張 宇 黃建芳 徐 萌 王 宏 向軍儉

(暨南大學(xué)抗體工程研究中心，生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院生物工程學(xué)系，廣東省分子免疫與抗體工程重點實驗室，廣州 510632)

FGF2即bFGF(Basic fibroblast growth factor，堿性成纖維細胞生長因子)，是生理和病理條件下細胞生長和分化的重要調(diào)節(jié)因子，在胚胎發(fā)育，組織再生，傷口修復(fù)和造血中發(fā)揮重要作用[1-3]。FGF2以低分子量和高分子量同種型存在[4]。低分子量FGF2是約18 kD蛋白質(zhì)[5]。FGF2可由靶細胞分泌[6]。FGF2在由FGF2、FGFR和HSPG組成的三元復(fù)合物中相互作用，導(dǎo)致下游信號傳導(dǎo)途徑的激活[7]。目前已經(jīng)確定了五種FGFRs[8]，F(xiàn)GF2主要與FGFR1(Ⅲc)結(jié)合，而與其他FGFR結(jié)合則較弱[9]。

FGF2和FGFR在正常細胞中的表達受到高度調(diào)控，然而FGF2/FGFR的擴增和/或上調(diào)發(fā)生在許多腫瘤中[10]。FGF2/FGFR上調(diào)與多種腫瘤類型患者預(yù)后不良有關(guān)[11]。由基質(zhì)成纖維細胞分泌的FGF2通過FGFR旁分泌信號傳導(dǎo)誘導(dǎo)腫瘤細胞增殖，腫瘤內(nèi)的成纖維細胞也可被內(nèi)皮細胞和腫瘤細胞分泌的FGF2激活[12，13]。同時FGF2也是一種有效的促血管生成生長因子[14]。

目前研究表明，F(xiàn)GF2可作為有效的腫瘤治療靶標(biāo)，Anouma等[15]第一次發(fā)現(xiàn)并報道了FGF2單抗在體內(nèi)和體外實驗中對腫瘤的生長抑制作用。本實驗室多年前獲得的FGF2單抗MabF7對B16細胞的體外抑制作用呈劑量及時間累計效應(yīng),抑制率為(39±4.12)%,P<0.01[16]。向軍儉等[17]也證明了FGF2單抗MabF7的抗腫瘤以及抗血管新生作用。此后羅鎮(zhèn)明[18]成功篩選出了能穩(wěn)定分泌靶向FGF2-FGFR1結(jié)合位點單抗，在體內(nèi)外抑制了Lewis′肺癌的增殖。陳文慧等[19]發(fā)現(xiàn)FGF2 mAb能抑制MCF-7/ADM細胞增殖并逆轉(zhuǎn)其多藥耐藥。除了FGF2抗體的單獨使用，本實驗室研究還發(fā)現(xiàn)了順鉑聯(lián)合FGF2單抗對黑色素瘤細胞B16和Colo細胞有明顯的聯(lián)合抑制效應(yīng)[20]。張國軍等[21]則發(fā)現(xiàn)FGF2單抗MabF7與替吉奧S-1兩者聯(lián)合作用具有聯(lián)合誘導(dǎo)凋亡的作用。除了抗體與化療聯(lián)用，曾世彬等[22]證實了FGF2mAb聯(lián)合放療對B16移植瘤具有協(xié)同抑瘤效應(yīng)，提高放療敏感性。除了抗體與放化療聯(lián)合使用，胡鵬輝等[23]發(fā)現(xiàn)125I-FGF2mAb能顯著抑制肝癌移植瘤的生長，標(biāo)記125I的FGF2mAb對肝癌的抑瘤效果強于聯(lián)合運用125I和FGF2mAb。

本研究旨在由項目組中山生物醫(yī)藥有限公司對鼠源FGF2單抗運用3D技術(shù)進行人源化改造，獲得人源化FGF2單抗。本研究擬進行人源化FGF2單抗E12及其聯(lián)合順鉑和紫杉醇對人源乳腺癌細胞株MDA-MB453以及MCF-7的細胞增殖抑制以及促凋亡作用；并運用生物信息學(xué)的方法對抗體進行表位分析，探究E12生物學(xué)活性分子機制，為FGF2抗體藥物研發(fā)提供前期基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1主要試劑 胎牛血清(Gemini)；0.25%胰蛋白酶、DMEM培養(yǎng)液(Gibco)；CCK-8試劑盒、流式細胞凋亡檢測試劑盒(上海同仁化學(xué)研究所)；MTT、二甲基亞砜、紫杉醇(ASGENE)；順鉑(江蘇豪森藥業(yè))；鼠源FGF2單抗(本實驗室制備并保存)；重組人FGF2、兔抗鼠IgG-HRP、兔抗人IgG-HRP(北京鼎國生物技術(shù)有限公司)。

