周 葉 葛衛(wèi)紅 戴純輝

1 浙江中醫(yī)藥大學中藥飲片有限公司 浙江 杭州 310053 2 浙江省桐廬縣邵畹生精神衛(wèi)生診所 浙江 桐廬 311500

落新婦，又名紅升麻、陰陽虎、金毛三七等，為虎耳草科植物落新婦Astilbechinensis(Maxim.)Franch.et.Sav.或大落新婦Astilbe grandisStapf ex Wils.的干燥根莖。落新婦為浙江省地方習用藥材，少數(shù)民族特色藥材，現(xiàn)收載于《浙江省中藥炮制規(guī)范》2015版，其性味辛、苦，溫，具有活血散瘀、解毒止痛之功效，主要用于治療跌打損傷、風濕痹痛、積聚疼痛等[1]?，F(xiàn)代藥理作用研究表明，落新婦具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抑菌、抗腫瘤以及抗內(nèi)毒素的作用。對落新婦成分分析結(jié)果顯示，巖白菜素為其主要成分，也是有效成分，落新婦中巖白菜素的含量可達3%以上[2-7]。

落新婦作為傳統(tǒng)中藥飲片廣泛在中醫(yī)臨床中使用，收到很好的臨床療效。目前臨床使用的傳統(tǒng)飲片主要為落新婦片、落新婦常規(guī)粉等。該項目制備了落新婦超微粉，并與普通粉進行了有效成分溶出度和鎮(zhèn)痛比較研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器：BP211D電子分析天平（萬分之一、十萬分之一）：sartorius；KQ3200DB型不銹鋼新型電熱恒溫水浴鍋（嘉興市中新醫(yī)療儀器有限公司）；液相色譜儀：prostar 230（三元泵）、prostar330（二極管陣列檢測器）、prostar410（自動進樣器）；KromasilC18柱(5μm，4.6mm×150mm)。

1.2 材料：①試藥：落新婦，采自浙江建德，經(jīng)鑒定為虎耳草科植物落新婦Astilbe chinensis(Maxim.)Franch.et.Sav.的干燥根莖；巖白菜素（批號：BCTG-0740）：由中藥固體制劑制造技術(shù)國家工程研究中心；甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。②動物：健康昆明種小鼠，體重18～22g，由浙江省中醫(yī)藥研究院實驗動物中心提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 落新婦普通粉及超微粉的制備：將洗凈的落新婦根和根狀莖切制成厚片3mm的片子，得到落新婦飲片；將落新婦飲片采用連續(xù)投料粉碎機對落新婦飲片進行粉碎5min，以24目進行篩選，將能通過篩孔的篩下組份一部分用普通球磨粉碎機粉碎成細粉，即為普通粉，一部分采用氣流粉碎，研磨氣壓為0.8Mpa，分級輪轉(zhuǎn)速為5500rpm，粉碎時間為3h，粉碎成粒徑≤75μm的粉末，得到超微粉。

2.2 有效成分巖白菜素的溶出度比較：分述如下。

2.2.1 色譜條件：色譜柱：KromasilC18柱(4.6mm×150mm，5μm)；流動相：甲醇-水(20：80)；流速1ml/min；檢測波長275nm；柱溫：30℃。

2.2.2 對照品溶液的制備：精密稱取巖白菜素對照品10.2mg，置10ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備：取落新婦超微粉和普通粉(10g原藥材制備而成的)加水200ml超聲提取30分鐘，取出，放冷，精密吸取4ml轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得[8]。

2.2.4 樣品檢測：吸取上述供試品和對照品溶液各10μl分別進樣，測得峰面積，計算含量，結(jié)果見表1。由試驗結(jié)果可知，落新婦超微粉中的有效成分巖白菜素溶出度比普通粉顯著提高。

2.3 落新婦超微粉與普通粉鎮(zhèn)痛效果比較：分述如下。

2.3.1 藥物制備：將落新婦超微粉和普通粉加0.5%的CMC-Na水溶液制成不同濃度的溶液。

表1 普通粉和超微粉溶出度比較

2.3.2 熱板法：將恒溫水浴箱加熱到(55±0.5)℃，燒杯底部接觸水面，加熱后作為熱刺激，用秒表記錄小鼠自投入熱板至出現(xiàn)舔后足的時間(s)作為該鼠的痛閾值。在給藥前測定每只小鼠的痛閾值，剔除喜跳躍者，以＞10s而＜30s的小鼠為合格。將篩選合格的小鼠(全部為雌性)禁食12h后(不禁水)，隨機分為6組，生理鹽水(NS)空白對照組給予生理鹽水0.5ml/20g；落新婦組0.5ml/20g。給藥后45min左右測定痛閾值，按公式計算其痛閾值提高百分率。結(jié)果表明，落新婦超微粉和普通粉均能明顯提高小鼠的痛閾值（P＜0.01），其中超微粉兩個劑量組（2g·kg-1、1g·kg-1）鎮(zhèn)痛作用明顯優(yōu)于普通粉組（P＜0.01）。詳見表2。

