龐穎 劉漢偉 高峰 楊健

中圖分類號 R283.6 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2018）06-0766-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.06.11

摘 要 目的：建立丹七軟膠囊脂溶性成分的氣相色譜-質譜（GC-MS）指紋圖譜。方法：采用GC-MS 法。色譜柱為DB-5 ms毛細管色譜柱，載氣為高純度氦（99.999%），程序升溫，流速為1.0 mL/min， 進樣口溫度為250 ℃，進樣量為1 μL，分流比為1 ∶ 40，分流進樣；電離方式為電子轟擊離子源，離子源溫度為280 ℃， 接口溫度為300 ℃，電子能量為 70 eV，溶劑延遲時間為3 min，質荷比（m/z）為50～550。以棕櫚酸乙酯為參照，測定11批樣品的GC-MS圖譜，采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（2004 A版）進行相似度評價，確定共有峰，并采用LC Solution 2工作站標準質譜圖庫（NIST05.LIB和NIST05s.LIB）確定共有峰成分。結果：11批樣品相似度均大于0.90；經(jīng)驗證，11批樣品的GC-MS圖譜均與對照圖譜具有較好的一致性。11批樣品的GC-MS圖譜有49個共有峰，鑒定出38個化學成分（占總峰面積的94.94%）。結論：所建指紋圖譜可為丹七軟膠囊質量評價提供參考。

關鍵詞 丹七軟膠囊；脂溶性成分；氣相色譜-質譜聯(lián)用；指紋圖譜

ABSTRACT OBJECTIVE： To establish GC-MS fingerprints of liposoluble constituents from Danqi soft capsule. METHODS： GC-MS method was adopted. GC chromatogram column was DB-5 ms capillary column with high purity helium （99.999%） as carrier gas at the flow rate of 1.0 mL/min， with temperature programming. The injector temperature was 250 ℃.The sample size was 1 μL. The shunt ratio was 1∶40， with distributary injection. Ionization mode was as follows as electron bombardment ion source， ion source temperature of 280 ℃， injector temperature of 300 ℃， electronic energy of 70 eV， solvent delay time of 3 min， mass charge ratio （m/z） of 50-550. Using ethyl palmitate as reference， MS spectrums of 11 batches of samples were determined. Similarity evaluation was conducted by using TCM Fingerprint Chromatogram Similarity Evaluation System （2004 A edition） to determine common peak. The common peaks were determined by LC Solution 2 workstation standard mass spectrometry Library （NIST05.LIB or NIST05s.LIB）. RESULTS： The similarity of 11 batches of samples was higher than 0.90. After validation， GC-MS chromatograms of 11 batches of samples were in good agreement with control fingerprint. There were 49 common peaks in GC-MS chromatogram， and 38 chemical constituents were identified， accounting for 94.94% of total peak areas. CONCLUSIONS： Established fingerprint can provide evidence for quality evaluation of Danqi soft capsule.

KEYWORDS Danqi soft capsule； Liposoluble constituents； GC-MS； Fingerprint

丹參、三七（合稱“丹七”）是臨床常用中成藥的重要組成部分。丹七軟膠囊，系在普通丹七片的基礎上對其制備方法進行科學改良而成，并獲得了國家知識產(chǎn)權局頒發(fā)的丹七軟膠囊制備方法發(fā)明專利證書（證書公開號：CN17624A）。其具有活血化瘀、通脈止痛之功效，多用于瘀血閉阻所致的胸痹，癥見胸部刺痛、痛處固定、眩暈頭痛、經(jīng)期腹痛等，廣泛應用于心內科、神經(jīng)內科、骨傷科、婦科、眼科等屬“血瘀證”范疇疾病的治療[1-4]。目前，對丹七類藥物的研究主要集中于其極性部位，尚未見對該類藥物脂溶性成分的圖譜研究。有研究報道，三七藥材中脂溶性成分對大腦和延髓具有一定的抑制作用，可鎮(zhèn)靜、安神[5-6]，其中α-松油醇還具有抑菌作用[7-8]；丹參藥材中脂溶性成分β-石竹烯、β-欖香烯、δ-欖香烯和α-蛇麻烯等對腫瘤有抑制作用，是具有化療潛力的活性成分[9-10]。為準確反映丹七軟膠囊的內在品質，本研究首次對其中的脂溶性成分進行了探討，建立了氣相色譜-質譜（GC-MS）指紋圖譜，以期為該類藥物的質量控制及其有效成分的研究提供參考。

1 材料

1.1 儀器

TRACE 1310/TSQ 8000型GC-MS儀（美國Thermo公司）；BS210S型十萬分之一電子分析天平（北京賽多利斯天平有限公司）。

1.2 藥品與試劑

丹七軟膠囊[北京長城制藥廠，批號：13110105、13110215、14080101、14080102、14090101、14090102、14100101、14100102、14110101、14110102、14110113（編號為S1～S11），規(guī)格： 0.6 g/粒]；棕櫚酸乙酯對照品（批號：B21707-20160325，純度：≥98%）、硅藻土（批號S30557-201603）均購自上海源葉生物科技有限公司；試驗所用試劑均為分析純，水為純化水。

