陶明俊 郎家慶 曹科 劉新剛 李飛 李嘉輝 陳運生 馬東禮

【摘要】 目的：驗證國賽Astep Plus特定蛋白分析儀測定超敏C反應蛋白（hs-CRP）的性能。方法：對Astep Plus特定蛋白分析儀測定hs-CRP的精密度、準確度、線性、攜帶污染率等性能指標進行驗證。結(jié)果：批內(nèi)精密度為3.64%、2.46%、2.33%，批間精密度為9.67%、4.95%，均符合廠家要求；準確度與廠家校準品的偏倚4.47%，與國際參考品的偏倚-2.72%，均符合偏倚≤5%的要求；血清模式線性范圍是1.6～320 mg/L，全血模式線性范圍是0.5～225 mg/L。攜帶污染率為0.48%，符合≤1%的要求；20份全血標本中，80%（16/20）偏倚≤12.5%，符合實驗要求。結(jié)論：Astep Plus特定蛋白分析儀測定hs-CRP的各項性能指標均能達到廠家聲明的性能，結(jié)果準確、穩(wěn)定，符合臨床質(zhì)量要求，滿足實驗室和臨床需要。

【關(guān)鍵詞】 超敏C反應蛋白； 性能驗證； 特定蛋白

【Abstract】 Objective：To verify the performance of the Guo Sai Astep Plus specific protein analyzer in the determination of high sensitivity C-reactive protein（hs-CRP）.Method：The precision，accuracy，linearity and carrying pollution rate and other performance indicators of hs-CRP were determined by Astep Plus specific protein analyzer.Result：The intra-assay precision was 3.64%，2.46%，2.33% and the inter-batch precision was 9.67% and 4.95%，which all met the requirements of the manufacturer.The bias compared with that of factory calibration and international reference was 4.47% and -2.72% respectively，which were all in accordance with the requirements of bias≤5%.The linear range was 1.6-320 mg/L in the serum mode while 0.5-225 mg/L in the whole blood mode.The carrying pollution rate was 0.48%，which meets the requirement of≤1%.Of the 20 whole blood samples，80%（16/20） bias≤12.5%，which met the requirements of the experiment.Conclusion：The performance indexes of hs-CRP by Astep Plus specific protein analyzer can achieve the performance declared by the manufacturer，the results are accurate，stable，meet the clinical quality requirements and meet the laboratory and clinical needs.

【Key words】 High sensitivity C-reactive protein； Performance verification； Specific protein

First-authors address：Shenzhen Childrens Hospital，Shenzhen 518026，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.11.032

隨著醫(yī)院的發(fā)展，患兒日益增多，為適應日益增長的標本對檢測結(jié)果快速、準確的要求，科室新近引進了由深圳市國賽生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的全自動Astep Plus特定蛋白分析儀，采用散射比濁法檢測超敏C反應蛋白（hs-CRP）。實驗室認可的專用準則-《醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則》中，要求申請認可的實驗室應對設備、檢測系統(tǒng)或方法的主要分析性能進行驗證[1-2]，證實其技術(shù)性能指標能否滿足臨床需要[3-4]。筆者查閱相關(guān)文獻和結(jié)合工作實際，制定了驗證方案，對Astep Plus特定蛋白分析儀的hs-CRP的分析性能進行驗證，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 深圳市國賽生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的Astep Plus特定蛋白分析儀（散射比濁法）及配套試劑和校準品（批號20180413）。科室另行購買的伯樂CRP質(zhì)控品（批號66342）和國際參考品ERM-DA474（歐洲標準局網(wǎng)站購買，批號6094）。對比儀器：深圳市國賽生物技術(shù)有限公司Nephstar plus特定蛋白分析儀（散射比濁法）及配套試劑（試劑批號0251170220）。

1.2 標本來源 新鮮靜脈血標本均來自深圳市兒童醫(yī)院門、急診患者。

1.3 質(zhì)量控制 實驗前對各儀器進行了維護、校準，實驗期間室內(nèi)質(zhì)控均在控。實驗儀器空白值均合格。

1.4 實驗方法

1.4.1 精密度 （1）批內(nèi)精密度：取高值、中值、低值3份濃度的新鮮全血樣本，每份樣本連續(xù)重復測定10次，計算均值、標準差和變異系數(shù)（CV），判斷是否小于廠家規(guī)定（CV≤5%）的性能標準。（2）批間精密度：取中值、低值2個濃度的伯樂質(zhì)控血清，每天檢測1次，連續(xù)測定20 d，計算均值、標準差和CV，判斷是否小于廠家規(guī)定（CV≤10%）的性能標準。

1.4.2 準確度 （1）校準品驗證：采用廠家提供1個濃度校準品（靶值160 mg/L），連續(xù)檢測5次，計算均值和偏倚，判斷是否小于廠家規(guī)定（偏倚≤5%）的性能標準。（2）參考品驗證：采用國際參考品（靶值41.2 mg/L），連續(xù)檢測5次，計算均值和偏倚，判斷是否小于國際參考品規(guī)定（偏倚≤5%）的性能標準。