1.1.2細胞株 MCF-7,MDA-MB453腫瘤細胞株為本實驗室傳代保存。

1.2方法

1.2.1FGF2單抗人源化改造情況分析 使用IMGT數(shù)據(jù)庫進行序列比對來計算抗體可變區(qū)人源氨基酸來源比率。

1.2.2人源化單抗E12的純度鑒定 制備SDS-PAGE分離膠，再在其上方配置濃縮膠，待濃縮膠凝固之后，將膠板置于電泳緩沖液中，將人源化單抗加入適量的Loading Buffer，煮樣后上樣。純化的人源化單抗E12、BSA和蛋白Marker分別加入到泳道中進行電泳，電泳完成之后取下分離膠放置于染色液中染色過夜。之后放入加有脫色液的脫色盒中，待可以清晰地看到蛋白條帶，利用凝膠成像儀進行圖像采集。

1.2.3間接ELISA檢測E12與FGF2的結(jié)合活性 使用包被液將濃度為1.81 mg/ml的FGF2抗原稀釋至400 ng/ml，向ELISA板條中每孔加入100 μl液體，4℃包被過夜。除包被液，PBS-T洗滌3次，3 min/次(下同)，加入5%脫脂奶粉溶液，于37℃條件下，封閉1 h。除封閉液，PBS-T洗滌3次，用PBS倍比稀釋人源化抗體E12和鼠源抗體E12，濃度依次為1、0.33、0.11、0.037、0.012、0.004 1和0.001 3 μg/ml，分別取100 μl加入ELISA酶標(biāo)板中，37℃恒溫箱中孵育1 h。除一抗液體，PBS-T洗滌3次。抗FGF2人源性單抗E12組每孔加入100 μl兔抗人IgG二抗稀釋液，鼠抗FGF2單抗E12組每孔加入100 μl兔抗鼠二抗稀釋液，置于37℃恒溫箱，孵育45 min。除二抗液體，PBS-T，洗滌5次后每孔加入100 μl的TMB顯色底物，避光反應(yīng)10 min，每孔加入50 μl終止液，并立即于酶標(biāo)儀中測定OD450 nm 處的吸光值為最終的結(jié)果。

1.2.4BCA法檢測E12的蛋白濃度 配置標(biāo)準(zhǔn)工作液，設(shè)置BCA濃度分別為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.6和0.8 mg/ml。在ELISA板孔中按照25 μl/孔的量向孔中依次加入預(yù)先配置好的標(biāo)準(zhǔn)液以及不同稀釋比例的目的蛋白液。根據(jù)BCA要求將試劑盒中的AB液按照A∶B=50∶1的配置比例配置工作液，將配置好的AB混合液加入到ELISA板中每孔200 μl，然后置于37℃的恒溫箱中避光反應(yīng)30 min，測570 nm的OD值，設(shè)置不含BCA的組為空白對照。

1.2.5CCK-8法檢測E12對乳腺癌細胞株的細胞增殖抑制作用 取生長良好的細胞鋪板，24 h之后更換低血清濃度維持培養(yǎng)基，使用維持培養(yǎng)基稀釋抗體藥物進行加藥，加入人源化抗體的濃度設(shè)置為500、250、125和 62.5 μg/ml,同時加入鼠源的FGF2單抗500 μg/ml作為陽性對照。于加藥后72 h 在450 nm吸光度下進行檢測。并將OD值轉(zhuǎn)換為抑制率，計算公式為：抑制率=(空白組OD值-實驗組OD值)/空白組OD值×100%，然后使用Prism7軟件進行繪圖。

