周碩 唐鵬 王赟姣 王亮 王德強(qiáng)

摘 要 納米孔技術(shù)作為一種新型的分析檢測方法，被廣泛應(yīng)用于核酸測序、蛋白質(zhì)/多肽分析以及病毒、微生物等生物大分子和金屬離子的檢測。隨著人們對公共安全和食品藥品安全等問題的日益關(guān)注，對有毒物質(zhì)的檢測也提出了更高的要求。鑒于納米孔分析方法具有高靈敏度和高選擇性等優(yōu)點(diǎn)，很多研究團(tuán)隊(duì)將其應(yīng)用于有毒物質(zhì)的檢測，進(jìn)行了很多的研究工作。本文針對近年來納米孔技術(shù)在有毒物質(zhì)檢測中的應(yīng)用進(jìn)行綜述，并對其應(yīng)用前景進(jìn)行了展望。

關(guān)鍵詞 納米孔技術(shù)；單分子檢測；有毒物質(zhì)；靈敏度；選擇性；評述

1 引 言

納米孔分析方法是一種基于電脈沖技術(shù)的新型分析檢測技術(shù)，通過分析一定電壓下分析物分子穿過納米孔道產(chǎn)生的阻塞電流信號(hào)實(shí)現(xiàn)對分析物的檢測[1]。不同的分析物通過納米孔時(shí)所產(chǎn)生的阻塞電流信號(hào)將表現(xiàn)出不同的信號(hào)特征（幅值，持續(xù)時(shí)間等）。而當(dāng)納米級(jí)孔道的孔徑大小在1～30 nm范圍內(nèi)時(shí)，每次只能容許一個(gè)分子通過，因此，產(chǎn)生的阻塞電流信號(hào)的特征與過孔分子的構(gòu)象、大小、長度、電荷等固有屬性一一對應(yīng)。通過分析這些過孔電流信號(hào)特征，就可以揭示分析物的結(jié)構(gòu)和組成等重要信息，從而實(shí)現(xiàn)對待測物的定性與定量的超靈敏檢測。目前，納米孔技術(shù)主要應(yīng)用于兩大領(lǐng)域，即測序領(lǐng)域和非測序的單分子分析檢測領(lǐng)域。前者主要包括DNA測序[2～10]和蛋白質(zhì)測序[11～14]，已有多篇綜述報(bào)道[15～20]；后者則包括各種非測序的單分子鑒定方面的應(yīng)用，如多肽的二級(jí)結(jié)構(gòu)鑒定[21～26]以及蛋白和適配體等其它單分子構(gòu)象研究[27-28]，以及作為新型生物傳感器分析方法的應(yīng)用，如核苷酸鏈中單個(gè)堿基差異的識(shí)別[29，30]、癌癥標(biāo)記物的檢測[31]、藥物篩選[32～34]、金屬離子檢測[35～38]等，Yang等[39]曾針對納米孔技術(shù)在非基因測序方面的應(yīng)用做過詳細(xì)介紹。

迄今為止，納米孔技術(shù)僅有20余年的發(fā)展歷史，但已在疾病診斷[40～44]、食品安全[45，46]、環(huán)境監(jiān)測[47～49]和公共安全[50～55]等領(lǐng)域取得了一系列突破性進(jìn)展。隨著近年來公眾對公共安全和食品藥品安全的要求日益提高，研究者就如何利用納米孔實(shí)現(xiàn)對有毒物質(zhì)的快速高效檢測做了很多工作。本文將對近年來納米孔技術(shù)在有毒物質(zhì)檢測中的應(yīng)用進(jìn)行綜述，以期為未來納米孔商業(yè)化產(chǎn)品在公共安全、藥品安全及毒品檢查等方面的應(yīng)用推廣提供技術(shù)參考。

