董永書(shū),行書(shū)麗,周紅艷,張 薇,孫 為,范軍銘△

(1.河南省中醫(yī)藥研究院，河南 鄭州 450000； 2.河南醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校，河南 鄭州 450000)

眩暈是臨床上常見(jiàn)的一種疾病，是機(jī)體對(duì)空間關(guān)系的定向或平衡感覺(jué)障礙。臨床發(fā)病率在10%以上[1]，表現(xiàn)為站立不穩(wěn)、平衡失調(diào)、傾倒、偏向指物等癥狀，嚴(yán)重影響病人的生活[2]。眩暈發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，多見(jiàn)于包括前庭神經(jīng)、前庭感受器及相應(yīng)神經(jīng)中樞在內(nèi)的前庭缺血導(dǎo)致的功能紊亂。而后循環(huán)缺血是引起前庭系統(tǒng)缺血的主要原因，臨床上較為多見(jiàn)[3]。本實(shí)驗(yàn)以不完全腦缺血眩暈?zāi)Ｐ痛笫骩4]作為研究對(duì)象，分析針刺治療對(duì)大鼠前庭神經(jīng)核血流量的變化以及旋轉(zhuǎn)刺激后跳臺(tái)潛伏期、平衡性的變化，探討快捻久留針刺法治療后循環(huán)缺血性眩暈的機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)健康SD大鼠，雌、雄對(duì)半，體質(zhì)量180～250 g。由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)公司提供，動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(京)2016-0011，合格證號(hào):No.11400700246872。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。喂養(yǎng)溫度20℃～25℃，濕度維持在40%～70%，自由給食和給水。

1.1.2 主要藥品與針具 鹽酸氟桂利嗪膠囊(批號(hào):170220，河南福森藥業(yè)有限公司)；針灸針選用28號(hào)1寸的一次性無(wú)菌不銹鋼毫針(無(wú)錫佳健醫(yī)療器械股份有限公司)。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 DTT-2跳臺(tái)記錄儀(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥研所)；三維立體腦定位儀(型號(hào)：DW-2000D，成都泰盟軟件有限公司)；激光多普勒血流儀(型號(hào)：Moorvms-Ldf,英國(guó)Moor insturements公司) ；大容量低速離心機(jī)(DD5臺(tái)式，湖南赫西儀器裝備有限公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 造模前準(zhǔn)備工作 ①跳臺(tái)電刺激逃避反射訓(xùn)練：每天進(jìn)行該訓(xùn)練，將實(shí)驗(yàn)大鼠放進(jìn)跳臺(tái)儀中，適應(yīng)3 min后給予電刺激5 min，刺激強(qiáng)度30 V、50 Hz。以實(shí)驗(yàn)大鼠跳上跳臺(tái)并保持30 s為訓(xùn)練成功，每天訓(xùn)練2次，連續(xù)訓(xùn)練3天，建立牢固的實(shí)驗(yàn)大鼠逃避刺激的條件反射。②平衡試驗(yàn)：將圓柱形木棒離地50 cm水平放置，地上鋪10 cm厚的海綿軟墊，正常大鼠可在圓木棒上停留超過(guò)3 min。以大鼠在木棒上停留時(shí)間大于3 min為陰性；小于3 min為陽(yáng)性。

1.2.2 眩暈?zāi)Ｐ偷慕?將實(shí)驗(yàn)大鼠應(yīng)用10%水合氯醛溶液(0.35 mL/100 g體重)麻醉，仰臥固定，用外科剪剪開(kāi)頸部皮膚，鈍性分離，暴露分離出右側(cè)CCA并穿線備用；然后沿右側(cè)CCA近心端向胸腔方向找至右側(cè)SCA分叉處，用彎鑷勾出SCA，小心剝離周?chē)M織，穿線備用。將實(shí)驗(yàn)大鼠固定于腦三維立體定位儀上，平顱頭位，在距大鼠前囟10.2 mm，中縫右側(cè)1.1～2.5 mm，深4.5～5.5 mm處定位大鼠右側(cè)前庭神經(jīng)核，切開(kāi)正中頭皮約1.5 cm切口，用雙氧水燒灼皮下組織，暴露前囟，于前囟旁開(kāi)及向下各1.5 mm處用牙科鉆鉆一直徑1.5 mm的圓孔，使之剛好能容納激光探頭，盡量使表面平整且不鉆透。然后使用多普勒激光血流儀測(cè)定大鼠右側(cè)前庭神經(jīng)核內(nèi)血流量，描記該部位血流值平穩(wěn)后5 min的腦血流圖。等待血流值平穩(wěn)后結(jié)扎右側(cè)CCA、SCA，持續(xù)描記血流曲線10 min。術(shù)后肌注青霉素4萬(wàn)單位。術(shù)后腦血流量明顯下降且第2天仍存活的大鼠視為造模成功。

