鮑俊杰 劉媛媛 蘭天云 袁理 張國正 劉慧姝

胎兒生長受限(FGR)是指胎兒體質(zhì)量低于其孕齡平均體質(zhì)量第10百分位數(shù)或低于其孕齡平均體質(zhì)量的2個標(biāo)準(zhǔn)差，是嚴(yán)重危害胎兒生存質(zhì)量的產(chǎn)科并發(fā)癥。FGR增加胎兒圍生期缺氧、窒息、酸中毒等風(fēng)險，其圍生兒病死率為正常胎兒的4～6倍，約占我國圍生兒死亡總數(shù)的40%[1]。FGR患兒體格、智力發(fā)育均比正常胎兒慢，其成年后則易發(fā)生心血管、COPD、腎臟和內(nèi)分泌功能障礙等疾病[2]。雖然FGR的病因復(fù)雜多樣，但胎盤作為介于胎兒與母體之間的重要器官，在其發(fā)生、發(fā)展中無疑起著重要的作用[3]。本研究通過脂多糖的腹腔注射誘導(dǎo)孕鼠FGR，并繼而探討煙堿在減少脂多糖引起的胎盤病理損傷及保護(hù)胎兒生長中的作用，現(xiàn)報告如下。

對象與方法

一、實驗動物

SPF級Sprague Dawley(SD)大鼠(10～12周齡，200～240 g)， 購于廣東省實驗動物中心，自由攝食及飲水，光照時間為上午7點至下午7點， 室溫23～26 ℃，相對濕度30%～80%，定期紫外線消毒，通風(fēng)良好。動物實驗遵循相關(guān)倫理原則及動物福利法。

二、實驗方法

1.動物的分組與處理

SD大鼠隔離檢疫并適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后按照雌雄小鼠4∶1合籠，次晨陰道涂片，鏡檢下發(fā)現(xiàn)精子則標(biāo)記為妊娠第1日。隨機選擇24只孕鼠，按隨機數(shù)字表法分為4組： 脂多糖組，于妊娠第16日腹腔注射脂多糖(Sigma Aldrich，25 μg/kg，溶于0.3 ml生理鹽水)；脂多糖+煙堿組，于妊娠第14、15日皮下注射煙堿[Sigma Aldrich，1 mg/(kg·d)，溶于0.3 ml生理鹽水]進(jìn)行預(yù)處理，再于妊娠第16日腹腔注射脂多糖；正常妊娠對照組，分別于相同時間點注射生理鹽水；煙堿對照組，僅第14、15日皮下注射煙堿。

2.胎兒結(jié)局評估

于妊娠第18日將各組大鼠麻醉處死，觀察記錄脂多糖和(或)煙堿對胚胎吸收率、成活胎兒數(shù)量及體質(zhì)量等的影響。無胚胎、僅剩殘余胎盤組織或肉眼觀為一凝血塊者為胚胎吸收，胚胎吸收率=被吸收胚胎個數(shù)/(被吸收胚胎個數(shù)+未被吸收胚胎個數(shù))×100%。

3.胎盤重量及病理評估

收集妊娠第18日的胎盤，稱重并記錄后，于中央縱切，10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，4 μm厚度切片后進(jìn)行蘇木素-伊紅(HE)染色，評估胎盤病理改變。

三、統(tǒng)計學(xué)處理

結(jié) 果

一、脂多糖及煙堿對SD大鼠胚胎吸收率及活胎數(shù)量的影響

與正常妊娠對照組相比，SD大鼠脂多糖組胚胎吸收率增加(P<0.008)，成活胎兒數(shù)減少(P<0.008)；與脂多糖組相比，脂多糖+煙堿組成活胎兒數(shù)增加(P<0.008)；脂多糖+煙堿處理組成活胎兒數(shù)與正常妊娠對照組及煙堿對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.008)，見表1。

二、脂多糖及煙堿對妊娠第18日孕鼠胎兒體質(zhì)量的影響

妊娠第18日脂多糖組的胎兒體質(zhì)量低于正常妊娠對照組(P<0.01)， 且低于正常妊娠對照組胎兒體質(zhì)量第10百分位數(shù)，即誘導(dǎo)了孕SD大鼠FGR；而脂多糖+煙堿組胎兒體質(zhì)量降低有明顯改善，與脂多糖組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，見表1。