2 納米孔技術(shù)在公共安全中的應(yīng)用

2.1 神經(jīng)毒劑的檢測

神經(jīng)毒劑是一類以神經(jīng)組織為靶標(biāo)的有毒物質(zhì)，對人體神經(jīng)系統(tǒng)具有巨大的破壞力，常被用于殺傷性化學(xué)武器研制。目前， 主流的神經(jīng)毒劑檢測方法（如高效液相色譜和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等）靈敏度較高，但需復(fù)雜的檢測儀器，因此無法實(shí)現(xiàn)神經(jīng)毒劑的現(xiàn)場快速檢測。Wang等[56]利用納米孔技術(shù)快速、簡便的優(yōu)勢，設(shè)計(jì)了一種鑒定神經(jīng)毒劑索曼和環(huán)沙林的新方法。 這種方法借助神經(jīng)毒劑易水解的特性，通過對其水解產(chǎn)物與修飾納米孔相互作用產(chǎn)生的電流信號(hào)的觀測，間接對神經(jīng)毒劑進(jìn)行定性與定量的分析。神經(jīng)毒劑索曼和環(huán)沙林的主要水解產(chǎn)物通常以小分子CMPA（Cyclohexyl methylphosphonic acid）和PMPA（Pinacolyl methylphosphonate）形式存在，它們通過納米孔時(shí)不易產(chǎn)生阻塞電流信號(hào)。研究者以β環(huán)糊精（β-Cyclodextrin， β-CD）嵌入重組突變后的α-溶血素納米孔中，縮小納米孔孔徑，從而促使CMPA和PMPA在納米孔中與 β-CD發(fā)生相互作用，誘導(dǎo)阻塞電流變化，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對索曼和環(huán)沙林的有效和靈敏的檢測。如圖1所示， β-CD（紅色）與α-溶血素納米孔結(jié)合后，會(huì)使納米孔阻塞而產(chǎn)生其特征阻塞電流；隨著在納米孔反應(yīng)體系中加入CMPA和PMPA，它們會(huì)與 β-CD發(fā)生相互作用，從而在β-CD特征阻塞電流信號(hào)的基礎(chǔ)上產(chǎn)生新的電流信號(hào)。此外，由于CMPA和PMPA的結(jié)構(gòu)不同，二者產(chǎn)生的阻塞電流信號(hào)也不同，因此可以實(shí)現(xiàn)兩者的同時(shí)鑒定分析。這種方法對神經(jīng)毒劑索曼和環(huán)沙林水解產(chǎn)物CMPA和PMPA的檢出限分別可以達(dá)到0.02和0.01 mg/L。

nce of 40 μmol/L β-CD[56].

2.2 炭疽桿菌的檢測

炭疽毒素（Anthrax toxin）是一種由炭疽桿菌產(chǎn)生的致命毒素，分為水腫毒素和致死毒素，可引發(fā)一種人畜共患的急性傳染病，從而引起人畜各臟器和組織的出血性浸潤、水腫和壞死[57，58]。炭疽桿菌會(huì)形成“芽孢”，其生命力極其頑強(qiáng)，能抵抗各種殺滅手段，而且壽命極長，深埋、真空封存幾十年后仍然具有很強(qiáng)的感染能力[59，60]。雖然現(xiàn)在醫(yī)學(xué)診斷和藥物治療等技術(shù)取得了突飛猛進(jìn)的發(fā)展，但是人類社會(huì)在面臨這種急性傳染病時(shí)，依然存在致命風(fēng)險(xiǎn)。以細(xì)胞培養(yǎng)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、酶聯(lián)免疫反應(yīng)為代表的傳統(tǒng)檢測手段，耗時(shí)長，且不適于現(xiàn)場的實(shí)時(shí)檢測環(huán)境，在危機(jī)爆發(fā)時(shí)，無法實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)的現(xiàn)場快速診斷，因此迫切需要開發(fā)一種便捷有效的檢測方法，對炭疽桿菌進(jìn)行分析和監(jiān)控。