1.2.3 分組及各組大鼠處理方法 將造模成功的大鼠按體重隨機(jī)分為模型組、藥物組、普通針刺組和快捻久留針組，另外設(shè)假手術(shù)組。模型組：制備缺血模型后不做其他處理，大鼠自由攝食飲水飼養(yǎng)；藥物組：將鹽酸氟桂利嗪膠囊配制成0.153 mg/mL的混懸溶液，給藥的容積為10 mL/kg(等同于9倍臨床用量)，每天灌藥1次，連續(xù)10天；普通針刺組：每天給予針刺治療，參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)穴位圖譜等文獻(xiàn)[5-6]，選取大鼠百會(huì)、雙側(cè)率谷穴、雙側(cè)風(fēng)池穴，給予常規(guī)剪毛消毒，柔性固定后用28號(hào)1寸針灸毫針快速刺入皮下，進(jìn)針深度為8 mm，每次30 min，每日1次，連續(xù)10天；快捻久留針組：選穴及進(jìn)針手法同普通針刺組，進(jìn)針后即用右手拇指腹和食指橈側(cè)緣持針做捻轉(zhuǎn)動(dòng)作,頻率200～300次/min，連續(xù)行針1 min，半小時(shí)后再次行針1次，留針1 h，每日1次，連續(xù)10天;假手術(shù)組僅手術(shù)分離大鼠右側(cè)CCA及SCA，不做其他處理，自由攝食飲水飼養(yǎng)。

1.3 指標(biāo)檢測(cè)

1.3.1 大鼠行為學(xué)表現(xiàn) 觀察實(shí)驗(yàn)大鼠的形態(tài)外觀、反應(yīng)能力、精神狀態(tài)、行走姿勢(shì)、活動(dòng)情況、進(jìn)食水量及體重的變化。

1.3.2 缺血性眩暈?zāi)Ｐ痛笫笄巴ド窠?jīng)核組織血流量的變化 使用多普勒激光血流儀測(cè)定每組實(shí)驗(yàn)大鼠干預(yù)前、后右側(cè)前庭神經(jīng)核部位的血流量，計(jì)算干預(yù)前后該部位血流量的變化。

血流量變化的計(jì)算：血流變化率=(造模后血流量-造模前血流量)/造模前血流量×100%。

1.3.3 旋轉(zhuǎn)刺激眩暈?zāi)Ｐ痛笫筇_(tái)逃避時(shí)間實(shí)驗(yàn) 將實(shí)驗(yàn)大鼠置入離心機(jī)并以300轉(zhuǎn)/min的轉(zhuǎn)速勻速旋轉(zhuǎn)30 s，立即將其抓置于跳臺(tái)儀中，記錄實(shí)驗(yàn)大鼠受到電刺激到第1次跳上跳臺(tái)并且30 s內(nèi)不跌落所需的時(shí)間(不計(jì)算實(shí)驗(yàn)大鼠在跳臺(tái)上的時(shí)間)記為潛伏期。

1.3.4 平衡試驗(yàn) 如前所述大鼠停留在平衡原木上的時(shí)間或陽(yáng)性大鼠的只數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠一般情況

