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強生干化學分析儀開放通道檢測血清淀粉樣蛋白A的性能驗證

2018-11-06 03:20尚陳宇萬澤民柯培鋒
現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志 2018年5期
關(guān)鍵詞:精密度準確度廠家

黃 迪,尚陳宇,萬澤民,柯培鋒

(廣東省中醫(yī)院檢驗科,廣州 510120)

血清淀粉樣蛋白A(serum amyloid A,SAA)是一種十分敏感的急性時相反應蛋白,在炎性反應中的濃度會比健康狀況下增加1 000倍[1]。SAA可與白細胞計數(shù)(WBC)、C反應蛋白(CRP)、降鈣素原(PCT)等聯(lián)合檢測,多用于門急診病人感染的鑒別診斷。近年來呼吸系統(tǒng)感染每年均有暴發(fā)出現(xiàn)的情況,臨床對該指標越來越重視。SAA試劑盒一般搭載在檢驗科用于急診檢測的設備上。Ortho干式生化分析儀是美國強生公司生產(chǎn)的臨床實驗室檢測設備,主要用于臨床生化、免疫學的常規(guī)或急診檢測。Vitros 5.1 FS是該公司近年來推出的首款配備有“濕化學”檢測通道的全自動生化免疫一體機。本實驗擬在該款儀器進行SAA檢測,本文將對其開放通道裝載國產(chǎn)SAA試劑的檢測性能進行分析、探討,以期在我院開展該項目并進行后期科學研究。

1 材料與方法

1.1 標本來源 采集于廣東省中醫(yī)院住院、門急診患者及體檢合格的健康人標本,分離膠或肝素鋰抗凝,離心后獲取無溶血、無脂濁的血清或血漿。所有血清或血漿分管至潔凈、干燥的分裝管中,僅保留性別、年齡與結(jié)果數(shù)據(jù),確保無法追蹤受檢者其他信息。

1.2 儀器與試劑 美國強生Vitros 5.1 FS全自動生化免疫分析儀(簡稱Vitros 5.1)。寧波普瑞柏生物技術(shù)公司膠乳增強免疫比濁法SAA檢測試劑盒及配套稀釋液、校準品和質(zhì)控液。

1.3 方法

1.3.1 精密度驗證:參考NCCLS EP15-A2文件要求[2]。原裝兩種濃度質(zhì)控品,每天采用相同操作各復融1支,連續(xù)檢測5天。每天每個濃度檢測3次,獲得兩種濃度質(zhì)控品檢測數(shù)據(jù)各15個,根據(jù)公式計算總均值、S批內(nèi)、S總和驗證值[3]。

V=D×(n-1)

其中V為自由度,C為根據(jù)自由度和測定的濃度水平數(shù)查分布表所得百分位點;

其中T為自由度。

建立Levey-Jennings質(zhì)控圖,每天進行室內(nèi)質(zhì)控監(jiān)測。根據(jù)Westgard設定失控規(guī)則,只有在當天質(zhì)控在控的情況下,實驗數(shù)據(jù)才有效。

1.3.2 準確度驗證:參照衛(wèi)生部WS/T 420-2013比較試驗[4]的方法進行評估。選取20份不同濃度的患者血漿標本,要求覆蓋該試劑盒聲明的線性范圍。分別在Vitros 5.1和另一溯源至參考物質(zhì)的檢測儀器進行檢測。兩組檢測結(jié)果進行相關(guān)與回歸分析。

1.3.3 線性范圍驗證:參照衛(wèi)生部WS/T 408-2012線性評價[5]指南進行評估。根據(jù)廠家提供的理論線性范圍,選取一份接近上限的高值標本H(92.59 mg/L)和一份接近下限的低值標本L(5.99 mg/L),使用專用稀釋液,按照一定比例混合10個濃度(1H+9L,2H+8L,3H+7L,4H+6L,5H+5L,6H+4L,7H+3L,8H+2L,9H+1L,H),每個混合物重復檢測2次(取均值),以X表示各樣本的理論預期值,以Y表示各樣本的實測值,進行線性擬合及差異限分析。

1.3.4 最大稀釋倍數(shù)驗證試驗[6]:選擇在分析測量范圍(AMR)上限附近的樣品,以專用稀釋液進行2,4,6,8,10倍稀釋,依據(jù)系列稀釋濃度計算各系列樣品的分析物濃度的預期值。比較各個稀釋度樣品的檢測值和預期值,分別計算比值(R=檢測值/預期值)。廠家要求為R≥85%,R<85%的相應稀釋度為不可接受稀釋度,其上一級別的稀釋度即為該測試的最大稀釋度。

1.3.5 生物參考區(qū)間驗證:挑選1~62歲,男女比例大致相等且無基礎(chǔ)疾病、表觀健康的體檢樣本共23份為參考個體。統(tǒng)計各參考個體檢測值,與試劑說明書參考區(qū)間比較,計算比率(r=檢測值在引用參考區(qū)間的參考個體數(shù)/總的參考個體數(shù))。若r≥90%,則驗證結(jié)果可以接受。

1.4 統(tǒng)計學分析 線性擬合采用Excel軟件進行,相關(guān)及回歸分析、個體分布頻率采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進行分析。