1.2.6CCK-8法檢測E12聯(lián)合化療藥物對乳腺癌細胞株的細胞增殖抑制作用 取生長良好的細胞鋪板，24 h之后更換低血清濃度維持培養(yǎng)基，使用低血清濃度維持培養(yǎng)基稀釋藥物進行加藥，對于順鉑來說，兩株細胞的順鉑濃度相同，設(shè)置單獨加入順鉑組：濃度為0、0.625、2.5和10 μg/ml，單獨加單抗組：單抗藥物濃度設(shè)置為150 μg/ml，順鉑和單抗聯(lián)合組：單抗藥物濃度設(shè)置為150 μg/ml，化療藥物濃度設(shè)置為0、0.625、2.5、10 μg/ml。MCF-7單獨加紫杉醇組：濃度調(diào)整為0、1.0、0.1、和0.01 μg/ml；單獨加單抗組：單抗藥物濃度設(shè)置為150 μg/ml，紫杉醇和單抗聯(lián)合組：單抗藥物濃度設(shè)置為150 μg/ml，化療藥物濃度設(shè)置為0、1.0、0.1和0.01 μg/ml。MDA-MB453細胞株設(shè)置單獨加紫杉醇組：濃度調(diào)整為0、0.1、0.01、0.001 μg/ml,單獨加單抗組，單抗藥物濃度設(shè)置為150 μg/ml；紫杉醇和單抗聯(lián)合組：單抗藥物濃度設(shè)置為150 μg/ml化療藥物濃度設(shè)置為0、0.1、0.01和0.001 μg/ml。于加藥后72 h在450 nm吸光度下進行檢測。并將OD值轉(zhuǎn)換為抑制率，計算公式為：抑制率=(空白組OD450 nm-實驗組OD450 nm)/空白組OD450 nm×100%，然后使用Prism7進行繪圖。

1.2.7流式細胞術(shù)檢測E12聯(lián)合化療藥物誘導(dǎo)乳腺癌細胞株的凋亡 取生長良好的細胞鋪板，鋪板24 h之后，使用10%FBS的DMEM完全培養(yǎng)基稀釋藥物進行加藥，加藥設(shè)置:對于MCF-7細胞株來說，F(xiàn)GF2單抗單獨組為150 μg/ml，順鉑單獨組為0.5 μg/ml,單抗順鉑聯(lián)合組為單抗150 μg/ml+順鉑0.5 μg/ml，紫杉醇單獨組為0.1 μg/ml,單抗紫杉醇聯(lián)合組為單抗150 μg/ml+紫杉醇0.1 μg/ml;對于MDA-MB453細胞株來說，F(xiàn)GF2單抗單獨組為150 μg/ml，順鉑單獨組為3 μg/ml,單抗順鉑聯(lián)合組為單抗150 μg/ml+順鉑3 μg/ml，紫杉醇單獨組為0.01 μg/ml,單抗紫杉醇聯(lián)合組為單抗150 μg/ml+紫杉醇0.01 μg/ml;實驗均設(shè)置空白對照，加藥后置于細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 48 h。藥物處理48 h后消化細胞，加入到流式管中，然后加入PBS洗滌，條件為1 000 r/min離心5 min，離心同時配制流式凋亡檢測Buffer和FITC-PI流式雙染工作液，每只管分別加入100 μl FITC-PI流式雙染工作液，混勻后避光染色15 min，上機前每只管再補充100 μl的流式凋亡檢測Buffer，混勻后立即檢測，使用FlowJo X 10.0.7r2軟件分析數(shù)據(jù)并繪圖。

1.2.8E12的生物信息學(xué)表位分析 使用Discovery Studio 4.5的Create Homology Models模塊對FGF2進行同源建模。使用Model Antibody進行抗體可變區(qū)的同源建模，選擇DOPE Score最低的結(jié)構(gòu)作為下一步使用。使用Dock and Analyze Protein Complexes模塊進行抗原抗體的分子對接，最終使用打分最靠前的POSE作為最終的結(jié)果。使用Analyze Protein Interface模塊來對抗原表位進行分析。使用Analyze Protein Interface模塊分析FGF2-FGFR1-肝素三元復(fù)合物結(jié)構(gòu)的X-射線衍射晶體結(jié)構(gòu)，來鑒定FGF2的生物活性部位。最終使用R語言對FGF2抗體表位氨基酸與FGF2分子生物活性部位取交集并繪制韋恩圖，確定抗體是否封閉了FGF2的生物活性部位，來對抗體的生物學(xué)活性的機理進行解釋。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析 采用 Graph Pad Prism 7.0 軟件進行t檢驗，分析不同組別數(shù)據(jù)間統(tǒng)計學(xué)差異，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1FGF2單抗E12人源化改造情況統(tǒng)計 人源化抗體改造情況統(tǒng)計見表1，與抗人FGF2鼠源抗體相比，人源化抗體的重鏈可變區(qū)與輕鏈可變區(qū)分別進行了26個和15個氨基酸突變，僅在抗體重鏈可變區(qū)殘留一個非人源胚系基因的氨基酸位點，重鏈和輕鏈的CDR區(qū)分別為32和17個氨基酸。最終得到的人源化抗體的人類序列來源比率為重鏈達到98.89%，輕鏈達到了100.00%，結(jié)果顯示最終得到的是高度的人源化抗體，非常接近全人源抗體。

