中華中醫(yī)藥學會中藥實驗藥理專業(yè)委員會

1 造模動物[1-5]

現(xiàn)用于造體癬模型的動物有猩猩、裸鼠、猴、兔、豚鼠、大鼠、小鼠等，豚鼠、大鼠是常用的造模型動物。豚鼠對多種病原體敏感，常用于多種病原體的分離與診斷，是建立體癬模型最適宜的動物。一般選用成年動物，雌雄各半。

2 飼養(yǎng)環(huán)境[6]

動物飼養(yǎng)環(huán)境應符合GB 14925-2010 實驗動物環(huán)境與設(shè)施、《實驗動物管理條例》《實驗動物國家標準》《關(guān)于善待實驗動物的指導性意見》《中華人民共和國動物保護法》等要求，符合相應標準及等級動物飼養(yǎng)環(huán)境的要求。

3 造模方法及評價依據(jù)

目前體癬的病因病機尚無明確定論，但有“真菌感染是發(fā)生體癬的重要因素”的學說。中醫(yī)則因膚熱多汗、濕熱內(nèi)蘊，或久病氣血虧損、正氣不足、抗邪無力等所致。主要基于西醫(yī)學說制備體癬模型。以西醫(yī)標準評價為主，中醫(yī)標準供參考[7]。

體癬動物模型評價的西醫(yī)標準依據(jù)的是《皮膚性病學》[8]：①輕微的炎癥、紅斑、丘疹、水泡；②有丘疹和水皰組成的邊緣，中央有愈合傾向；③確診需真菌學檢查，包括直接鏡檢陽性或真菌培養(yǎng)陽性即可確診，但陰性不能除外診斷。體癬模型評價的中醫(yī)標準依據(jù)《中醫(yī)皮膚病學》[9]：①初起出現(xiàn)群簇針頭大小淡紅色丘疹；②邊緣清楚，覆蓋鱗屑；③中央炎癥較輕或色素沉著；④可發(fā)全身或大部分肢體；⑤炎癥較重時邊緣有斷續(xù)水皰、膿皰、結(jié)痂；⑥鏡檢可查到菌絲與孢子。

3.1 刮傷法接種須癬毛癬菌(或石膏毛癬菌、或石膏樣小孢子菌等)制備豚鼠(大鼠體)癬模型[10-11]

原理：導致體癬的真菌以紅色毛癬菌最常見，還有須癬毛癬菌、斷發(fā)毛癬菌、犬小孢子菌、絮狀表皮癬菌和紫色毛癬菌等。真菌侵入表皮后寄生于表質(zhì)層，只在局部引起輕度炎癥，初起為紅丘疹或小水皰，繼之形成鱗屑，再向周圍逐漸擴展成邊界清楚的環(huán)形損害，邊緣?？梢娗鹫?、水皰，表面一般無滲液。

與臨床指標吻合情況：本模型符合西醫(yī)標準①②③，吻合度≥90%；符合中醫(yī)標準①②③⑤⑥，吻合度≥80%。

注意：刮傷的面積直接影響后期真菌的接種；接種區(qū)域的打磨深度不好控制，應盡量減少人為誤差。

3.2 穿刺法接種石膏毛癬菌制備豚鼠體癬模型[12]

原理：皮膚真菌感染以紅色毛癬菌最常見，還有須癬毛癬菌、斷發(fā)毛癬菌、犬小孢子菌、絮狀表皮癬菌和紫色毛癬菌等。真菌侵入表皮后寄生于表質(zhì)層，只在局部引起輕度炎癥，初起為紅丘疹或小水皰，繼之形成鱗屑，再向周圍逐漸擴展成邊界清楚的環(huán)形損害，邊緣?？梢娗鹫睢⑺?，表面一般無滲液。

與臨床指標吻合情況：本模型符合西醫(yī)標準①②③，吻合度≥90%；符合中醫(yī)標準①②⑤⑥，中醫(yī)吻合度≥60%。

注意：接種真菌的量及活度是影響體癬模型的重要因素，應盡量一致。穿刺法所致豚鼠體癬模型對中藥水煎液和粗提物比較敏感。

4 觀測指標

4.1 表觀指標：I類指標(核心指標)

體癬的表觀指標在西醫(yī)診斷標準中占有重要地位，在評價體癬動物模型時，表觀指標也應占主要地位。體癬動物模型紅斑面積(可以采用圖像分析系統(tǒng)測定其具體面積的大小)、鱗屑情況等是最直接的表觀指標，可將其分四級進行積分：0分：無病變；1分：少數(shù)紅斑性丘疹或病變趨向痊愈，新生體毛長出；2分：紅斑融合或呈島狀散在且周圍發(fā)紅；3分：紅斑全面擴大，有大量鱗屑及厚皮；4分：伴有出血及病變。體癬動物模型其他相關(guān)表觀指標也可以進行四級分級，有利于對模型情況的判斷。分級情況如下：

