馬平平，畢珺輝，徐丹，陳燕，趙雪瑩

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

胃潰瘍，中醫(yī)學(xué)稱為胃脘痛，并認(rèn)為胃脘痛病位在胃，與肝脾相關(guān)，常因風(fēng)、寒、濕、熱諸邪單獨(dú)或相兼犯胃致使胃脘氣機(jī)郁滯，胃氣失于和降，不通則痛而發(fā)生胃脘痛[1-4]。良附丸出自《良方集腋》，由高良姜和香附二味組成，具有行氣疏肝、祛寒止痛之功，為臨床上治療肝胃氣滯冷痛的基本方[5]。

本實(shí)驗(yàn)分別采用束縛-水浸應(yīng)激法、幽門結(jié)扎法、醋酸涂抹法及消炎痛法復(fù)制大鼠胃潰瘍模型，通過觀察良附丸對4種模型大鼠胃組織病理變化、潰瘍指數(shù)及潰瘍愈合率的影響，明確良附丸對4種實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍模型動(dòng)物的防治效果。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級雄性Wistar大鼠130只，體質(zhì)量180～220 g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心(GLP)提供，許可證號：SCXK(黑)2014-001。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

高良姜、香附各50 g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬一院中藥房提供。將以上兩種藥物按1∶1比例稱取，粉碎，混勻，煎煮，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)制備成所需不同濃度水煎液。

良附丸：將高良姜、香附二藥混勻，加水浸泡后，常規(guī)加熱煎煮2次，每次煎煮40 min，濾出藥渣，合并藥液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮成含生藥0.216 g/ml的良附丸水煎劑，置于冰箱備用，取用時(shí)置于恒溫水浴鍋加熱至37℃。

消炎痛配置：溶于5%碳酸氫鈉溶液中，配置成每毫升10 mg濃度的混懸液，以每公斤體質(zhì)量20 mg的劑量腹腔注射。

奧美拉唑腸溶膠囊，按體表面積折算法計(jì)算大鼠的用量，以成人用量每天40 mg計(jì)算出大鼠每天用量為3.6 mg/kg。以10 ml/kg灌胃給藥，制備奧美拉唑水懸液的濃度為0.36 mg/ml。

青霉素鈉溶液配置：80萬單位青霉素鈉溶于4 ml生理鹽水。

口服生理補(bǔ)液鹽(ORS)配置：1 000 ml純水,氯化鈉3.5 g，碳酸氫鈉2.5 g，氯化鉀1.5 g，蔗糖20 g混勻，充分溶解。

戊巴比妥鈉溶液的配置：3 g戊巴比妥鈉溶于100 ml生理鹽水中，配置成濃度為3%，用時(shí)以30 mg/kg腹腔注射麻醉。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑

PL202-S/00型電子天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)；HH-S恒溫水浴鍋(江蘇醫(yī)療儀器廠)；游標(biāo)卡尺(上海量具刃具廠)；青霉素鈉(哈藥集團(tuán)制藥總廠，批號15010105-2)；奧美拉唑腸溶膠囊(哈藥集團(tuán)三精制藥諾捷有限責(zé)任公司，批號1504634)；碘伏(德州名德消毒科技有限公司,批號20151003)；消炎痛(臨汾廳林藥業(yè)有限公司，批號1303201)；40%甲醛(丹東市龍海試劑廠，批號20141007)；戊巴比妥鈉(上海橋星貿(mào)易有限公司，批號1063180)；氯化鈉注射液(哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)股份有限公司，批號150512F5)；吲哚美辛片(臨汾廳林藥業(yè)有限公司，批號1303201)；蔗糖(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號20140111)；75%乙醇(山東利爾康醫(yī)療科技股份有限公司，批號20151007)；冰醋酸(天津市耀華化學(xué)試劑有限責(zé)任公司，批號XK13-011-00010)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組及給藥

