房艷紅，張曉樂，劉緒艷，張學軍，李 毅，袁海紅

(天津市武清區(qū)醫(yī)院，天津 301700)

目前對于肺癌發(fā)生、發(fā)展、侵襲轉移及預后相關因素的研究較多。近年來隨著分子生物學研究的不斷進步，越來越多的蛋白因子被發(fā)現(xiàn)并且被證實其表達水平與患者的臨床病理特征及預后存在相關性，如表皮生長因子、血管內皮生長因子等。近年來研究發(fā)現(xiàn)Fascin-1及LRIG1蛋白在多種實體腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達，如肺癌、腸癌、肝癌、前列腺癌等，并與患者的臨床病理特征存在一定的關系[1-3]。但關于Fascin-1及LRIG1蛋白在非小細胞肺癌(NSCLC)患者癌組織、癌旁組織中的陽性表達情況是否存在差異，其與患者臨床特征如年齡、性別、分期、腫瘤分級和轉移等相關性的研究報道較少。因此，本文回顧性分析了98例NSCLC患者的臨床資料，探討Fascin-1及LRIG1蛋白在癌/癌旁組織中的表達情況及其與患者臨床特征的關系，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取我院和天津市胸科醫(yī)院2009年～2015年手術治療的非小細胞肺癌患者為研究對象。納入標準：①術后組織病理學標本確診為非小細胞肺癌患者；②患者術前未接受任何新輔助放療、化療或生物治療；③術后患者有相對完整的隨訪資料；④患者組織標本經其家屬或本人同意并簽署知情同意書；⑤經本院醫(yī)學倫理委員會討論通過，同意實施該研究。排除標準：①其他組織病理類型肺癌患者；②術前接受新輔助治療者；③合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤者；④術后隨訪數(shù)據(jù)或臨床數(shù)據(jù)不完整者。

1.2儀器及試劑：石蠟切片機(購自德國徠卡公司)、顯微鏡(購自日本奧林巴斯公司)、電熱恒溫箱(上海榮珂檢測儀器有限公司生產)、微波爐(購自革格蘭仕公司)，低速離心機(購自美國貝克曼公司)。鼠抗人Fascin-1單克隆抗體(SPM133)，擬購自美國Santa Cruz公司；鼠抗人LRIG1單克隆抗體(Ab36704)，擬購自英國Abcam公司；即用型免疫組織化學法試劑盒，擬購自生工生物工程(上海)股份有限公司；DAB顯示試劑盒，擬購自北京索萊寶科技有限公司。二抗(羊抗兔IgG)，擬購自美國Santa Cruz公司。

1.3LRIG1及Fascin-1蛋白表達水平檢測：石蠟切片脫蠟水化，蒸餾水浸泡沖洗后行抗原修復，PBS沖洗后滴加動物非免疫血清，室溫孵育10 min后傾去。滴加一抗，室溫孵育60 min，陰性對照用PBS代替。PBS沖洗后，滴加生物素標記的二抗，室溫孵育10 min。PBS沖洗干凈后滴加鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶溶液，室溫孵育30 min。PBS沖洗，DAB顯色劑顯色，中性樹膠封片[4-5]。

1.4陽性判斷標準：采用雙盲法對染色結果進行判定，在400倍顯微鏡下每張載玻片計數(shù)10個視野，計數(shù)每個視野中細胞總數(shù)及Fascin-1、 LRIG1陽性的細胞數(shù)。陽性細胞的百分比判斷標準：0%～5%之間為陰性表達；6%～25%為弱陽性；26%～75%為中度陽性；>76%為強陽性，弱陽性、中度陽性和強陽性定義為陽性結果。

2 結果

2.1LRIG1及Fascin-1蛋白表達情況：LRIG1蛋白陽性表達主要見于肺癌細胞核，呈棕褐色顆粒染色，均勻分布(見圖1)；Fascin-1蛋白主要表達與肺癌細胞胞質和細胞膜，呈棕黃色顆粒狀，彌漫分布于細胞膜及細胞包漿內(見圖1)。

圖1 Fascin-1和LRIG1在NSCLC患者癌中的表達：① Fascin-1陰性;②Fascin-1陽性;③LRIG1陰性;④LRIG1陽性

2.2癌組織與癌旁組織中LRIG1及Fascin-1蛋白陽性率比較：LRIG1及Fascin-1蛋白在NSCLC患者癌組織中的陽性表達率分別為56.12%和72.45%,而在癌旁組織中的陽性表達率分別為80.61%和16.33%,LRIG1及Fascin-1蛋白在NSCLC患者癌組織/癌旁組織中陽性表達率差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),表1。