表2 對小鼠熱板法痛閾值的影響(±s)

表2 對小鼠熱板法痛閾值的影響(±s)

注：與給藥前比較，★P＜0.01；與空白組比較，△P＜0.01；與普通粉組比較，□P＜0.01。

組別空白組超微粉組1超微粉組2超微粉組3超微粉組4普通粉組動物數(shù)（只）1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0劑量（g·k g-1）0.2 5 0.5 0 1.0 0 2.0 0 2.0 0痛閾值給藥前2 1.5 8±0.9 9 2 3.0 1±1.5 5 2 0.5 8±1.2 3 2 2.0 3±0.8 7 2 1.4 5±2.0 0 2 1.2 1±1.7 6給藥后2 1.7 7±3.4 5 2 6.2 6±1.2 3★△2 5.1 2±2.6 6★△2 9.9 5±2.2 5★△□3 2.3 7±2.9 8★△□2 6.3 3±1.5 9★△痛閾值提高百分率（%）0.8 8 1 4.4 7 2 2.0 6 3 5.9 5 5 0.9 0 2 4.1 4

2.3.3 扭體法：取雄性小鼠40只，禁食12h后(不禁水)，隨機分為6組，分組及劑量同熱板法。給藥后60min左右，各小鼠腹腔注射0.6%醋酸0.1ml/10g(醋酸臨用前配制)，觀察并記錄注射醋酸溶液后15min內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù)(腹部收縮內(nèi)凹、伸展后肢、臀部扭轉(zhuǎn))。

結(jié)果表明，不同劑量的落新婦超微粉和普通粉，均能明顯減少醋酸所致的小鼠扭體次數(shù)（P＜0.01），超微粉三個劑量組（2g·kg-1、1g·kg-1、0.5g·kg-1）的作用明顯強于普通粉組（P＜0.01），超微粉0.25g·kg-1劑量組的作用與普通粉組相當。見表3。

表3 對小鼠扭體次數(shù)的影響(±s)

表3 對小鼠扭體次數(shù)的影響(±s)

注：與空白組比較，★P＜0.01；與普通粉比較，△P＜0.01。

組別空白組超微粉組1超微粉組2超微粉組3超微粉組4普通粉組動物數(shù)（只）1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0劑量（g·k g-1）0.2 5 0.5 0 1.0 0 2.0 0 2.0 0扭體次數(shù)5 5.6 0±6.6 4 2 8.8 9±5.5 7 2 4.0 2±4.7 4 1 9.2 5±6.3 5 1 5.8 0±7.3 5 2 9.1 2±4.8 9鎮(zhèn)痛率（%）4 8.0 4★5 6.8 0★△6 5.3 8★△7 1.5 8★△4 7.6 2★

3 結(jié)論

藥物粉體顆粒大小與藥材有效成分的釋放、溶出及吸收密切相關(guān)。藥材超微粉碎后，其體內(nèi)有效成分的溶出過程將發(fā)生新的變化[9]，有利于藥物的釋放和吸收，可減少給藥劑量和節(jié)省原料。因此，近年來超微粉粉碎技術(shù)發(fā)展十分迅速，得到醫(yī)藥行業(yè)的普遍關(guān)注和應(yīng)用。超微粉是原粉經(jīng)過超微粉碎技術(shù)而得，粉碎后的藥物粒徑為1～75μm，藥物破壁率高、溶出速率和生物利用度也較高[10]、胃腸道停留時間延長、吸收快而且更充分。臨床應(yīng)用劑量可降低至原粉劑量的1/2、1/4、1/8，甚至1/16、1/32，可降低臨床用藥劑量、減少毒副作用、提高療效和患者依從性[11]。

該研究采用超微粉碎技術(shù)，使落新婦粉末的粒徑小于75μm，相對于普通粉，超微粉的溶出度明顯提高。落新婦超微粉四個劑量組和普通粉都明顯減少了熱板上小鼠舔足次數(shù)和醋酸扭體反應(yīng)，超微粉三個劑量組（2g·kg-1、1g·kg-1、0.5g·kg-1）鎮(zhèn)痛效果優(yōu)于普通粉。