清潔級雄性Wistar大鼠130只，體質(zhì)量180～220 g，按體質(zhì)量隨機(jī)分為12組：幽門結(jié)扎良附丸組10只(幽良組)；幽門結(jié)扎模型組10只(幽模組)；幽門結(jié)扎陽性對照組10只(幽陽組)；束縛-水浸應(yīng)激良附丸組10只(水良組)；束縛-水浸應(yīng)激模型組10只(水模組)；束縛-水浸應(yīng)激陽性對照組10只(水陽組)；消炎痛良附丸組10只(消良組)；消炎痛模型組10只(消模組)；消炎痛陽性對照組10只(消陽組)；醋酸涂抹良附丸組10只(醋良組)；醋酸涂抹模型組10只(醋模組)；醋酸涂抹陽性對照組10只(醋陽組)；空白對照組10只。各模型良附丸組給予良附丸2.16 g/(kg·d)灌胃，陽性對照組給予3.6 mg/(kg·d)奧美拉唑腸溶膠囊水溶液灌胃，模型組給予等體積生理鹽水灌胃。幽門結(jié)扎型、束縛-水浸應(yīng)激型和消炎痛型3種胃潰瘍模型大鼠分別預(yù)防性給藥4天后造模，醋酸涂抹型胃潰瘍大鼠造模后治療性給藥10天。

2.2 模型制備[6]

幽門結(jié)扎型胃潰瘍模型制備：造模前需連續(xù)給藥4天，造模開始前36 h需禁食不禁水，禁食期間勿使大鼠將墊料等物食入。末次給藥2 h后開始造模，將大鼠以3%戊巴比妥鈉麻醉，固定、備皮、消毒、開腹、結(jié)扎幽門，逐層將切口縫合，消毒、包扎后，放回飼養(yǎng)籠并禁食水。

束縛-水浸應(yīng)激型胃潰瘍模型制備：造模前需連續(xù)給藥4天，造模開始前24 h需禁食不禁水，于末次給藥1 h后開始造模，以3%戊巴比妥鈉麻醉后將大鼠固定于鼠板上，待大鼠蘇醒后將其浸入(20±1)℃的恒溫水槽中，液面與胸骨劍突齊平。

消炎痛型胃潰瘍模型制備：造模前需連續(xù)給藥4天，造模開始前24 h需禁食不禁水，末次給藥30 min后開始造模，按體質(zhì)量腹腔注射消炎痛,每公斤體質(zhì)量20 mg。

醋酸涂抹型大鼠胃潰瘍模型制備：造模前大鼠禁食不禁水24 h(嚴(yán)格控制動(dòng)物將墊料和糞便等雜物食入)，3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，常規(guī)固定、備皮、消毒后，自劍突下沿腹中線切開腹壁約2 cm打開腹腔，輕輕將胃拉出，暴露胃前壁竇體部，將胃漿膜面液體拭干后用直徑5 mm,長30 mm的自制塑料管垂直按壓于胃前壁竇體黏膜面上，盡量避開血管，用1 ml注射器向管內(nèi)注入100%醋酸0.2 ml，注意保持按壓力度，以防液體從接觸面周圍流出，60 s后將玻璃管中的醋酸用注射器吸除，以無菌生理鹽水沖洗、擦干涂抹處后將胃輕輕送回，并用大網(wǎng)膜將涂沫處覆蓋，腹壁縫合前向腹腔內(nèi)滴入青霉素鈉注射液0.1 ml，逐層縫合后再次消毒。術(shù)后禁食1天，飲用生理補(bǔ)液鹽。

2.3 實(shí)驗(yàn)取材

幽門結(jié)扎術(shù)后18 h，水應(yīng)激7 h后，消炎痛腹腔注射7 h后，醋酸涂抹末次給藥禁食24 h后將大鼠處死并立即開腹，除幽門結(jié)扎型外其余3種模型大鼠結(jié)扎幽門、賁門，取出胃置于1%甲醛中固定10 min，沿胃大彎把胃剪開，再用無菌生理鹽水將胃內(nèi)容物沖洗干凈，用脫脂棉球拭干，觀察胃組織的損傷情況。

2.4 潰瘍指數(shù)測定

取胃后觀察胃組織損傷情況發(fā)現(xiàn)，除醋酸涂抹型外，其余3組胃潰瘍模型大鼠胃組織損傷形態(tài)相似，均呈條形點(diǎn)或線狀出血帶，用游標(biāo)卡尺精確測量胃黏膜上每一個(gè)損傷的長度(mm)，并計(jì)算每只大鼠所有損傷長度的總和，作為該大鼠的潰瘍指數(shù)；也可按“分”表示潰瘍指數(shù)，將每個(gè)損傷評分，總分為該大鼠的潰瘍指數(shù)。

表1 評定潰瘍損傷程度的評分標(biāo)準(zhǔn)

注：若損傷寬度>2 mm者，將其計(jì)分加倍

醋酸涂抹型胃潰瘍大鼠胃黏膜損傷大致成橢圓形，其潰瘍面積計(jì)算方法為：以游標(biāo)卡尺通過潰瘍中心測量最大橫徑d1和最短橫徑d2，潰瘍指數(shù)(UI)=π×d1/2×d2/2。根據(jù)潰瘍指數(shù)計(jì)算潰瘍抑制率。