1.4.3 線性范圍 （1）血清線性范圍：取1份高值血清標準品（靶值為320 mg/L），將標準品與稀釋液按比例由低到高稀釋成6個濃度梯度，每個濃度重復測定3次，取平均值。將實測值與理論值作比較，計算y=bx+a，驗證線性范圍。（2）全血線性范圍：取1份高值全血樣本H（盡量接近范圍上限），1份低值全血樣本L（檢測值約0.5 mg/L）。將高值和低值標本按0∶1、1︰15、1∶7、1∶3、1∶1、1∶0的比例進行混合，制備成6個濃度梯度的樣品，每個濃度標本重復測定3次，取平均值。將實測值與理論值作比較，計算y=bx+a，驗證線性范圍。血清及全血線性范圍結(jié)果判斷：斜率b值為1±0.05，相關(guān)系數(shù)R≥0.975（或R2≥0.95）即線性符合要求。

1.4.4 攜帶污染率 取高值、低值全血標本各1份依次測高值3次（H1、H2、H3）、低值3次（L1、L2、L3），計算攜帶污染率，攜帶污染率=|（L1-L3）|/（H3-L3）×100%。攜帶污染率<1%為可接受。

1.4.5 儀器間比較 選20份不同濃度的全血標本，分別在Nephstar plus和Astep Plus儀器各檢測1次，以Nephstar plus儀器檢測結(jié)果為參考結(jié)果，以Astep Plus檢測結(jié)果為比對結(jié)果進行偏倚統(tǒng)計，至少80%標本偏倚應≤12.5%。

2 結(jié)果

2.1 精密度 3份不同濃度全血標本的批內(nèi)精密度分別為3.64%、2.46%、2.33%；2份質(zhì)控血清的批間精密度分別為9.67%、4.95%，均符合廠家要求，見表1、2。

2.2 準確度 校準品5次檢測結(jié)果分別為160.7、168.14、171.74、172.09、163.11 mg/L，計算得出偏倚4.47%；參考品結(jié)果39.14、40.18、41.47、39.65、39.95 mg/L，計算得出偏倚-2.72%。校準品和參考品均符合偏倚應≤5%的要求。

2.3 線性范圍 計算相關(guān)回歸方程，均符合線性要求，得出血清模式線性范圍是1.6～320 mg/L，全血模式線性范圍是0.5～225 mg/L，血清和全血模式線性檢測數(shù)據(jù)見表3、4，驗證結(jié)果見圖1、2。

2.4 攜帶污染率 實驗結(jié)果為H1 95.08 mg/L、H2 97.06 mg/L、H3 93.33 mg/L，L1 2.29 mg/L、L2 1.9 mg/L、L3 1.85 mg/L，根據(jù)實驗結(jié)果計算得出攜帶污染率為0.48%，符合攜帶污染率≤1%的要求。

2.5 儀器間比較 經(jīng)比對，20份全血標本中偏倚≤12.5%有16份，計算得出80%的標本偏倚≤12.5%，符合實驗要求，見表5。

3 討論

感染性疾病是一種臨床上常見的兒科疾病，具有多發(fā)性，其發(fā)病主要與細菌、病毒及支原體等有關(guān)[5]。C反應蛋白是一種由腫瘤壞死因子、白細胞介素等炎性因子調(diào)節(jié)，并由肝細胞合成的非特異性急性時相反應蛋白，hs-CRP是根據(jù)測定方法更敏感而命名。既往研究顯示，當組織受到損傷、炎癥或感染時，C反應蛋白可以在數(shù)小時內(nèi)急劇上升，并在2～3 d達峰值，待病情改善時逐漸下降，恢復正常[6-8]。C反應蛋白被廣泛應用于感染的診斷與鑒別診斷，是鑒別細菌或病毒感染的一個首選指標，用于評估感染的嚴重程度、抗生素的療效監(jiān)測[9-11]，且C反應蛋白與多種兒科感染性疾病相關(guān)，并在臨床上常與PCT等其他指標共同應用于疾病診斷[12-15]。C反應蛋白與PCT聯(lián)合檢測常用于新生兒感染的診斷[16-20]。而全血C反應蛋白的檢測快速、方便、經(jīng)濟實惠、結(jié)果準確可靠、創(chuàng)傷小，容易被患兒及家長接受[21]。

從本研究驗證結(jié)果看，Astep Plus特定蛋白分析儀測定hs-CRP的批內(nèi)精密度和批間精密度均較好，完全符合廠家要求；準確度驗證結(jié)果顯示，與廠家校準品的偏倚為4.47%，特別與國際參考品相比，偏倚仍然很低（僅-2.72%），說明此項目有很好的溯源性，檢測結(jié)果準確；線性范圍的驗證實驗顯示，血清模式線性范圍是1.6～320 mg/L，全血模式線性范圍是0.5～225 mg/L；攜帶污染率≤1%；儀器間比較發(fā)現(xiàn)20份全血標本中偏倚≤12.5%有16份，計算得出80%的標本偏倚≤12.5%，符合實驗要求。相比于舊款的半自動Nephstar Plus儀器，Astep Plus特定蛋白分析儀為全自動，有血清和全血兩種模式可選，儀器自動進行結(jié)果換算，操作簡單，檢測速度快（180測試/h），用血量少（儀器吸血量為13 μL），可使用靜脈全血管和0.5 mL EP管直接上機檢測，特別是直接使用0.5 mL EP管上機檢測時，標本最少只需要17μL，特別適合兒科使用。

綜上所述，Astep Plus特定蛋白分析儀測定hs-CRP的各項指標能達到廠家聲明的性能，結(jié)果準確、穩(wěn)定，符合臨床質(zhì)量要求，滿足實驗室和臨床需要。

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