假手術(shù)組設(shè)置大鼠12只，造模成功大鼠56只，隨機(jī)分入模型組、藥物組、普通針刺組和快捻久留針刺組每組各14只，治療期間模型組大鼠死亡3只，藥物組大鼠死亡1只，兩針刺組無(wú)死亡大鼠。假手術(shù)組精神狀態(tài)良好，行動(dòng)自如；其余各組大鼠倦臥少動(dòng)，反應(yīng)能力下降，自發(fā)活動(dòng)量減少，進(jìn)食進(jìn)水量減少。治療后藥物組和針刺組大鼠情況均好于模型組，尤以針刺組為佳。

2.2 對(duì)缺血性眩暈大鼠前庭神經(jīng)核血流量的影響

與假手術(shù)組比較，其他各組大鼠造模后右側(cè)前庭神經(jīng)核血流均有明顯下降(P<0.01)。與模型組比較，藥物組及兩針刺組在治療后右側(cè)大腦前庭核血流明顯增加(P<0.01)；藥物組及普通針刺組增加前庭神經(jīng)核的血流幅度無(wú)顯著差別(P>0.05)，快捻久留針刺組增加前庭神經(jīng)核的血流幅度與其他各組比較有顯著性差異(P<0.01)。見(jiàn)表1。

2.3 對(duì)旋轉(zhuǎn)刺激缺血性眩暈?zāi)Ｐ痛笫筇_(tái)潛伏期的影響

測(cè)定結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，其他各組大鼠跳臺(tái)潛伏期明顯延長(zhǎng)(P<0.01);與模型組比較，藥物組和針刺組在治療后均可不同程度縮短大鼠跳臺(tái)潛伏期(P<0.01) ,其中，藥物組和普通針刺組療效無(wú)顯著性差異(P>0.05)，快捻久留針刺組對(duì)潛伏期的影響最為顯著。見(jiàn)表2。

表1 對(duì)缺血性眩暈?zāi)Ｐ痛笫笄巴ド窠?jīng)核血流變化率的影響

注：與假手術(shù)組比較,△P<0.01；與模型組比較,★P<0.01；與藥物組比較,▲P>0.05，▲▲P<0.01；與普通針刺組比較,●P<0.05

表2 對(duì)旋轉(zhuǎn)刺激缺血性眩暈?zāi)Ｐ痛笫筇_(tái)潛伏期的影響

注：與假手術(shù)組比較,△P<0.01；與模型組比較,★P<0.01；與藥物組比較,▲P>0.05，▲▲P<0.01；與普通針刺組比較,●P<0.05

2.4 對(duì)缺血眩暈?zāi)Ｐ痛笫笃胶庠囼?yàn)的影響

造模前每組實(shí)驗(yàn)大鼠經(jīng)訓(xùn)練后可在圓柱形木棒上停留3 min以上。說(shuō)明造模前各組實(shí)驗(yàn)大鼠平衡性較好。造模后分別進(jìn)行觀測(cè)，除假手術(shù)組實(shí)驗(yàn)大鼠可在木棒上停留3 min以上，其余各組大鼠在木棒上均不能站立，放置后隨即掉下，停留時(shí)間小于3 min者為陽(yáng)性，證明眩暈?zāi)Ｐ驮炷３晒Α８深A(yù)治療后，與模型組比較，藥物組及各針刺組平衡試驗(yàn)中的陽(yáng)性動(dòng)物數(shù)顯著減少(P<0.05)。快捻久留針刺組療效與藥物組、普通針刺組相當(dāng)。見(jiàn)表3。

表3 對(duì)缺血性眩暈?zāi)Ｐ痛笫笃胶庠囼?yàn)的影響

注：與模型組比較,★P<0.05

3 討論

眩暈是種不正常的感覺(jué)體驗(yàn)，是身體對(duì)空間關(guān)系、定向感覺(jué)出現(xiàn)的障礙[7]。多由前庭系統(tǒng)病變導(dǎo)致。由于前庭系統(tǒng)對(duì)缺血比較敏感[8]，一定程度的后循環(huán)缺血會(huì)導(dǎo)致前庭神經(jīng)、前庭感受器以及相應(yīng)中樞等部位血液灌注不足，從而導(dǎo)致前庭功能紊亂，出現(xiàn)眩暈、平衡失穩(wěn)等癥狀。改善患者前庭神經(jīng)系統(tǒng)供血可明顯緩解眩暈癥狀，利于疾病的治療。

