伍 芳 胡振平 謝遠(yuǎn)見 唐昌敏 廖家權(quán)

（湖北省恩施土家族苗族自治州中心醫(yī)院，湖北 恩施 445000）

腦卒中是臨床較為常見疾病，是腦局部血液循環(huán)出現(xiàn)障礙造成神經(jīng)功能受損的綜合征，其癥狀至少持續(xù)24 h以上。隨著科學(xué)技術(shù)和醫(yī)學(xué)水平不斷發(fā)展，臨床腦卒中患者生存率有了顯著提高，但約有70%左右患者會(huì)發(fā)生不同程度功能障礙，其中運(yùn)動(dòng)障礙是影響患者重返社會(huì)與獨(dú)立生活的主要功能障礙，這主要是由患者腦卒中后癱瘓肢體痙攣所引發(fā)的［1-2］。γ-氨基丁酸 （GABA）為中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)主要抑制性的神經(jīng)遞質(zhì)，存在脊髓與腦等神經(jīng)組織內(nèi)。中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損所發(fā)生的肢體痙攣如腦卒中及兒童腦癱等都會(huì)致使其腦脊液內(nèi)GABA含量降低，這說明抑制性遞質(zhì)GABA含量異常與上運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元受損后肌張力升高有緊密聯(lián)系［3-4］。因此，本文通過分析電針療法對(duì)缺血性腦卒中大鼠肢體肌張力增高的抑制作用及對(duì)中樞系統(tǒng)GABA能中間神經(jīng)元表達(dá)的影響，為臨床患者治療提供一些實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取由本院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的健康雄性SD大鼠30只，6周齡，體質(zhì)量180～220 g，平均（195.27±15.72） g，飼養(yǎng)大鼠室內(nèi)溫度 23～26 ℃，濕度40%～60%，光照周期為 12 h∶12 h，適應(yīng)性喂養(yǎng) 1周后開始實(shí)驗(yàn)。

1.2 試藥及儀器 1）試劑及藥物：微白蛋白抗體（由北京博奧森生物技術(shù)公司生產(chǎn)，批號(hào)：bs-1375R）、水合氯醛（規(guī)格：250 mg/瓶，由天津科密歐化學(xué)試劑公司生產(chǎn)）、鈣結(jié)合蛋白D-28K抗體（由武漢博士德生物技術(shù)公司生產(chǎn)，批號(hào)：BM1527）、呋塞米注射液（規(guī)格：2 mL∶20 mg×10支，由太極集團(tuán)西南藥業(yè)公司生產(chǎn)）、PBS磷酸鹽緩沖液（由北京中杉金橋生物公司生產(chǎn)，批號(hào)：20171015）、硼酸慶大霉素注射液（規(guī)格：2 mL∶8 萬U×10支，由天津藥業(yè)焦作公司生產(chǎn)）。2）儀器：四道生理記錄儀 （型號(hào)：BL-420E，由成都泰盟科技公司生產(chǎn)）、電子計(jì)重稱（型號(hào)：ACS-3-JZ，由山西太原航空工業(yè)部太行儀表廠生產(chǎn)）、病理組織漂烘儀（型號(hào)：PHYШ，由常州中威醫(yī)療儀器廠生產(chǎn)）、多通道電針儀（型號(hào)：G6805-2，由青島鑫升實(shí)業(yè)公司生產(chǎn)）。

1.3 造模與分組 按照隨機(jī)數(shù)字表法將30只大鼠分為觀察組與對(duì)照組各15只。兩組大鼠依據(jù)趙浩等［5］改良Zea longa等線栓法制備大鼠右側(cè)大腦動(dòng)脈阻塞（MCAO）模型，手術(shù)前12 h禁食，腹腔注射10%水合氯醛（劑量3 mL/kg）麻醉，仰臥固定在手術(shù)臺(tái)上，常規(guī)消毒。沿頸部正中切口，剪開皮膚及淺筋膜，分離肩胛舌骨肌、二腹肌及胸鎖乳突肌間肌間隙，暴露、分離右側(cè)迷走神經(jīng)與頸總動(dòng)脈，再分別暴露頸內(nèi)動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈與頸總動(dòng)脈分叉處，結(jié)扎頸總動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈，距離頸總動(dòng)脈分叉的膨大位置取5 mm切口，栓線插入到頸內(nèi)動(dòng)脈，在深度20 mm左右感覺有阻力時(shí)停止，而后把栓線和頸總動(dòng)脈遠(yuǎn)心端一起結(jié)扎，縫合切口。大鼠手術(shù)后連續(xù)3 d在腹腔內(nèi)注入2萬U慶大霉素，手術(shù)后注入速尿（劑量為0.1 mg/kg），預(yù)防腦水腫。造模成功標(biāo)準(zhǔn)：大鼠蘇醒后，依據(jù)Zea Longa行神經(jīng)功能評(píng)分，術(shù)后3 d使用改良Ashworth肌張力準(zhǔn)則判別其肌張力有無異常，大鼠神經(jīng)功能得分在1~3分，肌張力在1級(jí)以上為成功造模。