潰瘍抑制率(%)=(1-給藥組潰瘍指數(shù)/模型組潰瘍指數(shù))×100%

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠的一般情況比較

4種實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍模型大鼠均有精神萎靡、大小便失禁、呼吸微弱、行動(dòng)緩慢、食欲差及毛發(fā)無光澤、對外界刺激反應(yīng)較差等表現(xiàn)。幽門結(jié)扎型各組大鼠還出現(xiàn)了腹大體征；束縛-水浸應(yīng)激型大鼠除上述表現(xiàn)外還伴有瑟瑟發(fā)抖，水浸應(yīng)激型良附丸組及陽性藥組大鼠狀態(tài)明顯優(yōu)于水浸應(yīng)激型模型組。

3.2 各組大鼠胃黏膜損傷情況比較

幽門結(jié)扎型、束縛-水浸應(yīng)激型和消炎痛型各組大鼠胃黏膜表面損傷形態(tài)相似，呈條形點(diǎn)或線狀出血帶或糜爛。醋酸涂抹型各組大鼠胃黏膜潰瘍面形態(tài)為中央凹陷，潰瘍面上白色炎性壞死滲出物覆蓋，潰瘍周圍隆起類圓形潰瘍面，潰瘍累及胃組織全層，造成胃潰瘍區(qū)域與腹腔內(nèi)臟器出現(xiàn)黏連現(xiàn)象。

表2 良附丸對幽門結(jié)扎型大鼠潰瘍指數(shù) 及潰瘍抑制率的影響

注：與幽模組比較，▲▲P<0.01；與幽陽組比較，*P<0.05

由表2可知，幽模組出現(xiàn)潰瘍說明幽門結(jié)扎型大鼠胃潰瘍造模成功。幽良組潰瘍指數(shù)明顯降低，差異顯著(P<0.01)；幽陽組與幽模組比較，潰瘍指數(shù)亦明顯降低，差異顯著(P<0.01)。幽陽組潰瘍指數(shù)較幽良組明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

由表3可知，水模組出現(xiàn)潰瘍說明束縛-水浸應(yīng)激型大鼠胃潰瘍造模成功。水良組與水模組比較，潰瘍指數(shù)明顯降低，差異顯著(P<0.01)；水陽組與水模組比較，潰瘍指數(shù)亦明顯降低，差異顯著(P<0.01)。水良組與水陽組比較潰瘍指數(shù)無明顯差異(P>0.05)。

表3 良附丸對束縛-水浸應(yīng)激型大鼠潰瘍指數(shù) 及潰瘍抑制率的影響

注：與水模組比較，▲▲P<0.01；與水陽組比較，*P>0.05

由表4可知，消模組出現(xiàn)潰瘍說明消炎痛型大鼠胃潰瘍造模成功。消良組與消模組比較，潰瘍指數(shù)明顯升高，差異顯著(P<0.05)；消陽組與消模組比較，潰瘍指數(shù)差異不顯著(P>0.05)。消良組與消陽組比較潰瘍指數(shù)差異顯著，差異極具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

表4 良附丸對消炎痛型大鼠潰瘍指數(shù)及 潰瘍抑制率的影響

注：與消模組比較，▲P<0.05；與消陽組比較，*P<0.01

由表5可知，醋模組出現(xiàn)潰瘍說明醋酸涂抹型大鼠胃潰瘍造模成功。醋良組與醋模組比較，潰瘍指數(shù)無明顯差異，差異不顯著(P>0.05)；醋陽組與醋模組比較，潰瘍指數(shù)明顯降低，差異極顯著(P<0.01)。醋良組與醋陽組比較潰瘍指數(shù)差異顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表5 良附丸對醋酸涂抹型大鼠潰瘍指數(shù) 及潰瘍抑制率的影響

