劉冬霞 許偉華 梁桂蘭 龍輝

聽(tīng)力障礙,又稱耳聾,是全球范圍內(nèi)面臨的重大公共衛(wèi)生問(wèn)題,也是最常見(jiàn)的出生缺陷之一［1］。每年新生聽(tīng)力障礙兒童3萬(wàn)余例,加上遲發(fā)性耳聾及藥物性耳聾患者,每年新增的聽(tīng)力障礙兒童超過(guò)6萬(wàn)。其中60%的耳聾是由于遺傳的因素造成的,40%是環(huán)境因素導(dǎo)致的［2］。有數(shù)據(jù)顯示,聽(tīng)力障礙已成為我國(guó)第二大出生缺陷疾病［3］。為研究廣東清遠(yuǎn)地區(qū)新生兒常見(jiàn)耳聾易感基因攜帶情況,從而為制定符合清遠(yuǎn)地區(qū)實(shí)際情況的遺傳性耳聾綜合防治實(shí)施方案提供依據(jù),進(jìn)行研究如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015～2017年出生于清遠(yuǎn)婦幼保健院的3630例新生兒,男2030例,女1600例。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集與處理 經(jīng)家長(zhǎng)同意并簽署知情同意書(shū),填寫新生兒基本信息表,然后采取新生兒出生72 h之后的足跟血,斜針?lè)ㄟM(jìn)針,拇指食指握持足部適度擠壓,取消毒棉球擦拭掉第一滴血,繼續(xù)擠壓,待血液流出聚血成珠,取出血樣標(biāo)本采集卡接觸血滴,使血液自然滲透至濾膜背面。采集血斑直徑需＞8 mm,采集血斑2個(gè)以上。待血片晾干后,填寫新生兒、家長(zhǎng)以及聯(lián)系方式等基本信息裝入封口袋中,置于4℃冰箱備用。每周由專人寄送至清遠(yuǎn)市婦幼保健院優(yōu)生與遺傳實(shí)驗(yàn)診斷中心進(jìn)行檢測(cè),寄送全程采取冷鏈運(yùn)輸,以免血片由于高溫發(fā)生變質(zhì)。

1.2.2 檢測(cè)方法

1.2.2.1 低密度基因芯片檢測(cè) 本方法檢測(cè)對(duì)象為非綜合征遺傳性耳聾相關(guān)基因突變熱點(diǎn),包括4個(gè)基因中的13個(gè)位點(diǎn),使用的是耳聾易感基因檢測(cè)試劑盒(PCR+導(dǎo)流雜交法)(廣東凱普生物科技股份有限公司,中國(guó))。

1.2.2.2 Sanger測(cè)序驗(yàn)證 對(duì)于檢驗(yàn)結(jié)果為較為嚴(yán)重的純合突變或均質(zhì)突變樣本寄送至廣州凱普醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所進(jìn)行Sanger測(cè)序驗(yàn)證。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察檢測(cè)結(jié)果,并對(duì)陽(yáng)性病例進(jìn)行電話回訪,統(tǒng)計(jì)電話回訪情況。

2 結(jié)果

2.1 基因檢測(cè)結(jié)果 統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)攜帶遺傳性耳聾相關(guān)突變基因的有96例,占2.64%(96/3630),其中純合突變或者均質(zhì)突變患兒4例,占0.11%(4/3630)。見(jiàn)表1。

2.2 陽(yáng)性病例電話回訪結(jié)果 96例陽(yáng)性病例中,成功電話回訪90例。見(jiàn)表2。

表1 3630例新生兒耳聾易感基因突變統(tǒng)計(jì)表(n,%)

表2 96例陽(yáng)性病例電話回訪結(jié)果統(tǒng)計(jì)