1.3 藥材

丹參、三七藥材均購自河北安國藥市，經(jīng)中國中醫(yī)科學院中藥研究所唐仕歡副研究員鑒定為真品。

2 方法與結果

2.1 試驗條件

2.1.1 GC條件 色譜柱：DB-5 ms毛細管色譜柱（30 mm × 0.25 mm，0.25 μm）；載氣：高純度氦（純度：≥99.999%）；流速：1.0 mL/min；程序升溫：起始溫度 40 ℃，保持 1 min，以 4 ℃/min的速度升至 220 ℃，以 50 ℃/min的速度升至 280 ℃，保持 5 min；進樣口溫度： 250 ℃；進樣量：1 μL；分流比：1 ∶ 40，分流進樣[11-12]。

2.1.2 MS條件 電離方式：電子轟擊離子源；離子源溫度：280 ℃； 接口溫度：300 ℃；電子能量：70 eV；溶劑延遲時間：3 min；荷質比（m/z）：50～550。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 取棕櫚酸乙酯對照品適量，置于10 mL量瓶中，加乙醇溶解并定容，即得。

2.2.2 供試品溶液 取樣品內容物 2.0 g，精密稱定，加入約0.5 g硅藻土，研勻，置于100 mL圓底燒瓶中，加乙酸乙酯 25 mL，回流提取 1 h，放至室溫，濾過，取濾液加乙酸乙酯定容至 25 mL，搖勻，經(jīng)0.22 μm 微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 方法學考察

2.3.1 精密度試驗 取“2.2.2”項下供試品溶液（批號：14110113）適量，按“2.1”項下試驗條件連續(xù)進樣測定6次，以棕櫚酸乙酯峰的保留時間和峰面積為參照，記錄各共有峰相對保留時間和相對峰面積。結果，13個共有峰相對保留時間和相對峰面積的RSD為0.13%～1.95%（n=6），表明方法精密度良好。

2.3.2 穩(wěn)定性試驗 取“2.2.2”項下供試品溶液（批號：14110113）適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、12、16 h時按“2.1”項下試驗條件進樣測定，以棕櫚酸乙酯峰的保留時間和峰面積為參照，記錄各共有峰相對保留時間和相對峰面積。結果，13個共有峰相對保留時間和相對峰面積的RSD為 0.46% ～ 2.62%（n=6），表明供試品溶液室溫放置16 h內基本穩(wěn)定。

2.3.3 重復性試驗 精密稱取樣品（批號：14110113）內容物適量，共6份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下試驗條件進樣測定，以棕櫚酸乙酯峰的保留時間和峰面積為參照，記錄各共有峰相對保留時間和相對峰面積。結果，13個共有峰相對保留時間和相對峰面積的RSD為0.26%～2.02%（n=6），表明本方法重復性良好。

2.4 GC-MS指紋圖譜的生成、相似度及共有峰相關數(shù)據(jù)分析

2.4.1 GC-MS指紋圖譜的生成 取11批樣品內容物各適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下試驗條件進樣測定，采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（2004 A版）對11批樣品的GC-MS圖譜進行分析，得GC-MS指紋圖譜，詳見圖1、圖2。

2.4.2 相似度分析 采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（2004 A版），以樣品共有模式為對照，進行整體相似度評價。結果顯示，11批樣品相似度均大于0.90，表明各樣品間差異較小、質量穩(wěn)定性良好，詳見表1。

2.5 GC-MS指紋圖譜中共有峰的歸屬和指認

采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（2004 A 版）對11批樣品的GC-MS圖譜進行比較分析。11批樣品有49個共有峰，確定25號峰為棕櫚酸乙酯，其峰面積較大，為所有藥材樣品共有，因此以25號峰為參照峰，根據(jù)共有峰的保留時間和通過檢索LC Solution 2工作站標準質譜圖庫（NIST05.LIB和NIST05s.LIB）對比相關質譜圖，鑒定出 38 個化合物（占總峰面積的94.94%）并指認其歸屬，詳見表2。

3 討論

本試驗采用GC-MS法對丹七軟膠囊脂溶性成分進行指紋圖譜研究，為了更好地反映其脂溶性成分，筆者對提取條件和分析條件（色譜條件和質譜條件）進行了多次優(yōu)化。同時，考察了正己烷、石油醚、二氯甲烷、乙醚和乙酸乙酯在樣品超聲和回流提取后的提取效率，結果表明乙酸乙酯提取最為完全、出峰數(shù)最多，故選擇其作為提取溶劑。本試驗采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（2004 A版）生成了丹七軟膠囊脂溶性成分指紋圖譜的共有模式，計算了11批樣品的GC-MS指紋圖譜的相似度，結果均大于0.90，表明與對照圖譜具有較好的一致性；且各色譜峰相對保留時間穩(wěn)定，說明本方法所建立的指紋圖譜具有較好的穩(wěn)定性和可控性。

本研究同時對丹七軟膠囊脂溶性成分指紋圖譜進行了指認，得到49個共有峰，其中13個峰占總峰面積的71.71%（以13個峰進行方法學考察），38個峰占總峰面積的94.94%（鑒定38個峰化合物成分）。

綜上所述，本研究所建指紋圖譜可為丹七軟膠囊的真?zhèn)舞b別和質量評價提供參考。

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（收稿日期：2017-05-09 修回日期：2017-07-07）

（編輯：張 靜）