2.2.1 炭疽致死毒素的檢測 Guan研究團(tuán)隊(duì)針對炭疽的檢測，提出了一種實(shí)時(shí)、快速、無需標(biāo)記的納米孔分析方法[50]。該方法以炭疽毒素的重要組成成分——炭疽致死毒素（Anthrax lethal factor，aLF）為研究對象，選擇致死毒素的特異性遺傳DNA片段為檢測樣本，通過分析DNA雙鏈雜化與解鏈在α-溶血素納米孔中產(chǎn)生的特異性電流變化，從而實(shí)現(xiàn)對炭疽致死毒素的有效檢測與鑒定（圖2）。他們的研究表明，單鏈DNA探針與炭疽特異性DNA片段（aLF）分別加入納米孔時(shí)，各自產(chǎn)生的阻塞電流無法區(qū)分，然而將二者的混合物加入納米孔體系后，由于堿基互補(bǔ)促使單鏈DNA探針與炭疽DNA雜化，雜化后的雙鏈DNA分子在通過納米孔時(shí)，在外加電壓和與納米孔相互作用的共同推動(dòng)下，會(huì)誘發(fā)雙鏈分子的解鏈行為，進(jìn)而生成一種完全不同的、可識(shí)別的電流信號(hào)，從而實(shí)現(xiàn)對炭疽致死毒素的檢測。該分析方法對炭疽致死毒素特異性DNA片段的檢測具有非常好的選擇性，可以區(qū)分單個(gè)堿基的突變。此方法在血清中的檢出限低于100 pmol/L。

2.2.2 炭疽孢子分泌物的納米孔分析 納米孔技術(shù)對炭疽的檢測，不僅可通過對其遺傳片段的分析實(shí)現(xiàn)，也可通過對其孢子分泌物吡啶二羧酸（Dipicolinic acid，DPA）的分析進(jìn)行， 可為炭疽感染的預(yù)防和控制提供更為有效的手段。但是，由于DPA分子太小，無法在納米孔中直接檢測。研究人員借鑒化學(xué)中經(jīng)典的反滴定法設(shè)計(jì)了一套全新的納米孔分析方法[51]。如圖3所示， Tb3+可以與配體二乙烯三胺五亞甲基膦酸（Diethylene triamine pentamethylphosphonic acid，DTPMPA）和DPA分別發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，生成相應(yīng)的絡(luò)合物，反應(yīng)前后納米孔中可以產(chǎn)生不同類型的可識(shí)別的電流變化，但由于DPA與Tb3+絡(luò)合力更強(qiáng)，當(dāng)檢測體系中存在DPA時(shí)，會(huì)導(dǎo)致電流信號(hào)由配體DTPMPA-Tb3+絡(luò)合物信號(hào)向配體DTPMPA信號(hào)的反向轉(zhuǎn)變，這種變化隨著DPA濃度的增加變得更為明顯。通過這種信號(hào)的反轉(zhuǎn)，可以實(shí)現(xiàn)對炭疽芽孢分泌物的有效鑒定。雖然這種方法的靈敏度（34.6 nmol/L）比熒光檢測法（2 nmol/L）低[61]，但該方法無需熒光標(biāo)記，實(shí)驗(yàn)操作更為簡單。此外，這也是首次將化學(xué)定量法中的反滴定法與納米孔技術(shù)相結(jié)合，為開拓新的分析檢測手段提供了全新思路。

2.3 肉毒素檢測

肉毒素（Bontulinum neurotoxin，BoNTs）是肉毒桿菌產(chǎn)生的分子神經(jīng)毒素，是已知毒素中毒性最強(qiáng)的生物毒素，致死量為1 ng/kg體重[62]。由于肉毒素可通過食物鏈傳播而危害人類安全，所以也被用作生化武器[63]。目前，在各種肉毒素種類（BoNTs A-G）中只有A、B、E和F對人類有毒害作用[64]。其毒害機(jī)理主要是抑制神經(jīng)末梢釋放乙酰膽堿，引起肌肉松弛麻痹，特別是引起呼吸肌麻痹而致死?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)上，肉毒桿菌神經(jīng)毒素作為一種蛋白分為重鏈和輕鏈，兩者之間由二硫鍵連接。重鏈分子量為100 kDa， 可以對神經(jīng)系統(tǒng)造成破壞；輕鏈分子量為50 kDa，可以從囊泡穿過進(jìn)入到細(xì)胞溶質(zhì)中，作為Zn2+誘導(dǎo)的肽鏈內(nèi)切酶特異性酶切SNARE蛋白復(fù)合體，從而妨礙胞吐作用和神經(jīng)傳遞素的釋放，進(jìn)而影響神經(jīng)系統(tǒng)功能[65]。因此，無論是從生化防護(hù)還是醫(yī)療診斷角度來考慮，都需要對肉毒桿菌神經(jīng)毒素進(jìn)行早期、快速的檢測。