中醫(yī)認(rèn)為眩暈病的發(fā)病特點(diǎn)為本虛標(biāo)實(shí)，病機(jī)為肝腎不足、氣血虧虛、痰濕阻絡(luò)、清陽(yáng)不升而致眩暈。所以治療上多采用活血化瘀、填精補(bǔ)髓、疏經(jīng)通絡(luò)的方法。本研究則應(yīng)用不同的針刺治療方法刺激大鼠頭部相應(yīng)的穴位，利用穴位特性激發(fā)調(diào)補(bǔ)虛實(shí)的功能。百會(huì)為身體諸陽(yáng)之會(huì),可以提領(lǐng)一身之陽(yáng)氣，具有安神定眩之功效；風(fēng)池穴為足少陽(yáng)膽經(jīng)之經(jīng)穴，手足少陽(yáng)經(jīng)與陽(yáng)維脈的交會(huì)穴，如氣血循于脈道，升發(fā)陽(yáng)經(jīng)氣血上注于腦，則髓海得養(yǎng)眩暈自消[9-10]；率谷穴位于耳尖之上，為足少陽(yáng)膽經(jīng)經(jīng)穴，亦為與足太陽(yáng)之交會(huì)穴，具有疏風(fēng)活絡(luò)、收濕降濁之功，諸穴合用可達(dá)到補(bǔ)虛瀉實(shí)、補(bǔ)益腦髓、活血化瘀、疏通經(jīng)絡(luò)的作用。而快速捻轉(zhuǎn)及長(zhǎng)時(shí)間留針刺激可更大程度上激發(fā)經(jīng)絡(luò)之氣，提高療效。

采用結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈和鎖骨下動(dòng)脈的方法制作后循環(huán)缺血性眩暈大鼠模型可以最大程度的模擬后循環(huán)缺血導(dǎo)致的眩暈[11]。由于右側(cè)椎動(dòng)脈是右側(cè)鎖骨下動(dòng)脈的下游分支，結(jié)扎鎖骨下動(dòng)脈可完全使椎動(dòng)脈供血減少?gòu)亩ＷC了后循環(huán)缺血致前庭神經(jīng)核缺血模型的成功[12]。通過(guò)激光多普勒血流儀檢測(cè)模型大鼠前庭神經(jīng)核血流量的變化也給予了有力的證明。而跳臺(tái)逃避潛伏期反映了大鼠在機(jī)械旋轉(zhuǎn)刺激后眩暈的嚴(yán)重程度，只有當(dāng)大鼠眩暈癥狀減輕、身體保持平衡后才能在電刺激下迅速的跳上平臺(tái)并保持穩(wěn)定來(lái)躲避刺激，前庭系統(tǒng)缺血后其保持身體平衡的功能減退，在給予旋轉(zhuǎn)刺激后恢復(fù)身體平衡的時(shí)間也相對(duì)延長(zhǎng)，因此，跳臺(tái)逃避潛伏期能反映模型大鼠前庭功能的缺血受損程度。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明相較于假手術(shù)組，造模成功后各組大鼠右側(cè)前庭神經(jīng)核的血流明顯下降(P<0.01)，跳臺(tái)潛伏期顯著延長(zhǎng)(P<0.01)，平衡木上停留大鼠明顯減少(P<0.01)。藥物組和兩針刺組干預(yù)后可顯著縮短模型大鼠跳臺(tái)潛伏期(P<0.01)，亦可顯著升高右側(cè)前庭神經(jīng)核血流量(P<0.01)，從而改善模型大鼠的眩暈癥狀，普通針刺組和藥物組相比較無(wú)明顯差異(P>0.05)；但快捻久留針刺組療效優(yōu)于藥物組(P<0.01)和普通針刺組(P<0.05)。而在平衡性的檢測(cè)中兩針刺組和藥物組具有相當(dāng)?shù)寞熜?P>0.05)。故可得出結(jié)論針刺和藥物治療均可以通過(guò)糾正后循環(huán)缺血、改善前庭神經(jīng)核供血來(lái)治療眩暈，而長(zhǎng)時(shí)間及高強(qiáng)度的行針刺激可加強(qiáng)療效。