2.2人源化單抗E12的純度鑒定 使用SDS-PAGE和HPLC對抗體的純度鑒定結(jié)果可以看出人源化抗體E12在還原條件下經(jīng)過SDS-PAGE后，分開成兩條清晰的條帶，分子量分別在50 kD和25 kD附近,并且沒有明顯的雜帶(見圖1A)，這說明前期實驗成功純化得到了抗體，并且抗體的純度與完整性良好。使用HPLC技術(shù)對人源化FGF2單克隆抗體E12的純度進行了分析，根據(jù)峰圖結(jié)果顯示，抗體的純度為99.02%(見圖1B)，結(jié)果顯示抗體的純度較高。

表1FGF2單抗可變區(qū)人源化改造情況統(tǒng)計

Tab.1Statisticsofanti-humanFGF2monoclonalantibodyE12variableregion’shumanization

AntibodytypeMouseH chainL chainHumanizedH chainL chainMutations002615Non-germline271510CDR32173217Total chain122106122106Total framework90899089Total germline63748989Human origin rate70.00%83.15%98.89%100%

2.3間接ELISA檢測FGF2人源化單抗E12與FGF2的結(jié)合活性 圖2表明使用ELISA測定FGF2人源化單抗與鼠源單抗的效價,人源化的FGF2單抗在稀釋到濃度為0.004 μg/ml時，OD450 nm值還處在1左右，效價約為1/243 000，說明了人源化抗體E12可以與FGF2進行很好的結(jié)合，保留了鼠源抗體的絕大多數(shù)活性。

2.4BCA法測定人源化FGF2單抗E12的蛋白濃度 通過BCA法建立的蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖3所示，計算得標(biāo)準(zhǔn)曲線的R2為0.992，顯示所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線良好，經(jīng)檢測并帶入方程計算，得到人源化FGF2單抗的蛋白濃度為8.74 mg/ml，蛋白濃度較高。

圖1 人源化FGF2抗體E12的純度鑒定Fig.1 Purity identification of humanized FGF2 antib-ody E12Note:A.SDS-PAGE of antibody；1.BSA;M.Marker;2.Humanized antibody E12;B.Result of HPLC.

圖2 ELISA檢測FGF2單克隆抗體的效價Fig.2 Detection of titer of FGF2 monoclonal antibody by ELISA

2.5CCK-8法檢測E12對乳腺癌細胞株的細胞增殖抑制作用 使用CCK-8法檢測FGF2單抗對兩株腫瘤細胞的抑制作用，如圖4所示，發(fā)現(xiàn)FGF2人源化單抗E12對兩株腫瘤細胞均有抑制作用，并發(fā)現(xiàn)抑制率呈濃度依賴性增長。在加入人源抗體為500 μg/ml的濃度時，抗體對乳腺癌細胞MCF-7的抑制率約為32%，抗體對乳腺癌細胞MDA-MB453的抑制率約為37%，同時人源抗體與設(shè)置的鼠源抗體陽性對照與具有相似的抑制率，在加入鼠源抗體陽性對照為500 μg/ml時，抗體對乳腺癌細胞MCF-7的抑制率約為33%，抗體對乳腺癌細胞MDA-MB453的抑制率約為38%，表明抗體在進行人源化改造以后，其生物學(xué)活性得到了絕大部分的保留。