納米孔技術(shù)作為一種新型的超靈敏的快捷檢測手段已經(jīng)被成功應(yīng)用于多肽和蛋白質(zhì)分析[66～70]。值得注意的是，納米孔可通過對酶切反應(yīng)中水解多肽的分析實(shí)現(xiàn)對蛋白酶功能的研究[43，71，72]。以肉毒素B（BoNTs B）為例（圖4），在Zn2+存在條件下，肉毒素B可以酶切神經(jīng)細(xì)胞突出蛋白（Synaptic protein sb2，1-93），剪切位點(diǎn)位于76～77位氨基酸之間，生成N端Lp-sb2（1-76）和C端sb2（77-93）兩個(gè)片段，因此，通過對兩個(gè)蛋白片段的納米孔過孔信號(hào)進(jìn)行分析，即可間接檢測肉毒素B[45]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，以酶切后的sb2（77-93）作為生物標(biāo)記物（Lp-sb2分子太大，不足以穿過納米孔產(chǎn)生特征電流信號(hào)），通過對其在納米孔中的過孔信號(hào)的分析，可以在幾分鐘內(nèi)檢測到低于500 pmol/L的有活性的肉毒素B，這種分析方法在血清樣本體系中效果良好。

3 納米孔技術(shù)在藥物安全與毒品檢測中的應(yīng)用

3.1 可卡因檢測

可卡因在醫(yī)學(xué)中被用于局部麻醉藥；同時(shí)，可卡因又是一種強(qiáng)烈的天然中樞興奮劑，會(huì)導(dǎo)致吸食用者變得情緒高漲，且容易產(chǎn)生藥物依賴上癮，被各國政府列為主要違禁藥品之一[73]。常見的可卡因檢測方法主要包括電泳法、色譜法和酶聯(lián)免疫吸附法等，這些方法操作繁瑣、成本高，無法進(jìn)行現(xiàn)場實(shí)時(shí)檢測。Rauf 等[74]提出了一種基于α-溶血素納米孔的檢測方法，無需化學(xué)標(biāo)記即可實(shí)現(xiàn)可卡因的快速、高靈敏分析，采用可卡因DNA適配體探針，該適配體由兩條堿基互補(bǔ)的DNA單鏈組成。當(dāng)適配體通過α-溶血素納米孔時(shí)， 由于孔道最窄處直徑（～1.4 nm）小于雙鏈DNA適配體（～2.2 nm）的直徑，雙鏈DNA在外部電壓推動(dòng)下，會(huì)與納米孔道發(fā)生相互作用而解鏈。這種解鏈行為會(huì)產(chǎn)生一種可識(shí)別的特異性電流信號(hào)。加入含有可卡因的樣品后，可卡因會(huì)與適配體中的單鏈A特異性結(jié)合，形成穩(wěn)定的Y型復(fù)合結(jié)構(gòu)，釋放出單鏈B，提取單鏈B通過納米孔產(chǎn)生的特征電流信號(hào)，就可以實(shí)現(xiàn)對可卡因的檢測（圖5）。

此外，在0.05～100 μmol/L濃度范圍內(nèi)，可卡因濃度與適配體B鏈產(chǎn)生的納米孔電流信號(hào)事件呈線性關(guān)系，因此可以通過檢測適配體B鏈產(chǎn)生的電流信號(hào)，推斷出與適配體特異性結(jié)合的可卡因的含量，從而定量檢測可卡因在樣品中的含量。該方法的檢測限可以低至50 nmol/L，且適用于復(fù)雜的生物體液樣本，例如在人類唾液和血清樣本中同樣具有高選擇性。其它研究團(tuán)隊(duì)也對納米孔技術(shù)檢測可卡因進(jìn)行過相關(guān)研究[75]。

3.2 四環(huán)素檢測

作為一種常見的抗生素，四環(huán)素（Tetracycline，Tet）在醫(yī)學(xué)中一直被廣泛應(yīng)用于抑菌、殺菌及霍亂、梅毒、瘧疾、瘟疫等的感染治療[76，77]。但四環(huán)素會(huì)導(dǎo)致肝損傷、維生素缺乏等多種不良反應(yīng)。此外，環(huán)境中的四環(huán)素殘留還會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，進(jìn)而威脅人類和動(dòng)物的健康。目前常用的四環(huán)素檢測方法包括酶聯(lián)免疫吸附法[78]、色譜法[79]等，這些傳統(tǒng)檢測方法具有較好的可靠性和穩(wěn)定性，但操作繁瑣、檢測周期長，無法滿足實(shí)時(shí)檢測分析的要求。