3 討論

一直以來(lái),我國(guó)因聾致啞的問(wèn)題給無(wú)數(shù)的聾啞人及其家庭帶來(lái)了巨大的痛苦和沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),因此,耳聾基因的篩查非常重要,需要從新生兒做起［4］。在每年新增8萬(wàn)聾兒中約有50%通過(guò)了新生兒聽(tīng)力篩查,約90%的聾兒是由聽(tīng)力正常的父母所生［5］。現(xiàn)有的聽(tīng)力診斷和聽(tīng)力檢測(cè)技術(shù)局限于聽(tīng)力下降的檢查,無(wú)法對(duì)耳聾做出早期的預(yù)警,尤其是對(duì)于因遺傳因素引起的遲發(fā)型漸進(jìn)性耳聾和藥物性耳聾,此類新生兒在聽(tīng)力篩查時(shí)有可能表現(xiàn)為聽(tīng)力正常而漏診,一旦使用氨基糖苷類藥物或耳道壓力驟變后就會(huì)致聾［6-9］。中國(guó)聾兒中GJB2、SLC26A4和線粒體基因突變導(dǎo)致的耳聾占比高的事實(shí)提示了新的耳聾預(yù)防思路和方法［10］。

在本研究中,耳聾人群GJB2基因突變的檢出55例,占1.52%(55/3630),以235delC檢出率最高,所有檢出樣本均為雜合突變。當(dāng)患兒為GJB2單雜合突變(如GJB2235delC雜合突變)或與其他耳聾相關(guān)基因位點(diǎn)組成的復(fù)合雜合突變(如GJB2235delC雜合突變復(fù)合SLC26A42168 A＞G雜合突變)時(shí),患兒無(wú)明顯耳聾表現(xiàn)或病情相對(duì)較輕,無(wú)需過(guò)度治療,但仍需定期檢查聽(tīng)力狀況。本研究發(fā)現(xiàn)33例SLC26A4突變病例,檢出率為0.91%(33/3630),其中IVS7-2A＞G檢出22例,1229C＞T檢出6例,其中純合突變1例,經(jīng)電話回訪顯示,家長(zhǎng)反映患兒對(duì)聲音反應(yīng)良好,但是為了防控遲發(fā)性耳聾,作者建議患兒及時(shí)進(jìn)行前庭水管CT檢測(cè),并告知患者日后要避免發(fā)燒、頭部撞擊、情緒波動(dòng)等引起的顱內(nèi)壓增高的現(xiàn)象。其余患兒為SLC26A4單雜合突變,所有患兒經(jīng)電話回訪顯示無(wú)明顯耳聾表現(xiàn)。在本研究中,共檢出線粒體基因突變7例,占0.19%(7/3630),突變類型均是1555 A＞G,其中3例為均質(zhì)突變,作者對(duì)患兒媽媽進(jìn)行藥物性耳聾的用藥指導(dǎo),電話回訪顯示患者聽(tīng)力均正常,說(shuō)明對(duì)基因突變攜帶者進(jìn)行用藥指導(dǎo)可以有效地避免藥物性耳聾的發(fā)生,因而具有極好的耳聾預(yù)警效果。本次研究檢出538C＞T雜合突變1例,占0.03%(1/3630)。本研究顯示,廣東清遠(yuǎn)地區(qū)2015～2017年新生兒遺傳性耳聾相關(guān)突變基因攜帶率為2.64%(96/3630),其中純合突變或者均質(zhì)突變患兒4例,占0.11%(4/3630)。

綜上所述,應(yīng)用基因芯片可以高效、快速地在新生兒群體中進(jìn)行大規(guī)模的基因篩查,有廣泛的臨床應(yīng)用價(jià)值及前景,在本研究中配合以電話回訪的形式對(duì)病患的病情進(jìn)行跟蹤,及時(shí)給予生活及用藥指導(dǎo),最終降低聾兒的發(fā)病率,臨床醫(yī)生如了解GJB2、SLC26A4及mtDNA突變相關(guān)耳聾患者的發(fā)病特點(diǎn)及就診規(guī)律,將有助于預(yù)判最有可能獲得陽(yáng)性的常規(guī)耳聾基因診斷結(jié)果的耳聾人群,從而使其在臨床應(yīng)用中更具針對(duì)性。