(jié)和情志所傷為其主要發(fā)病因素；飲食不節(jié)，飲食停滯，胃中氣機(jī)阻滯，即所謂“飲食自倍，腸胃乃傷”，而情志所傷在肝者因惱怒傷肝。肝氣郁結(jié)不得疏泄，肝木乘脾土，致胃失和降，脾失健運(yùn)而出現(xiàn)消化不良[8]。本實驗采用“適度夾尾激惹刺激復(fù)合不規(guī)則喂養(yǎng)”法復(fù)制肝郁脾虛FD模型，使得該模型發(fā)病過程及特征與患者的臨床過程相類似，能夠較真實地反映FD的自然病程。

多潘立酮為多巴胺受體拮抗劑，主要作用于周圍神經(jīng)系統(tǒng)，進(jìn)而增加胃十二指腸蠕動，協(xié)調(diào)幽門收縮，促進(jìn)胃排空，已被廣泛用于改善FD癥狀，因此，本實驗選作為陽性對照藥物。六味安消分散片為我實驗室自制中蒙藥制劑，處方中土木香健脾和胃，理氣解郁為君藥；大黃苦寒消導(dǎo)積滯，瀉熱通腸為臣，訶子收斂止瀉，與大黃相配。一瀉一收，通澀各異；山奈溫中行氣，消食止痛為佐；寒水石清熱瀉火，除胃中積熱，為佐藥；堿花抑酸和胃。全方合用具有和胃健脾、導(dǎo)滯消積、活血止痛的功效[9]?，F(xiàn)代研究表明大黃中的結(jié)合型蒽苷在細(xì)菌酶的水解作用下還原為蒽酮，它可直接作用胃腸粘膜，刺激胃腸蠕動加快；同時蒽酮還具有膽堿樣作用，使平滑肌M膽堿受體興奮，乙酰膽堿釋放增多，使胃腸道的蠕動作用強(qiáng)，胃排空增快。此外，蒽酮還能抑制胃腸平滑肌N+-K+-ATP酶的活性，阻斷鈉離子從腸腔轉(zhuǎn)移至細(xì)胞內(nèi)，使腸腔內(nèi)透壓升高，腸內(nèi)容物的容積擴(kuò)大，增強(qiáng)腸道蠕動。訶子具有胃腸道粘膜保護(hù)作用，土木香則可降低胃腸道過高的運(yùn)動和分泌功能，具有興奮和抑制的雙向調(diào)節(jié)作用[10]。

本實驗通過測定阿托品致胃腸動力障礙小鼠的胃內(nèi)色素排空率和腸推進(jìn)來反映六味安消分散片促胃腸動力情況。結(jié)果顯示：模型組大鼠胃內(nèi)色素排空率明顯低于對照組，提示胃腸功能減低。給予六味安消分散片治療后，1.17g/kg、2.34g/kg劑量組可顯著增加胃內(nèi)色素排空率和腸推進(jìn)率，且與傳統(tǒng)的改善胃腸動力藥物多潘立酮片(多潘立酮)相比療效相當(dāng)，提示味安消分散片1.17g/kg、2.34g/kg劑量可有效改善胃腸動力。

MTL是由十二指腸以及空腸的Mo細(xì)胞合成并分泌的由22個氨基組成的直鏈多肽，其與胃動素受體結(jié)合發(fā)揮生理效應(yīng)，主要通過激發(fā)消化間期肌電活動Ⅲ相，促進(jìn)胃強(qiáng)力收縮和小腸分節(jié)運(yùn)動，該運(yùn)動可周期性產(chǎn)生并向小腸遠(yuǎn)端傳播，從而可加速小腸的傳遞時間。故血漿胃動素水平升高，腸道蠕動加速，使腸內(nèi)容物通過加快[11]。有研究指出血漿MTL水平異常引起的胃動力障礙可能會是FD的病因之一[12]。本實驗發(fā)現(xiàn)FD模型大鼠血漿MTL水平顯著降低(與對照組比較)，給予多潘立酮后血漿MTL水平并未提高，而六味安消分散片組血漿MTL水平可顯著提高；提示多潘立酮作用靶點并不是內(nèi)分泌Mo細(xì)胞，其促進(jìn)胃腸動力是通過直接阻斷胃腸道的多巴胺D2受體實現(xiàn)的，不受阿托品的抑制；六味安消分散片(0.81g/kg)即可促進(jìn)小鼠胃腸運(yùn)動又能顯著增加血漿MTL水平，體現(xiàn)出中藥的多組分、多靶點及其組分間的協(xié)同作用。