本研究組設(shè)計(jì)了一種用于四環(huán)素的快速鑒定的納米孔傳感器[33]，選用厚度10 nm的Si3N4為襯底的固態(tài)孔，其直徑為8～9 nm。由于四環(huán)素可以促使rtTA蛋白和DNA單鏈（TRE）相互結(jié)合形成復(fù)合體，因此通過分析不同四環(huán)素濃度下的復(fù)合體特征電流信號(hào)，即可實(shí)現(xiàn)對四環(huán)素的檢測。如圖6所示，在不加入四環(huán)素時(shí)，rtTA蛋白和DNA單鏈（TRE）的混合物在納米孔中只會(huì)引起較小的阻塞電流變化；加入四環(huán)素后，rtTA蛋白與DNA單鏈（TRE）結(jié)合生成的復(fù)合體會(huì)大量形成，且其特征電流信號(hào)數(shù)目隨四環(huán)素加入量的增加而增大。采用該方法還可研究四環(huán)素與DNA和蛋白之間的相互作用。

3.3 煙草花葉病毒檢測

納米孔不僅可用于DNA、蛋白質(zhì)、多肽、有機(jī)磷化合物等生物化學(xué)分子的檢測，還可用于病毒的篩查[41，50]。Wu等[55]利用直徑為30 nm的固態(tài)孔，結(jié)合郎之萬動(dòng)力學(xué)（Langevin dynamics），研究了煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）通過納米孔的動(dòng)力學(xué)過程。煙草花葉病毒通常作用于植物，是煙草花葉病等的病原體，其長度為300 nm，直徑18 nm[80]。由圖7可知，TMV通過納米孔時(shí)會(huì)產(chǎn)生3種主要的電流阻塞信號(hào)。Type A是一種常見的矩形信號(hào)，類似DNA的過孔信號(hào)；而Type B和Type C信號(hào)的開端有不規(guī)則的波動(dòng)，這是由于TMV在進(jìn)孔前會(huì)與納米孔發(fā)生相互作用，從而產(chǎn)生預(yù)過孔信號(hào)。這項(xiàng)研究體現(xiàn)了納米孔在病毒檢測應(yīng)用方面的潛力。

4 展 望

納米孔分析技術(shù)作為一種新的分析手段，具有操作簡便、快速、高靈敏、高特異性和高選擇性等優(yōu)勢。隨著以納米孔技術(shù)為核心的商業(yè)化產(chǎn)品的推出，該技術(shù)經(jīng)過不斷改進(jìn)，在檢測靈敏度、分析物選擇特異性和便攜性等方面日趨穩(wěn)定，可以相信納米孔作為一種新興的單分子檢測技術(shù)，未來將在測序領(lǐng)域和非測序的單分子檢測領(lǐng)域發(fā)揮巨大的作用。

但是，納米孔技術(shù)作為一種新型的納米傳感器用于實(shí)際應(yīng)用和推廣，還需解決納米孔通量低的問題。另外，納米孔技術(shù)對未知檢測物的定性分析是目前納米孔技術(shù)所面臨的難題，如測序領(lǐng)域中對未知序列的測定和單分子檢測領(lǐng)域中對未知成分的鑒定等。通過將微納加工、單分子操控、計(jì)算機(jī)模擬和生物信息學(xué)等技術(shù)相結(jié)合，掌握分子動(dòng)力學(xué)的理論研究方法，建立足夠的理論和研究模型，將有望解決上述難題。此外，將單分子熒光成像技術(shù)與納米孔電流信號(hào)相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)光電聯(lián)合檢測分析，從瞬時(shí)電流調(diào)制信號(hào)和熒光信號(hào)中提取相關(guān)的動(dòng)力學(xué)或物理參數(shù)，更有助于揭示分析物在納米孔中的分子行為，為單分子檢測技術(shù)的發(fā)展提供更為有力的支持。