三、脂多糖及煙堿對SD大鼠胎盤質(zhì)量及胎盤病理的影響

1.胎盤質(zhì)量

妊娠第18日脂多糖組孕鼠的胎盤質(zhì)量低于正常妊娠對照組(P<0.01)，其余組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)，見表1。

2.HE染色結(jié)果

脂多糖組孕鼠胎盤出現(xiàn)了明顯的病理改變，包括炎性細(xì)胞在發(fā)育不良的絨毛間的浸潤、絨毛間隙的減少及絨毛血管的減少，炎性細(xì)胞在蛻膜的浸潤，胎膜的炎性壞死；在正常妊娠對照組、煙堿對照組和脂多糖+煙堿組均未發(fā)現(xiàn)胎盤組織結(jié)構(gòu)的損傷及大量炎性細(xì)胞的浸潤，見圖1。

表1 不同組別SD大鼠胎兒結(jié)局及胎盤質(zhì)量的比較

注：與脂多糖組比較，aP<0.008，bP<0.01

圖1 脂多糖及煙堿對SD大鼠胎盤病理的影響(HE染色)

討 論

FGR是產(chǎn)科常見的并發(fā)癥之一，也是圍生兒死亡的第二大原因，其近期可增加胎兒圍生期缺氧、窒息、酸中毒等風(fēng)險，遠(yuǎn)期將影響神經(jīng)行為發(fā)育，并增加成年疾病如心血管疾病、代謝紊亂綜合征、肥胖等疾病的發(fā)生風(fēng)險[4-5]。FGR的病因復(fù)雜多樣，胎盤因素在其中起重要作用[1]。

本研究參照其他研究組的方法，通過向孕SD大鼠腹腔注射脂多糖建立了炎性誘導(dǎo)的FGR模型[6]。結(jié)果顯示，伴隨著胎盤質(zhì)量及胎兒體質(zhì)量的減輕、活胎數(shù)量的減少，胎盤組織存在著諸如炎性細(xì)胞浸潤、絨毛間隙減少和絨毛血管減少等病理改變。胎盤尤其是胎盤末梢絨毛是母胎間進(jìn)行物質(zhì)和氣體交換的重要場所，絨毛血管的減少影響著胎盤自身的正常發(fā)育和營養(yǎng)物質(zhì)自母體向胎兒的傳輸，絨毛間隙的減少和炎性細(xì)胞對正常胎盤組織結(jié)構(gòu)的破壞意味著母胎營養(yǎng)物質(zhì)交換面積的減少及交換效率的降低。這些胎盤的病理改變無疑成為導(dǎo)致胎兒氧和營養(yǎng)供應(yīng)不足而發(fā)生FGR的重要原因[7-8]。

煙堿，又名尼古丁，作為一種存在于多種植物(如煙葉、番茄、枸杞子等)的生物堿，國內(nèi)外研究顯示其作為膽堿能抗炎通路的激動劑在敗血癥、自身免疫性關(guān)節(jié)炎、心血管疾病、多發(fā)性硬化病及缺血再灌注損傷等多種疾病中發(fā)揮著重要的抗炎作用[9-10]。

本研究運用煙堿對孕鼠進(jìn)行預(yù)處理，繼而再給予脂多糖腹腔注射，探討煙堿對脂多糖誘導(dǎo)FGR的保護(hù)作用。結(jié)果顯示，煙堿預(yù)處理雖然未能增加胎盤質(zhì)量，但是可能通過激活膽堿能抗炎通路保護(hù)了胎盤組織結(jié)構(gòu)免受脂多糖造成的嚴(yán)重炎性病理損傷，從而保證胎盤正常的分泌及營養(yǎng)輸送等功能，保護(hù)胎兒的正常生長，使脂多糖處理的孕鼠活胎數(shù)量及胎兒體質(zhì)量都得到明顯改善。本研究為炎性誘導(dǎo)FGR的防治提供新思路，而煙堿對胎兒出生后行為學(xué)等的影響有待進(jìn)一步的研究探討。