1.4 干預(yù)方法 依據(jù)李忠仁《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》［6］取穴，選取患側(cè)照海、申脈，后肢內(nèi)踝下方1 mm為照海，直刺1.5 mm；后肢外踝正下方凹陷位置為申脈，直刺0.5 mm。使用G6805多通路電針儀，波寬為0.3 ms、頻率100 Hz行持續(xù)波刺激，輸入電流調(diào)整，強(qiáng)度為肢體肌肉發(fā)生有節(jié)律收縮。觀察組大鼠在造模后第3日開始行電針治療，每次30 min，每日1次，共進(jìn)行6 d。對(duì)照組大鼠未進(jìn)行任何干預(yù)。

1.5 觀察指標(biāo) 1）兩組大鼠造模后1 d及治療后9 d采用神經(jīng)受損程度評(píng)分（NSS）［7］，包含異常運(yùn)動(dòng)、運(yùn)動(dòng)功能、平衡與反射缺失、感覺功能4部分，共計(jì)18分，大鼠得分越高說明其損傷越嚴(yán)重。2）觀察治療前后大鼠電生理描記肌張力狀況。腹腔注射劑量為2.5 mL/kg的10%水合氯醛全身麻醉，BL-420E型四道生理記錄儀檢測(cè)間接肌張力，一端電極插入大鼠左后肢股四頭肌中，另一端插入大鼠尾部，在大鼠左后肢下端系一根低順應(yīng)性棉線，棉線經(jīng)過張力傳感器和BL-420E型四道生理記錄儀連接。給予0.5 g后負(fù)荷，定時(shí)對(duì)股四頭肌進(jìn)行刺激（時(shí)間30 s，刺激量3 mA），經(jīng)過記錄儀記錄電刺激左后肢股四頭肌所形成的電信號(hào)，間接反映大鼠肌張力的變化。3）治療6 d后將大鼠斷頸處死，選取腦干及脊髓腰、頸膨大部位，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片厚度為4 m，免疫組化檢測(cè)大鼠微白蛋白（PV）、鈣結(jié)合蛋白D-28K（CB），使用Motic Images Advanced分析軟件，檢測(cè)其積分光密度數(shù)值。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組治療前后大鼠NSS評(píng)分及電生理描記肌張力比較 見表1。治療后觀察組大鼠NSS評(píng)分較對(duì)照組顯著降低，電生理描記肌張力較對(duì)照組顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 兩組大鼠不同部位CB表達(dá)積分光密度值比較見表2。治療后觀察組大鼠腦干、頸膨大及腰膨大部位CB表達(dá)積分密度值均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 兩組治療前后大鼠NSS評(píng)分及電生理描記肌張力比較（±s）

表1 兩組治療前后大鼠NSS評(píng)分及電生理描記肌張力比較（±s）

與本組治療前比較，*P＜0.05；與對(duì)照組治療后比較，△P＜0.05。

組 別 時(shí) 間 NSS評(píng)分 電生理描記肌張力觀察組 治療前 10.03±1.25 4.08±0.57（n＝15） 治療后 5.20±1.05* 7.16±0.68*△對(duì)照組 治療前 9.92±1.17 4.02±0.52（n＝15） 治療后 7.38±1.09* 4.13±0.63

表2 兩組治療后大鼠不同部位CB表達(dá)積分光密度值比較（±s）

表2 兩組治療后大鼠不同部位CB表達(dá)積分光密度值比較（±s）

與對(duì)照組比較，△P＜0.05

組 別 頸膨大部位 腰膨大部位觀察組 9.87±1.40△ 4.73±1.33△對(duì)照組 4.79±1.37 2.41±1.29 n 腦干部位15 8.27±1.25△15 4.57±1.24