References

1 Dekker C. Nat. Nanotechnol.， 2007， 2（4）： 209-215

2 Cao C， Ying Y L， Hu Z， Liao D F，Tian H， Long Y T. Nat. Nanotechnol.， 2016， 11（8）： 713

3 Ayub M， Stoddart D， Bayley H. ACS Nano， 2015， 9（8）： 7895-7903

4 Haque F， Li J， Wu H C， Liang X J， Guo P. Nano Today， 2013， 45（8）： 56-74

5 Cao C， Liao D F， Yu J， Tian H， Long Y T. Nat. Protoc.， 2017， 12（9）： 1901

6 Cao C， Yu J， Li M Y， Wang Y Q， Tian H， Long Y T. Small， 2017， 13（44）： 1702011

7 Manrao E A， Derrington I M， Laszlo A H， Langford K W， Hopper M K， Gilgren N， Pavlenok M， Niederweis M， Gundlach J H. Nat. Biotechnol.， 2012， 30（4）： 349-353

8 Chen X， Roozbahani G M， Ye Z， Zhang Y， Ma R， Xiang J， Guan X. ACS Appl. Mater. Interfaces， 2018， 10（14）： 11519-11528

9 Wang Y， Yan S， Zhang P， Zeng Z， Zhao D， Wang J， Chen H， Huang S. ACS Appl. Mater. Interfaces， 2018， 10（9）： 7788-7797

10 CAO Chan， LIAO Dong-Fang， YING Yi-Lun， LONG Yi-Tao. Acta Chimica Sinica， 2016， 74（9）： 734-737

曹 嬋， 廖冬芳， 應(yīng)佚倫， 龍億濤. 化學(xué)學(xué)報(bào)， 2016， 74（9）： 734-737

11 Rauf S， Zhang L， Ali A， Ahmad J， Liu Y， Li J. Anal. Chem.， 2017， 89（24）： 13252-13260

12 Tan S， Gu D， Liu H， Liu Q. Nanotechnology， 2016， 27（15）： 155502

13 Li J， Hu R， Li X Q， Tong X， Yu D P， Zhao. Electrophoresis， 2017， 38： 1130-1138

14 Kennedy E， Dong Z， Tennant C， Timp G. Nat. Nanotechnol.， 2016， 11（11）： 968-976

15 Zhang H， Tian Y， Jiang L. Nano Today， 2016， 11（1）： 61-81

16 Fyta M. J. Phys. Condens. Matter Inst. Phys. J.， 2015， 27（27）： 273101

17 Feng Y， Zhang Y， Ying C， Wang D， Du C. Genomics Proteomics Bioinformatics， 2015， 13（3）： 4-16

18 Schneider G F， Dekker C. Nat. Biotechnol.， 2012， 30： 326-328

19 Movileanu L. Protein Pept. Lett.， 2014， 21（3）： 235-246

20 Liu Z， Wang Y， Deng T， Chen Q. J. Nanomater.， 2016： 1-13

21 Ying Y L， Li D W， Liu Y， Dey S K， Kraatz H B， Long Y T. Chem. Commun.， 2012， 48（70）： 8784-8786

22 Zhao Q， Jayawardhana D A， Wang D， Guan X. J. Phys. Chem. B， 2009， 113（11）： 3572-3578