表1NSCLC患者癌組織/癌旁組織中LRIG1及Fascin-1蛋白陽性率比較[例(%)]

蛋白癌組織(n=98) 陽性 陰性 癌旁組織(n=98) 陽性 陰性 LRIG155(56.12)①45(43.88)79(80.61)19(19.39)Fascin-171(72.45)①27(27.55)16(16.33)82(83.67)

注：與癌旁組織陽性表達比較，①P<0.05

2.3LRIG1及Fascin-1蛋白表達與NSCLC患者臨床病理特征關系：LRIG1蛋白在癌組織中的陽性表達與NSCLC患者的臨床分期、病理分型及縱膈淋巴結轉移有關(P<0.05)；Fascin-1蛋白在癌組織中的陽性表達與NSCLC患者的臨床分期、腫瘤大小和縱膈淋巴結轉移均有關(P<0.05)。詳見表2。

表2LRIG1及Fascin-1蛋白表達與NSCLC患者臨床病理特征關系[例(%)]

項目例數(shù)Fascin-1陽性(n=71)P值LRIG1陽性(n=55)P值性別 男性6044(61.97)>0.0535(63.64)>0.05 女性3827(38.03)20(36.36)年齡>0.05>0.05 ≤60歲3626(36.62)21(38.18) >60歲6245(63.38)34(61.82)臨床分期<0.05<0.05 Ⅰ/Ⅱ期6952(73.24)44(80.00) ⅢA期2919(26.76)11(20.00)腫瘤大小<0.05>0.05 ≤5 cm7055(77.46)38(69.09) >5 cm2816(21.54)17(30.91)病理類型>0.05<0.05 腺癌5036(50.70)26(47.27) 鱗癌3929(40.85)25(45.45) 其他96(8.45)4(7.27)病理分級>0.05>0.05 高分化3926(36.62)22(40.00) 中分化3224(33.80)21(38.18) 低分化2721(29.58)12(21.82)胸水>0.05>0.05 無8060(84.51)45(81.82) 有1811(15.49)10(18.18)縱膈結轉移>0.05<0.05 無3121(29.58)19(34.55) 有6750(70.42)36(65.45)

3 討論

近年來，隨著我國人口老齡化的加劇及吸煙人數(shù)的上升，肺癌的發(fā)病率呈現(xiàn)出明顯的上升趨勢。肺癌已成為目前發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤[6-7]。在我國，每年因肺癌死亡的人數(shù)高達數(shù)十萬人，2008年衛(wèi)生部公布的《居民死亡原因調查報告》顯示，肺癌已成為我國發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一。但肺癌的發(fā)病原因目前仍未完全明了，大多數(shù)研究認為與患者的遺傳背景和后天環(huán)境因素有關。遺傳背景包括惡性腫瘤家族史、某些代謝酶基因多態(tài)性等[8]，后天因素主要與吸煙、環(huán)境污染等因素有關。但肺癌發(fā)生的機制十分復雜，其確切發(fā)病分子機理仍不完全明了。因此，探尋肺癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉移的分子機制，為肺癌進一步治療提供新的思路和新的靶點成為研究熱點[9]。

關于LRIG1及Fascin-1在非小細胞肺癌中的共表達及其臨床意義的文獻報道較少，上述兩個蛋白因子表達水平與患者臨床病理特征及預后的關系并不十分明確。因此，本研究采用免疫組織化學SP法對非小細胞肺癌患者癌組織和癌旁肺組織中LRIG1及Fascin-1的表達水平進行檢測，并探討其表達與患者臨床病理特征及預后的關系。研究發(fā)現(xiàn)，LRIG1及Fascin-1蛋白在NSCLC患者癌組織/癌旁組織中陽性表達差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；LRIG1蛋白在癌組織中的陽性表達與NSCLC患者的臨床分期、病理分型和縱膈淋巴結轉移均有關(P<0.05)；Fascin-1蛋白在癌組織中的陽性表達與NSCLC患者的臨床分期、腫瘤大小和縱膈淋巴結轉移均有關(P<0.05)。研究認為，LRIG1及Fascin-1蛋白在非小細胞肺癌(NSCLC)患者癌組織/癌旁組織中存在差異表達，并與患者的臨床分期、腫瘤大小及縱膈淋巴結轉移存在相關性。

但該研究納入的患者例數(shù)較少，統(tǒng)計學效能不高，下一步應加大樣本量進行進一步的研究，明確LRIG1及Fascin-1蛋白在NSCLC發(fā)生發(fā)展中的作用及其分子機制，為臨床NSCLC診治提供更為可靠的依據(jù)。