2.3 兩組大鼠不同部位PV表達(dá)積分光密度值比較

見表3。治療后觀察組大鼠腦干、頸膨大及腰膨大部位PV表達(dá)積分密度值均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表3 兩組大鼠不同部位PV表達(dá)積分光密度值比較（±s）

表3 兩組大鼠不同部位PV表達(dá)積分光密度值比較（±s）

組 別 頸膨大部位 腰膨大部位觀察組 4.95±0.23△ 7.02±0.53△對(duì)照組 1.24±0.25 2.48±0.52 n 腦干部位15 5.81±0.42△15 1.10±0.39

3 討 論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)腦卒中肢體痙攣相關(guān)機(jī)制有3種，即神經(jīng)遞質(zhì)論、中樞興奮與抑制作用論和上下運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元論。神經(jīng)遞質(zhì)論認(rèn)為腦卒中后痙攣遲緩情況和GABA、乙酰膽堿有緊密聯(lián)系，GABA和乙酰膽堿為抑制性和興奮性神經(jīng)介質(zhì)［8-10］。腦卒中后其興奮性遞質(zhì)增大，抑制性遞質(zhì)變少，機(jī)體高級(jí)中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)抑制與興奮性遞質(zhì)平衡被破壞，上位中樞失去了控制下位中樞的隨意運(yùn)功能力，進(jìn)而出現(xiàn)低位中樞控制痙攣等異常運(yùn)動(dòng)模式［11-12］。中醫(yī)理論下，患者中風(fēng)后肢體痙攣機(jī)制包含兩個(gè)方面，一是痙攣發(fā)病位置在經(jīng)筋，患者經(jīng)脈不通，體內(nèi)氣血的運(yùn)行失調(diào)，造成經(jīng)筋失去養(yǎng)護(hù)，經(jīng)筋攣縮為痙攣主要因素；二是由于機(jī)體左右陰陽失調(diào)，也是造成腦卒中后肢體痙攣的因素［13］。

中醫(yī)認(rèn)為機(jī)體陰陽失去平衡，蹺脈能力不正常是造成腦卒中肢體痙攣的因素。陰陽蹺脈病就是陰陽緩急的失調(diào)，中風(fēng)以后下肢陽蹺之病，會(huì)出現(xiàn)肢體內(nèi)側(cè)拘急，外側(cè)拘攣為蹺脈，即導(dǎo)致中風(fēng)后肢體出現(xiàn)痙攣［14］。《針灸大成-八脈圖并治癥穴》內(nèi)記載了選取申脈，再取各穴來治療四肢麻痹不仁、中風(fēng)偏枯及半身癱瘓等疾病，申脈是八脈的交會(huì)穴，能夠治療陽蹺脈之病癥［15］。在電針治療參數(shù)選擇上學(xué)者們有不同觀點(diǎn)，部分專家主張低頻刺激，可對(duì)肌張力升高抑制，進(jìn)而緩解患者痙攣狀況；但多數(shù)學(xué)者認(rèn)為要以高頻率刺激為主，較高電刺激能夠?qū)顾枨敖羌?xì)胞興奮性產(chǎn)生抑制，進(jìn)而起到緩解痙攣影響［16］。本文研究顯示，治療后觀察組大鼠NSS評(píng)分較治療前、對(duì)照組顯著降低，電生理描記肌張力較治療前、對(duì)照組顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明電針治療可加速病癥周邊水腫的消退，建立側(cè)支循環(huán)，使其癥狀得以改善。GABA能神經(jīng)元由含3種鈣結(jié)合蛋白亞群構(gòu)成，主要為CB、PV和鈣視網(wǎng)膜蛋白（CR）中間神經(jīng)元，其動(dòng)態(tài)改變表示GABA能中間神經(jīng)元改變情況。本文研究顯示，治療后觀察組大鼠腦干、頸膨大及腰膨大部位CB、PV表達(dá)積分密度值均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明電針通過對(duì)GABA能中間神經(jīng)元亞群表達(dá)進(jìn)行調(diào)節(jié)來恢復(fù)腦卒中肢體痙攣狀況。

綜上所述，電針治療可提升缺血性腦卒中大鼠鈣結(jié)合蛋白PV、CD表達(dá)，緩解其肢體痙攣狀況。