23 Talaga D S， Li J. J. Am. Chem. Soc.， 2009， 131（26）： 9287-9297

24 Movileanu L. Soft Matter.， 2008， 4（5）： 925

25 Mereuta L， Roy M， Asandei A， Lee J K， Park Y， Andricioaei I， Luchian T. Sci. Rep.， 2015， 4： 3885

26 Waduge P， Hu R， Bandarkar P， Yamazaki H， Cressiot B， Zhao Q， Whitford P C， Wanunu M. ACS Nano， 2017， 11（6）： 5706-5716

27 Liao D F， Cao C， Ying Y L， Long Y T. Small， 2011， 7（1）： 87

28 HU Zhen-Li， DU Ji-Hui， YING Yi-Lun， PENG Yue-Yi， CAO Chan， LONG Yi-Tao. Acta Chimica Sinica， 2017， 75（11）： 1087-1090

胡正利， 杜冀暉， 應(yīng)佚倫， 彭岳一， 曹 嬋， 龍億濤. 化學(xué)學(xué)報(bào)， 2017， 75（11）： 1087-1090

29 Ying Y L， Wang H Y， Sutherland T C， Long Y T. Small， 2018， doi：101002/smll.201704520

30 Ying Y L， Zhang J J， Gao R， Long Y T. Angew. Chem. Int. Ed. 2013， 52（40）： 13154

31 YING Yi-Lun， ZHANG Xing， LIU Yu， XUE Meng-Zhu， LI Hong-Lin， LONG Yi-Tao. Acta Chimica Sinica， 2013， 71（1）： 44-50

應(yīng)佚倫， 張 星， 劉 鈺， 薛夢竹， 李洪林， 龍億濤. 化學(xué)學(xué)報(bào)， 2013， 71（1）： 44-50

32 Kakish J， Tavassoly O， Lee J S. ACS Chem. Neurosci.， 2015， 6（2）： 347-355

33 Zhang Y， Chen Y， Fu Y Q， Ying C F， Feng Y X， Huang Q M， Pei D S， Wang D Q. Sci. Rep.， 2016， 6： 27959

34 Kakish J， Lee D， Lee J S. ACS Chem. Neurosci.， 2015， 6（12）： 1930-1940

35 Zhai Q， Wang J， Jiang H， Wei Q， Wang E. Talanta， 2015， 140（1）： 219-225

36 Liu G， Zhang L， Dong D， Liu Y， Li J. Anal. Methods， 2016， 8（39）： 7040-7046

37 Wang G， Wang L， Han Y， Zhou S， Guan X. Biosens. Bioelectron.， 2014， 53（9）： 453-458

38 Wang G， Zhao Q， Kang X， Guan X. J. Phys. Chem.， 2013， 117（17）： 4763-4769

39 Yang J， Li S， Wu X Y， Long Y T. Chin. J. Anal. Chem.， 2017， 45（12）： 1766-1775

40 Zhang L， Zhang K， Liu G， Liu M， Liu Y， Li J. Anal. Chem.， 2015， 87（11）： 5677-5682

41 Wang H Y， Gu Z， Cao C， Wang J， Long Y T. Anal. Chem.， 2013， 85（17）： 8254-8261

42 Laszlo A H， Derrington I M， Brinkerhoff H， Langford K W， Nova I C， Samson J M， Bartlett J J， Pavlenok M， Gundlach J H. Proc. Natl. Acad. Sci. USA， 2013， 110（47）： 18904-18909