表1 體癬動物模型表觀指標的分級

根據(jù)西醫(yī)診斷標準，體癬最直接的表現(xiàn)為病變局部皮膚有彌漫性紅斑、細碎鱗屑、小片棕褐色結(jié)癡。表觀指標可以直接反映體癬模型復制成功與否，是核心指標，權(quán)重系數(shù)0.4。

4.2 病理指標：II類指標(直接相關(guān)指標)

體癬動物模型制備成功后局部病理變化，動物皮膚鱗狀上皮明顯增生，角化層增厚，皮下組織可見彌散性炎細胞浸潤。

體癬局部皮膚病理改變是評判皮損程度的依據(jù)，體癬局部組織病理半定量參考標準[10-11]：“-”：背側(cè)皮膚鱗狀上皮、角化層、皮下組織正常；“+”：背側(cè)皮膚鱗狀上皮有增生，角化層有增厚，皮下組織可見散在炎細胞浸潤；“++”：背側(cè)皮膚鱗狀上皮明顯增生，角化層明顯增厚，皮下組織可見較多的炎細胞浸潤；“+++”：背側(cè)膚鱗狀上皮顯著增生，角化層顯著增厚，皮下組織可見彌漫性炎細胞浸潤。

病理指標可準確反映體癬炎細胞對受損組織各層皮膚的浸潤程度以及受損組織各層愈合情況，專屬性強，是直接相關(guān)指標，權(quán)重系數(shù)0.3。

4.3 病原學指標：II類指標(直接相關(guān)指標)

體癬病灶皮膚逆培養(yǎng)陽性率是模型成功的重要指標，體癬病灶皮膚逆培養(yǎng)陰性率是藥物療效的重要指標。其專屬性強，與病理指標一樣是直接相關(guān)指標，權(quán)重系數(shù)0.3。

4.4 指標分類

表2顯示，將以上體癬動物模型各類指標進行分級，并確定權(quán)重系數(shù)。

表2 體癬動物模型各類指標權(quán)重系數(shù)

體癬動物模型I、II、III指標可參照文獻法，均按整體為1進行各自的量化積分，同一類的指標如表觀指標(I)是由紅斑面積、鱗屑情況、皮毛光澤度、皮毛脫落、結(jié)痂等多項指標組成，目前是按同一貢獻度計算；如觀察的表觀指標有5項，積分時各項小指標均為0.2，該指標最高分值為0.2。如具體每一類指標中有特殊重要的指標，可參照指標分級時的權(quán)重，再對同一類指標中的小指標進行不同的權(quán)重分級。II、III指標的計算同此。

每一類指標造模成功后的總積分，乘以相應指標的權(quán)重，將三級指標積分相加，即體癬動物模型制備成功時的總積分[13]。按上述方法計算，刮傷法接種須癬毛癬菌(或石膏毛癬菌，或石膏樣小孢子菌等)制備豚鼠(大鼠體)癬模型總積分約為0.84，穿刺法接種石膏毛癬菌制備豚鼠體癬模型總積分約為0.92。體癬動物模型成功率相對較高，每次造模可能會出現(xiàn)不同的總積分，為保證每次制備體癬模型的基本一致，建議總積分可以有30%左右的偏差，以此作為評價體癬動物模型成功與否的標準。所得總積分大于0.6，可認為該模型制備成功。本草案計算方法及所得總積分僅供參考，研究者可根據(jù)不同制備模方法所觀測指標另行計算，適當調(diào)整。

4.5 說明

本草案及起草說明中的權(quán)重系數(shù)僅提示該類指標在體癬模型制備及判定中的重要性，研究者可根據(jù)具體體癬模型防治實驗，適當進行調(diào)整。

表觀指標、病理指標所采用的分類方法，可能因在不同的體癬模型中采用標準不一致，分類也會有所差異，可能未全面涵蓋體癬相關(guān)的所有指標。上述標準及指標重點提示，應根據(jù)各類指標對體癬模型的貢獻度不同進行分類，盡量將單純的定性描述轉(zhuǎn)變成可量化或半量化指標，提高判定的可控性；所列的具體分類、指標等是供參考的，可根據(jù)具體體癬實驗研究的特點增減或另行設(shè)定。