2.6CCK-8法檢測FGF2單抗E12聯(lián)合化療藥物對乳腺癌細胞株的細胞增殖抑制作用 使用CCK-8法檢測FGF2單抗E12與順鉑聯(lián)合對兩株腫瘤細胞的抑制作用，如圖5所示，發(fā)現(xiàn)首先單抗(150 μg/ml)單獨對兩株腫瘤細胞均有抑制作用，其次化療藥物單獨對兩株腫瘤細胞也均有抑制作用，而且抑制率呈濃度依賴增長。

在順鉑濃度分別為0.625、2.5、5、10 μg/ml 的時候，單抗和順鉑聯(lián)合組比順鉑單獨組對MCF-7細胞的抑制率分別提高了14.5%、10.4%、1.5%和0.5%。對MDA-MB453細胞的抑制率分別提高了15.5%、14.8%、13.0%和6.8%。在紫杉醇濃度分別為1.0、0.1和0.01 μg/ml時，單抗和紫杉醇聯(lián)合組比紫杉醇單獨組對MCF-7細胞的抑制率的分別提高了約14.5%、11.1%和9.3%。在紫杉醇濃度分別為0.1、0.01和0.001 μg/ml時，單抗和紫杉醇聯(lián)合組比紫杉醇單獨組對MDA-MB468細胞的抑制率分別提高了約18.6%、19.9%和6.8%。

圖3 BCA法檢測人源化FGF2單抗E12的蛋白濃度Fig.3 Detection of protein concentration of humanized FGF2 monoclonal antibody by BCA

本研究發(fā)現(xiàn)FGF2單抗E12與化療藥物聯(lián)合組比化療藥物單獨組有更強的抑制作用，經(jīng)過t檢驗，兩組之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，即FGF2單抗和化療藥物對腫瘤細胞的抑制具有聯(lián)合增效作用。

2.7流式細胞術(shù)檢測FGF2單抗E12聯(lián)合化療藥物誘導(dǎo)乳腺癌細胞株的凋亡 用流式細胞儀檢測，對于MCF-7細胞株，如圖6A，空白對照組晚期凋亡率為1.97%，F(xiàn)GF2單抗處理組為8.10%,順鉑單獨處理組為9.33%，F(xiàn)GF2單抗+順鉑的聯(lián)合組為14.80%，與空白對照組相比，使用FGF2單抗，順鉑單獨處理以及FGF2單抗+順鉑的聯(lián)合組處理的MCF-7細胞在Annexin V/PI雙陽性區(qū)域所占比例有明顯提高，其中以聯(lián)合組最為明顯。

圖4 FGF2單抗E12單獨抑制腫瘤細胞MCF-7、MDA-MB453的細胞增殖Fig.4 FGF2 antibody alone inhibits cell proliferation of tumor cells MCF-7,MDA-MB453

圖5 FGF2單抗E12與順鉑聯(lián)合化療藥物抑制乳腺癌腫瘤細胞的細胞增殖Fig.5 FGF2 monoclonal antibody combined with chemotherapy drugs inhibits cell proliferation of breast cancer cell-lines

圖6 流式細胞儀檢測FGF2單抗聯(lián)合化療藥物誘導(dǎo)MCF-7細胞株凋亡Fig.6 Detection of apoptosis of MCF-7 cell line induced by FGF2 monoclonal antibody and chemotherapy by flow cytometry

圖7 流式細胞儀檢測FGF2單抗聯(lián)合化療藥物誘導(dǎo)MDA-MB453細胞株凋亡Fig.7 Detection of apoptosis of MDA-MB453 cell line induced by FGF2 monoclonal antibody and chemotherapy by flow cytometry

圖8 抗原抗體分子對接以及表位分析Fig.8 Antigen-antibody docking and epitope analysis

同理，對于MCF-7細胞株，如圖6B，空白對照組晚期凋亡率為2.94%，F(xiàn)GF2單抗處理組為9.33%,紫杉醇單獨處理組為12.40%，F(xiàn)GF2單抗+紫杉醇的聯(lián)合組為20.70%，與空白對照組相比，使用FGF2單抗，紫杉醇單獨處理以及FGF2單抗+紫杉醇的聯(lián)合組處理的MCF-7細胞在Annexin V/PI雙陽性區(qū)域所占比例有明顯提高，其中以聯(lián)合組最為明顯。

