田長城， 黃 飛， 蘇真真， 潘魯青， 李 赟

(海水養(yǎng)殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(中國海洋大學(xué))，山東 青島266003)

1 材料與方法

1.1 菌種

實(shí)驗(yàn)菌株分離自凡納濱對蝦養(yǎng)殖池，為實(shí)驗(yàn)室保藏菌種，編號為8D。通過生理生化特性及16s rDNA同源性分析，鑒定該菌株為麥?zhǔn)辖惶鎲伟?Alteromonasmacleodii)。活體菌株與25%甘油混合在-80℃保存。

1.2 培養(yǎng)基成分及不同氮源組合

用于培養(yǎng)分離菌株8D的培養(yǎng)基成分包括，K2HPO40.5 g，MgSO4·7H2O 0.25 g，F(xiàn)ePO4·4H2O 0.01 g，0.45 μm濾膜過濾海水(鹽度30)1 000 mL，pH=7.5。

為比較不同氮源對菌株8D氮去除效率的影響，本實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基組合如表1所示。實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純。

表1 不同培養(yǎng)基中氮源、碳源添加量

1.3 菌株的活化及接種培養(yǎng)

將菌株接種到2216E液體培養(yǎng)基中，28 ℃、150 r/min振蕩培養(yǎng)36 h，離心收集菌株并用無菌海水洗滌3次。用TA-2XJ型細(xì)菌濁度計(北京天安聯(lián)合科技有限公司，北京)測定菌株密度并用無菌海水調(diào)整至6×108CFU/mL，隨后以1%的接種量接入盛有高溫滅菌后的100 mL海水培養(yǎng)基的250 mL錐形瓶中。每種培養(yǎng)基重復(fù)3次，試驗(yàn)期間的培養(yǎng)條件均為28 ℃，120 r/min振蕩培養(yǎng)48 h。

1.4 菌體密度、培養(yǎng)基中3種無機(jī)氮化合物含量及pH測定

每隔8 h測定不同實(shí)驗(yàn)組菌體密度及培養(yǎng)基3種無機(jī)氮的含量。菌體密度通過測定菌體培養(yǎng)基吸光度(OD600)間接獲得。培養(yǎng)基吸光度(OD600)采用酶標(biāo)儀(Multiskan GO，Thermo)測定。

在培養(yǎng)初始和結(jié)束時用pH計(STARTER 3100，奧豪斯(上海)有限公司，中國)測定培養(yǎng)基的pH。

1.5 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析

上述實(shí)驗(yàn)，每組重復(fù)3次，所有數(shù)據(jù)均使用Excel 2016和SPSS 19.0軟件進(jìn)行計算、作圖和統(tǒng)計分析。采用單因素方差分析(One-Way ANVOA)和Duncan多重比較的方法對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，差異顯著水平以P< 0.05為衡量標(biāo)準(zhǔn)。所有數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)的形式表示。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 單一氮源培養(yǎng)基中3種氮含量及分析

圖1 單一和混合氮源培養(yǎng)基中菌株A. macleodii 8D的生長和培養(yǎng)基pH變化Fig.1 The bacterial growth and pH change of strain A. macleodii 8D in sole and mixed nitrogen source media

2.2 兩種氮源共存培養(yǎng)基中三種氮含量及分析

圖2 單一氮源和混合氮源培養(yǎng)基中A. macleodii 8D的氮去除特征Fig. 2 Characteristics of nitrogen removal by A. macleodii 8D in sole and mixed nitrogen source media

2.3 三種氮源共存培養(yǎng)基中三種氮含量及分析

2.4 多氮源共存對8D氮去除效率的影響

(圖中柱上不同的字母表示相互之間差異顯著(P< 0.05)。Data with different letters at same column mean significant difference with each other atP< 0.05.)

3 討論

3.1 關(guān)于菌株8D對不同氮源的利用

3.2 關(guān)于多氮源共存對菌株8D氮去除效率的影響

從不同氮源組合已有的研究結(jié)果可以看到，菌株對某一氮源的利用不僅與菌種有關(guān)，也與氮源組合有關(guān)。由于在城市污水以及養(yǎng)殖水體的生物凈化過程中，往往面對的水體不僅含有有機(jī)氮源，還含有形式多樣的無機(jī)氮源。為了更好的利用生物方法去除水體的無機(jī)氮，需要對分離菌株在不同氮源及氮源組合條件下的氮去除能力進(jìn)行全面分析。本研究結(jié)果說明8D菌株對多種形式的無機(jī)氮源均具有突出的去除能力，是生物去除養(yǎng)殖水體多種氮源的優(yōu)勢候選菌株。

4 結(jié)語