43 Wang L， Han Y， Zhou S， Guan X. Biosens. Bioelectron.， 2014， 62（5）： 158-162

44 Wang Y， Zhang Y， Guo Y， Kang X. Sci. Rep.， 2017， 7（1）： 183

45 Wang Y， Montana V， Grubisic V， Stout R F Jr， Parpura V， Gu L Q. ACS Appl. Mater. Interfaces， 2015， 7（1）： 184-192

46 Apetrei A， Ciuca A， Lee J K， Chang H S， Park Y， Luchian T. Nanoscale Res. Lett.， 2016， 11： 501

47 Wen S， Zeng T， Liu L， Zhao K， Zhao Y， Liu X， Wu H C. J. Am. Chem. Soc.， 2011， 133（45）： 18312-18317

48 Braha O， Gu L Q， Zhou L， Lu X， Cheley S， Bayley H. Nat. Biotechnol.， 2000， 18（9）： 1005-1007

49 Yang C， Liu L， Zeng T， Yang D， Yao Z， Zhao Y L， Wu H C. Anal. Chem.， 2013， 85（15）： 7302-7307

50 Wang L， Han Y， Zhou S， Wang G， Guan X. ACS Appl. Mater. Interfaces， 2014， 6（10）： 7334-7339

51 Han Y， Zhou S， Wang L， Guan X. Electrophoresis， 2015， 36（3）： 467-470

52 Guan X， Gu L Q， Cheley S， Braha O， Bayley H. ChemBioChem， 2005， 6（10）： 1875-1881

53 Gupta J， Zhao Q， Wang G， Kang X， Guan X. Sens. Actuators B， 2013， 176（6）： 625-631

54 Gu L Q， Ding S， Gao C. Conf. Proc. IEEE Eng. Med. Biol. Soc.， 2009： 6699-6702

55 Wu H， Chen Y， Zhou Q， Wang R， Xia B， Ma D， Luo K， Liu Q. Anal. Chem.， 2016， 88（4）： 2502-2510

56 Wang D， Zhao Q， Zoysa R S S de， Guan X. Sens. Actuators B， 2009， 139（2）： 440-446

57 Dixon T C， Meselson M， Guillemin J， Hanna P C. N. Engl. J. Med.， 1999， 341： 815-826

58 Santelli E， Bankston L A， Leppla S H， Liddington R C. Nature， 2004， 430（7002）： 905-908

59 Enserink M. Science， 2001， 294（5542）： 490-491

60 Bohannon J. Science， 2003， 300（5618）： 414-415

61 Foudeh A M， Fatanat Dida， T， Veres T， Tabrizian M. Lab Chip， 2012， 12（18）： 3249-3266

62 World Health Organization：Geneve. World Health Organization. The Global Burden of Disease： 2004 Update， 2008

63 De Medici D， Anniballi F， Wyatt G M， Lindstrom M， Messelhausser U， Aldus C F， Delibato E， Korkeala H， Peck M W， Fenicia L. Appl. Environ. Microbiol.， 2009， 75（20）： 6457-6461

64 Hatheway C L. Clin. Microbiol. Rev.， 1990， 3： 66-98

65 Rossetto O， Pirazzini M， Montecucco C. Nat. Rev. Microbiol.， 2014， 12（8）： 535-549

66 Wang H Y， Ying Y L， Li Y， Kraatz H B， Long Y T. Anal. Chem.， 2011， 83（5）： 1746-1752

67 Stoytcheva M， Zlatev R， Cosnier S， Arredondo M. Electrochim. Acta， 2012， 76（8）： 43-47

68 Kukwikila M， Howorka S. Anal. Chem.， 2015， 87（18）： 9149-9154

69 Kukwikila M， Howorka S. J. Phys. Condens. Matter Inst. Phys. J.， 2010， 22（45）： 454103

70 Macrae M X， Blake S， Jiang X， Capone R， Estes D J， Mayer M， Yang J. ACS Nano， 2009， 3（11）： 3567-3580

71 Zhou S， Wang L， Chen X， Guan X. ACS Sens.， 2016， 1（5）： 607-613

72 Zhao Q， deZoysa R S S， Wang D， Jayawardhana D A， Guan X. J. Am. Chem. Soc.， 2009， 131（18）： 6324-6325

73 Fox B S， Kantak K M， Edwards M A， Black K M， Bollinger B K， Botka A J， French T L， Thompson T L， Schad V C， Greenstein J L， Gefter M L， Exley M A， Swain P A， Briner T J. Nat. Med.， 1996， 2： 1129-1132

74 Rauf S， Zhang L， Ali A， Liu Y， Li J. ACS Sens.， 2017， 2（2）： 227-234

75 Kawano R， Osaki T， Sasaki H， Yoshizawa S， Takeuchi S. J. Am. Chem. Soc.， 2011， 133（22）： 8474-8477

76 Chopra I， Roberts M. Microbiol. Mol. Biol. Rev.， 2001， 65（2）： 232-260

77 Sum P E， Sum F W， Projan S J. Curr. Pharm. Des.， 1998， 4（2）： 119-132

78 Chen Y， Kong D， Liu L， Song S， Kuang H， Xu C. Food Anal. Method. 2016， 9（4）： 905-914

79 Yu L， Yang H， Yang S， Hu Q， Cheng H， Liu H， Qiu Y. J. Chromatogr. B， 2013， 917-918： 11-17

80 Culver J N. Annu. Rev. Phytopathol.， 2002， 40（1）： 287-308

Abstract As a novel analytical method， nanopore sensing is widely applied in many fields such as nucleic acids sequencing， protein/peptide analysis， detection of metal ions and biomacromolecules including virus， bacteria， etc. With the growing public concerns over dietary safety and public security， there has been a greater demand on the detection of toxic molecules. With its high sensitivity and selectivity， nanopore sensing is considered as a more powerful assay， which has been reported in many research articles. Accordingly， this paper surveys the application studies of nanopore sensing in detection of toxic molecules.

Keywords Nanopore technology； Single-molecule sensing； Toxic molecules； Sensitivity； Selectivity； Review

（Received 26 March 2018； accepted 8 May 2018）