用流式細胞儀檢測，對于MDA-MB453細胞株，如圖7A，空白對照組晚期凋亡率為1.7%，F(xiàn)GF2單抗處理組為6.56%,順鉑單獨處理組為8.8%，F(xiàn)GF2單抗+順鉑的聯(lián)合組為15.8%，與空白對照組相比，使用FGF2單抗，順鉑單獨處理以及FGF2單抗+順鉑的聯(lián)合組處理的MDA-MB453細胞在Annexin V/PI雙陽性區(qū)域所占比例有明顯提高，其中以聯(lián)合組最為明顯。

同理，對于MDA-MB453細胞株，如圖7B，空白對照組Annexin V/PI雙陽性區(qū)域所占比例(晚期凋亡率)為2.11%，F(xiàn)GF2單抗處理組為7.49%,紫杉醇單獨處理組為11.17%，F(xiàn)GF2單抗+紫杉醇的聯(lián)合組為21.5%，與空白對照組相比，使用FGF2單抗，紫杉醇單獨處理以及FGF2單抗+紫杉醇的聯(lián)合組處理的MDA-MB453細胞在Annexin V/PI雙陽性區(qū)域所占比例有明顯提高，其中以聯(lián)合組最為明顯。

2.8FGF2人源化單抗E12的生物信息學(xué)表位分析 根據(jù)分子對接的結(jié)果如圖8所示，可見抗原抗體形成的是氨基酸序列上不連續(xù)的構(gòu)象表位。分析抗原抗體結(jié)合界面上的表位，顯示L:ASN28,H:VAL38等氨基酸為結(jié)合界面上抗體的表位,包括輕鏈的7個氨基酸和重鏈的13個氨基酸。FGF2:HIS16等氨基酸為結(jié)合界面上FGF2的表位。共21個氨基酸。根據(jù)從PDB數(shù)據(jù)庫獲取的FGF2-HSPG-FGFR1三元復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)，分析FGF2分子的生物活性部位，顯示FGF2:HIS16等氨基酸為FGF2分子的生物活性部位。

通過對抗體表位與FGF2生物學(xué)活性位點進行比較，本研究發(fā)現(xiàn)了抗體結(jié)合到FGF2上面的位置共21個氨基酸，其中有9個氨基酸是處于FGF2的生物活性位點的部位，即抗體部分封閉了FGF2的生物活性部位，從而部分阻止了FGF2和FGFR以及HSPG的結(jié)合，起到了中和FGF2生物學(xué)活性的作用。

3 討論

鼠源性可引發(fā)HAMA反應(yīng)，對于鼠源抗體來說，人源化是其一個非常重要的步驟。本研究表明，已獲人源化FGF2單抗抗體可變區(qū)人類抗體氨基酸序列來源比率為重鏈達到98.89%，輕鏈達到了100.00%，人源化程度高，可有效降低HAMA反應(yīng)，與鼠源抗體相比具有較明顯的優(yōu)勢。

本實驗室多年以來應(yīng)用制備FGF2鼠源性單抗，發(fā)現(xiàn)在體內(nèi)外均可有效抑制腫瘤細胞的生長。在后續(xù)的研究中，本實驗室也嘗試了化療藥物聯(lián)合FGF2鼠源性單抗的研究，發(fā)現(xiàn)于體內(nèi)外化療藥物聯(lián)合FGF2單抗可以獲得聯(lián)合增效作用。因此在本研究中利用已獲FGF2高度人源化單抗，使用了均為人體來源的MCF-7和MDA-MB453腫瘤細胞株，證實了單抗聯(lián)合化療藥物順鉑和紫杉醇，具有抑制腫瘤細胞的增殖并促進腫瘤細胞凋亡的聯(lián)合增效作用，這為聯(lián)合用藥增效機制的研究提供了基礎(chǔ)。

本研究后續(xù)通過生物信息學(xué)方法對單抗表位進行分析，通過抗體表位于生物活性部位相比較，發(fā)現(xiàn)抗體部分封閉了FGF2的生物學(xué)活性位點，解釋了抗體的生物活性機理。

本研究初步證實了人源化FGF2單抗聯(lián)合化療藥物可有效抑制乳腺癌細胞株MCF-7和MDA-MB453的細胞增殖并促進細胞凋亡，后續(xù)研究可進行抗體聯(lián)合化療藥物對腫瘤細胞株抑制的體內(nèi)實驗，并進一步探究抗體聯(lián)合化療藥物對腫瘤細胞株抑制聯(lián)合增強作用的信號通路機制。