注：與醋模組比較，▲P>0.05，▲▲P<0.01；與醋陽組比較，*P<0.05

3.3 良附丸對4種模型大鼠潰病抑制率的影響

結(jié)果見表6及圖1。

表6 良附丸對4種模型大鼠潰瘍抑制率的影響

圖1 良附丸對4種模型大鼠潰瘍抑制率的影響

4 討論

幽門結(jié)扎型胃潰瘍模型大鼠因幽門被結(jié)扎而出現(xiàn)胃腔內(nèi)胃液增加，胃內(nèi)pH值下降，致使胃黏膜攻擊因子增強(qiáng)，防御作用減弱，從而導(dǎo)致胃潰瘍的產(chǎn)生。本實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，良附丸對幽門結(jié)扎型大鼠胃潰瘍有防治作用，因此該模型所致胃潰瘍可能類似于中醫(yī)學(xué)中“氣滯型胃脘痛”范疇，良附丸對該模型胃潰瘍有效，推測這可能與良附丸具有行氣疏肝作用有關(guān)。

束縛-水浸應(yīng)激型胃潰瘍模型是以束縛加寒冷刺激的應(yīng)激手段造成模型大鼠胃黏膜的急性損傷，從胃黏膜損傷的形態(tài)及程度上來看，此種模型大鼠胃潰瘍與人類的慢性胃潰瘍相似。從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)角度，束縛-水浸應(yīng)激法引起胃潰瘍的發(fā)病機(jī)制可能與胃黏膜缺血及胃腔內(nèi)H+過量進(jìn)入胃黏膜內(nèi)有關(guān)。應(yīng)激時(shí)，兒茶酚胺含量增加促使血液重新分布，因此造成了胃黏膜缺血。黏膜缺血致使黏膜血流量減少和上皮細(xì)胞能量不足，二者均可導(dǎo)致碳酸氫鹽減少，既能使黏膜屏障功能減弱又不能中和過量的H+，因黏膜血流量降低，過量的H+也不能被血液及時(shí)帶走，從而胃黏膜內(nèi)pH值下降，造成黏膜損害。研究表明，束縛-水浸應(yīng)激型胃潰瘍的潰瘍程度與浸泡水溫和浸泡時(shí)間密切相關(guān)，即在動(dòng)物體質(zhì)耐受情況下，水溫越低，浸泡時(shí)間越長，則潰瘍程度越重，更有利于評價(jià)藥效[7]。本實(shí)驗(yàn)中良附丸對束縛-水浸應(yīng)激型胃潰瘍防治效果明顯，該胃潰瘍模型類似于中醫(yī)寒邪客胃型胃脘痛，其防治效果明顯可能與良附丸具有祛寒作用有關(guān)。

消炎痛型胃潰瘍模型屬于藥物引發(fā)型胃潰瘍模型。消炎痛為非甾體抗炎藥，是一種強(qiáng)環(huán)氧化酶抑制劑,能選擇性抑制COX-1和COX-2，從而降低炎癥介質(zhì)前列腺素(PG)的合成，達(dá)到抗炎、止痛和解熱等作用，但消炎痛所引起的胃腸道不良反應(yīng)亦十分明顯[8]。前列腺素對胃黏膜的保護(hù)作用可概括為增加血流量、加快上皮細(xì)胞增殖、促進(jìn)黏液生成。消炎痛引起胃潰瘍的作用機(jī)制為抑制前列腺素合成，阻斷前列腺素對胃黏膜的保護(hù)作用，使黏膜屏障作用減弱，同時(shí)黏膜攻擊因子增強(qiáng)而發(fā)生潰瘍。本實(shí)驗(yàn)中良附丸對消炎痛型胃潰瘍模型大鼠的療效不明顯，且對潰瘍有加重表現(xiàn)，這可能是由于大鼠內(nèi)源性前列腺素減少，減弱了黏膜的抵抗力而增強(qiáng)了黏膜的攻擊因素，致使黏膜功能紊亂，再予以良附丸行氣疏肝，祛寒止痛之品，則不利于潰瘍的愈合。

醋酸涂抹型胃潰瘍模型是以具有強(qiáng)腐蝕性的冰醋酸直接接觸胃壁漿膜面，以腐蝕胃壁各層，導(dǎo)致胃組織缺血壞死，最終脫落形成潰瘍，從潰瘍的形態(tài)及損傷程度上看其特點(diǎn)類似于人類胃潰瘍。本法是目前最常用的實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍的造模方法。本實(shí)驗(yàn)中良附丸對醋酸涂抹型胃潰瘍模型大鼠治療效果不佳，主要是該模型類似于中醫(yī)胃熱型胃脘痛，良附丸具有的散寒作用與其病機(jī)相悖有關(guān)。

故本實(shí)驗(yàn)中，良附丸對幽門結(jié)扎型和束縛-水浸應(yīng)激型胃潰瘍均有一定的防治作用，但對水浸應(yīng)激型胃潰瘍的療效最好。