2 結(jié)果

2.1 精密度驗證 見表1。批間精密度和總重復性均小于廠家聲明范圍,驗證通過。

表1精密度驗證結(jié)果

2.2 準確度驗證 見表2。本實驗室與對照實驗室比對結(jié)果見圖1。部分診斷切點水平相對誤差值(TE%)。

表2部分診斷切點水平相對誤差值

圖1 準確度驗證結(jié)果

2.3 線性范圍 測量結(jié)果及偏差見表3。目測理論值與實測值呈直線相關(guān),進行二元一次擬合見圖2。

2.4 最大稀釋倍數(shù) 見表4。 5個稀釋梯度的R比值均大于廠家要求,最大稀釋倍數(shù)可驗證至10倍。

表3線性范圍驗證數(shù)據(jù)表

表4梯度稀釋測定結(jié)果

2.5 參考區(qū)間驗證 廠家推薦參考區(qū)間為0~10 mg/L。23例健康個體中有22例檢測結(jié)果在廠家聲明的參考區(qū)間之內(nèi),1例超出。檢測結(jié)果分布見圖3。r=95.7%,表明參考區(qū)間驗證結(jié)果可以接受。

圖2 線性擬合

圖3 參考個體結(jié)果分布圖

3 討論

SAA屬于載脂蛋白家族中的異質(zhì)類蛋白質(zhì),相對分子質(zhì)量約12 000。在急性時相反應中,經(jīng)IL-1,IL-6和腫瘤壞死因子(TNF)等細胞因子刺激,在肝臟中合成,炎性反應時SAA可與高密度脂蛋白(HDL)結(jié)合,形成SAA/HDL復合體,這使得其對巨噬細胞的親和力增加2~3倍,調(diào)節(jié)HDL的代謝,對炎癥細胞產(chǎn)生趨化作用[7]。文獻報道,聯(lián)合檢測SAA和CRP等指標對感染性疾病的鑒別診斷有意義[8~10]。另外,近年來的流行病學研究發(fā)現(xiàn),肥胖、糖尿病、心血管疾病和其他代謝綜合癥等患者SAA亦顯著增高[11,12]。按《醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》和醫(yī)學實驗室ISO 15189《醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則》的要求,新的檢測系統(tǒng)或指標進行常規(guī)工作前應對其分析性能進行驗證,以滿足預期要求[13]。干式生化分析儀無需純水,不產(chǎn)廢液,使得其在臨床實驗室常規(guī)檢測中有著獨特優(yōu)勢。但也正因如此,限制了其臨床應用范圍。Vitros 5.1配備有“濕化學”檢測通道,在一定程度上彌補了這一不足,使得市面上質(zhì)優(yōu)價廉的液體試劑用于干式生化儀檢測成為可能。普瑞柏公司生產(chǎn)的SAA試劑,采用兩點終點比濁法進行檢測,已在部分知名品牌生化分析儀上使用,本次實驗是該公司在干式生化分析儀上進行的首次嘗試,對其他有意愿使用該試劑的實驗室有一定的參考價值。Vitros 5.1加樣、吸試劑以及比色均使用一次性耗材,有效避免了交叉污染和攜帶污染。所以本文僅進行了精密度、準確度、可報告范圍和生物參考區(qū)間驗證。

精密度是檢測系統(tǒng)最基本的分析性能,是其他分析性能評價的基礎(chǔ),其目的是分析實驗室內(nèi)檢測系統(tǒng)的精密度情況[14]。精密度不佳,其他性能指標無從談起。三大性能指標之二是準確度,準確度是指在一定實驗條件下多次測定的平均值與真實值相符合的程度,是測量結(jié)果中系統(tǒng)誤差(正確度)與隨機誤差(精密度)的綜合[15]。方法學比對試驗可以用于準確度驗證。美國臨床實驗室標準化委員會(CLSI)于2002年頒布的EP9-A2文件即《用患者樣本進行方法學比對及偏倚評估-批準指南》第二版,該指南詳細介紹了比對的實驗方法[16]。線性范圍是另一個很重要的儀器及方法學性能指標,在一定區(qū)間內(nèi),其能提供測量結(jié)果與樣本中測量物的量值直接成比例,它允許對樣本進行稀釋、濃縮或其他預處理[17]。廠家聲明的批內(nèi)CV應≤8%,批間CV應≤10%,換算為標準差分別為S批內(nèi)≤1.43,S批內(nèi)≤3.81和S總低≤1.79,S總高≤4.76,本次實驗批間精密度和總重復性均符合要求,驗證通過。儀器說明書聲明的線性范圍為5~100 mg/L,在此范圍內(nèi)選取的高、低值樣本進行線性驗證。根據(jù)指南要求,若R2>0.990,則可初步判斷廠家提供的線性范圍符合要求;統(tǒng)計不同濃度處的值都在廠家聲稱的濃度誤差范圍內(nèi)(±10%),則可直接判斷測定方法在實驗所涉及的濃度范圍內(nèi)成線性。本次實驗R2=0.999 9,實測值與理論值偏差絕對值均<10%,本次線性驗證范圍為5.99~92.59 mg/L。最大稀釋倍數(shù)實驗5個梯度濃度的比值均≥85%,可認為本次試驗的最大稀釋倍數(shù)10倍也是可靠的。本次實驗通過以上性能指標的驗證實驗,表明該分析系統(tǒng)檢測能力能滿足臨床需求,可以用于實驗室常規(guī)標本檢測。通過對23例參考個體的檢測結(jié)果進行統(tǒng)計,也驗證了廠家說明書的參考區(qū)間(≤10 mg/L),實驗室可以采納。

我院臨床科室對SAA急診檢測的需求越來越迫切,本實驗室正式開展該項目后還需做進一步深入研究。

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